孫 晶，薛春玲

(1.山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 濟(jì)南 250000；2.沂南縣人民醫(yī)院，山東 臨沂 276300)

隨著我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展，人們的生活水平日益提高，一些慢性非傳染病悄然成為了威脅國(guó)民健康的主要因素，包括心血管疾病、糖尿病等。30多年來(lái)，我國(guó)成人糖尿病患病率顯著增加。1980年全國(guó)14省市30萬(wàn)人的流行病學(xué)資料顯示，糖尿病的患病率為0.67%。1994至1995年全國(guó)19省市21萬(wàn)人的流行病學(xué)調(diào)查顯示，25～64歲的糖尿病患病率為2.28%。2002年中國(guó)居民營(yíng)養(yǎng)與健康狀況調(diào)查同時(shí)進(jìn)行了糖尿病的流行情況調(diào)查，結(jié)果顯示在18歲以上的人群中，城市人口的糖尿病患病率為4.5%，農(nóng)村為1.8%。2007至2008年，CDS組織全國(guó)14個(gè)省市開(kāi)展了糖尿病流行病學(xué)調(diào)查，我國(guó)20歲及以上成年人的糖尿病患病率為9.7%。2010年中國(guó)疾病預(yù)防控制中心(CDC)和中華醫(yī)學(xué)會(huì)內(nèi)分泌學(xué)分會(huì)調(diào)查了中國(guó)18歲及以上人群糖尿病的患病情況，顯示糖尿病患病率為9.7%。2013年我國(guó)慢性病及其危險(xiǎn)因素監(jiān)測(cè)顯示，18歲及以上人群糖尿病患病率為10.4%。近些年，雖然糖尿病研究與防治工作得到了較大進(jìn)展，但相對(duì)于龐大的糖尿病人總數(shù)來(lái)說(shuō)還是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，我國(guó)在糖尿病的防治方面依舊面臨著巨大的挑戰(zhàn)。目前，臨床上治療糖尿病的藥物主要包括中藥和西藥兩大類。但是，多數(shù)中藥因其主要成分不足以降血糖，對(duì)糖尿病的控制效果有很大的局限性，而以胰島素、磺脲類、雙胍類為主的西藥為單一降糖藥，不能改善機(jī)體的其他機(jī)能，尤其對(duì)糖尿病并發(fā)癥基本沒(méi)有治療效果，而且都存在不同程度的副作用，因此尋找一種具有天然降血糖特性的食品資源，進(jìn)而分離純化并鑒定其藥理活性成分，開(kāi)發(fā)既具有顯著降血糖效果又沒(méi)有副作用的降血糖保健食品成為研究的熱點(diǎn)[1]。近些年，從動(dòng)植物等天然資源中發(fā)現(xiàn)，多糖類活性成分能降低糖尿病患者的血糖濃度，改善其癥狀，目前研究最多的具有降血糖活性的多糖包括植物多糖、真菌多糖和膳食纖維等。另外，研究還發(fā)現(xiàn)天然食品資源中所含有的某些維生素和礦物質(zhì)也具有降血糖活性[2]。本研究分別以膳食纖維多糖搭配礦物質(zhì)和中藥多糖搭配礦物質(zhì)組方，比較兩者的降血糖活性，同時(shí)研究膳食纖維和中藥多糖配伍的協(xié)同增效作用。

1 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種雄性小鼠，體重26±2g，購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

四氧嘧啶(用前新配)、葡萄糖、血糖儀、全自動(dòng)生化儀、分光光度計(jì)。

1.3 受試物

燕麥葡聚糖(廣州中康食品有限公司，批號(hào)2017070201，葡聚糖含量≥70%)、殼寡糖(山東衛(wèi)康生物醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)161120-02，脫乙酰度≥85%)、黃精提取物(宣城百草藥業(yè)有限公司，批號(hào)2017120203，多糖含量≥15%)、桑葉提取物(宣城百草藥業(yè)有限公司，批號(hào)2017080801，多糖含量≥10%)、苦瓜提取物(宣城百草藥業(yè)有限公司，批號(hào)2017082303，苦瓜多糖≥10%)、富鉻酵母(安琪酵母股份有限公司，批號(hào)161123，2000ppm)。復(fù)配樣品均采用上述來(lái)源原輔料混勻制成。

2 實(shí)驗(yàn)步驟

2.1 依據(jù)

試驗(yàn)參照國(guó)食藥監(jiān)保化[2012]107號(hào)《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評(píng)價(jià)方法等9個(gè)保健功能評(píng)價(jià)方法的通知》“附件 3輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.2 正常動(dòng)物降糖實(shí)驗(yàn)

選取健康小鼠60只，自由飲食1w，測(cè)定基礎(chǔ)血糖值，根據(jù)血糖水平隨機(jī)選取20只，作為正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組灌胃劑量按“受試物給予方式”中“劑量Ⅲ組”進(jìn)行，對(duì)照組給予等體積去離子水。

2.3 造模

其余40只小鼠禁食24h后，用生理鹽水配制1%四氧嘧啶按100mg/kg·bw進(jìn)行腹腔注射，1h后恢復(fù)正常采食和飲水，7d后禁食5h，測(cè)定血糖，血糖值為10～25mmol/L，則高血糖小鼠造模成功。

2.4 受試物給予方式

選擇造模成功的小鼠40只，根據(jù)血糖水平，分為模型對(duì)照組、劑量Ⅰ組、劑量Ⅱ組、劑量Ⅲ組，劑量Ⅰ組灌胃燕麥葡聚糖、殼寡糖、富鉻酵母，劑量Ⅱ組灌胃黃精提取物、桑葉提取物、苦瓜提取物、富鉻酵母，劑量Ⅲ組灌胃燕麥葡聚糖、殼寡糖、黃精提取物、桑葉提取物、苦瓜提取物、富鉻酵母，每組10只，連續(xù)灌胃30d，模型對(duì)照組給予去離子水，給藥體積均為20mL/kg·bw。受試物人體推薦劑量：燕麥葡聚糖3.3g/60kg·bw,殼寡糖0.48g/60kg·bw，黃精提取物0.36g/60kg·bw，桑葉提取物0.3g/60kg·bw，苦瓜提取物0.23g/60kg·bw，富鉻酵母60mg/60kg·bw(折合鉻0.12mg)。不同實(shí)驗(yàn)組小鼠分別按各原料人體推薦量的10倍制備樣品，灌胃給予小鼠，實(shí)驗(yàn)期4周。

2.5 測(cè)定指標(biāo)

每周測(cè)定一次小鼠體重，同時(shí)尾部采血測(cè)定空腹5h后血糖值，觀察各組動(dòng)物空腹血糖值；取尾血后小鼠繼續(xù)灌胃各劑量組受試物，模型對(duì)照組灌胃去離子水，20min后各組小鼠經(jīng)口給予葡萄糖2.0g/kg·bw,測(cè)定給葡萄糖后各組小鼠0.5、2小時(shí)的血糖值，觀察各實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組給予葡萄糖各時(shí)間點(diǎn)的血糖值及血糖曲線下面積。

3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

采用方差進(jìn)行分析，比較各組數(shù)據(jù)的顯著性。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

表1 對(duì)正常小鼠體重的影響

表2 對(duì)正常小鼠血糖的影響

由表1、表2可知，正常小鼠按劑量Ⅲ組灌胃給予燕麥葡聚糖、殼寡糖、黃精提取物、桑葉提取物、苦瓜提取物、富鉻酵母30d后，其體重和空腹血糖值與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表3 對(duì)糖尿病小鼠的體重的影響

由表3可知，實(shí)驗(yàn)期間，各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重與模型對(duì)照組比較，差異均無(wú)顯著性(P>0.05)。

表4 對(duì)糖尿病小鼠血糖的影響

與模型對(duì)照組比較，* P<0.05，** P<0.01，下同。

由表4可知，實(shí)驗(yàn)期間，模型對(duì)照組小鼠空腹血糖一直維持在較高水平，三個(gè)劑量組與模型對(duì)照組比較，血糖值均下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，劑量Ⅰ組、劑量Ⅱ組血糖值與模型對(duì)照組比較，下降具有顯著性(P<0.05)，劑量Ⅲ組與模型對(duì)照組比較，下降具有極顯著性(P<0.01)。

表5 對(duì)糖尿病小鼠糖耐量的影響

由表5可知，分別灌胃給予不同受試物30d后，三個(gè)劑量組血糖曲線下面積均明顯低于模型對(duì)照組，且差異具有顯著性(P<0.05或P<0.01)。

5 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立高血糖小鼠模型來(lái)驗(yàn)證不同功效成分保健食品原料的降血糖作用，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，三個(gè)劑量組對(duì)正常小鼠體重、空腹血糖及高血糖小鼠體重均無(wú)明顯影響(P>0.05)；三個(gè)劑量組均可明顯降低高血糖小鼠空腹血糖值及血糖曲線下面積，差異具有顯著性或極顯著性(P<0.05或P<0.01)。證明，三個(gè)劑量組樣品均具有降血糖的作用，且劑量Ⅲ組樣品的降血糖作用優(yōu)于劑量Ⅰ組和劑量Ⅱ組，證明膳食纖維多糖、中藥多糖與鉻共同配伍還具有協(xié)同增效作用。