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(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所麗水研究中心,浙江麗水 323000;2.麗水市林業(yè)科學(xué)研究院，浙江麗水 323000；3.浙江維康藥業(yè)股份有限公司,浙江麗水 323000)

高脂血癥(hyperlipidemia,HLP)是動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管疾病等發(fā)病的主要誘因[1],并呈年輕化趨勢(shì),嚴(yán)重威脅人類的健康和生命。中醫(yī)認(rèn)為,產(chǎn)生高脂血癥的原因除了飲食不當(dāng),膽固醇、飽和脂肪酸攝入較多外[2],中年以后腎氣漸衰,肝陽(yáng)上亢,脾胃輸布功能失調(diào),濕熱郁結(jié),痰濁內(nèi)生是主要病因。西藥降血脂副作用比較大,因此利用中草藥降血脂一直備受關(guān)注。以制何首烏、枸杞子、黃精、山楂復(fù)方提取物為主要成分的降脂靈片,具有補(bǔ)肝益腎、養(yǎng)血明目功效,用于肝腎不足型高血脂癥[3];復(fù)方青錢(qián)柳茶水提取物可顯著降低血清總膽固醇TC、血清甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)[4];精制山荷降脂方對(duì)高脂血癥具有顯著的治療效果[5]。

復(fù)方多花黃精沖劑以多花黃精為主藥,以枸杞、荷葉、山楂、決明子4種藥食同源藥材為輔藥。多花黃精為中藥材黃精基源植物之一,具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、益腎、健脾、潤(rùn)肺等功效,可用于脾胃氣虛、胃陰不足、肺虛燥咳、勞嗽咳血、精血不足、腰膝酸軟、須發(fā)早白、內(nèi)熱消渴等[3],其化學(xué)成分主要為黃精多糖、甾體皂苷等[6],具有抗腫瘤[7]、降血脂[8]、抗病毒[8]、抗艾滋病[9-10]、抗炎[11]、提高學(xué)習(xí)記憶能力[12]等藥理活性;枸杞子養(yǎng)肝、滋腎、潤(rùn)肺,與黃精配伍降脂效果明顯[13];荷葉有清暑利濕、升發(fā)清陽(yáng)、涼血止血等功效,降血脂、降膽固醇和減肥作用顯著[14];山楂消食健胃、化濁降脂,與決明子按一定比例3∶1脂效果最好[15]。該配方具有補(bǔ)肝、益腎、健胃、祛濕等功效,克服了多花黃精滋膩助濕之弊,民間臨床已有應(yīng)用,降脂效果非常明顯,但無(wú)現(xiàn)代藥理學(xué)理論支撐。因此,對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的藥理作用研究,闡明其藥理作用及機(jī)制,具有十分重要的意義。

本試驗(yàn)采用高血脂大鼠模型,評(píng)價(jià)復(fù)合多花黃精提取物對(duì)大鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的影響,為其產(chǎn)品的深度開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

總膽固醇測(cè)定試驗(yàn)劑盒(批號(hào)07284/00002745)、甘油三酯測(cè)定試劑盒(批號(hào)07258/00002453)、高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試驗(yàn)劑盒(批號(hào)21052/00002947)和低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試驗(yàn)劑盒(批號(hào)21550/00002950) 德國(guó)DiaSys Diagnostic Systems GmbH(進(jìn)口分裝);膽固醇(批號(hào)Z95506)和膽酸鈉(批號(hào)C5654) 山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司;白砂糖(批號(hào)20140610) 杭州雅麗食品有限公司;辛伐他汀(20 mg/片,批號(hào)M016763) 杭州默沙東制藥有限公司;SD大鼠雄性,清潔級(jí),體重(206.0±10.3) g 浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(浙)2014-0001);多花黃精、荷葉、枸杞子、山楂和決明子 浙江維康藥業(yè)股分有限公司;大鼠全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料 浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

日立7020全自動(dòng)生化分析儀 日本日立株式會(huì)社;YJ501S超級(jí)恒溫水槽 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠;L-550離心機(jī) 長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 復(fù)方多花黃精混合提取物(FHT)的制備 FHT由麗水市林業(yè)科學(xué)研究院根據(jù)以下配方和優(yōu)化提取方法制得。配方:多花黃精,荷葉、枸杞子、山楂、決明子,藥材總量1360 g。其中:多花黃精、枸杞子采用水提,藥材共550 g,烘干,50目粉碎,浸泡30 min,加熱回流水提2 h,過(guò)濾,經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮(70 ℃,0.08 Mpa)至浸膏狀,轉(zhuǎn)置于60 ℃干燥箱干燥2.5～3.0 h,獲干浸膏粉99.78 g,黃精多糖含量約64.36%;荷葉、山楂、決明子利用醇提,藥材共810 g,烘干,100 目粉碎,酒精濃度75%下浸提2 h,過(guò)濾,經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮(50 ℃,0.08 Mpa)至浸膏狀,轉(zhuǎn)置于60 ℃干燥箱干燥2.0～2.5 h,,獲干浸膏粉134.71 g,荷葉堿含量0.3417 mg/g。提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮期間需適時(shí)調(diào)整控制壓強(qiáng)與蒸餾瓶旋轉(zhuǎn)速度。上述兩種干粉混合均勻,得到FHT 234.49 g,即1 g相當(dāng)于5.8 g生藥材。

1.2.2 造模及給藥方法 高血脂動(dòng)物模型建立:SD大鼠68只,飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi),溫度18～26 ℃,相對(duì)濕度50%～60%,光照明暗交替各12 h,通風(fēng)22次/h。大鼠按體重隨機(jī)分成2組,一組58只,用于高血脂動(dòng)物模型,給予定制的高脂飼料(維持飼料中添加20.0%蔗糖、15.0%豬油、1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉)喂養(yǎng)造模;另一組10只,為空白組,給予大鼠全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料。每周稱體重1次。造模大鼠給予高脂飼料第一周后,各組大鼠眼內(nèi)眥采血,采血后盡快分離血清,測(cè)定血清TC、TG水平。剔除3只血清TG水平低于空白組平均TG水平的大鼠后,將55只模型大鼠用于降血脂試驗(yàn)。

給藥方法:55只造模大鼠按血清總膽固醇水平隨機(jī)分成5組,分別為黃精混提物高、中、低劑量組,辛伐他汀陽(yáng)性組,模型組。另10只空白組(對(duì)照)繼續(xù)保留。分組后,黃精混提物高、中、低劑量組每天經(jīng)口給予黃精混提物30、15、7.5 g生藥/kg,“生藥”均為原藥材的量,指按照FHT制備后換算成生藥材的量;辛伐他汀陽(yáng)性組每天經(jīng)口給予辛伐他汀2 mg/kg,給藥體積均為1.5 mL/100 g體重,模型組和空白組給予等體積蒸餾水,連續(xù)給予42 d。空白組繼續(xù)給予大鼠全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料,模型組、陽(yáng)性組、黃精混提物高、中、低劑量組繼續(xù)給予高脂飼料。血清生化測(cè)定在給藥1 h后進(jìn)行,各大鼠眼內(nèi)眥采血,采血后盡快分離血清,測(cè)定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C。

FHT配制:取345 g FHT藥粉,加蒸餾水至1000 mL配成0.345 g/mL溶液,用于高劑量組給藥,對(duì)倍稀釋后的藥液用于中劑組給藥,再對(duì)倍稀釋后的藥液用于低劑量組給藥。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo) 每周記錄大鼠體重1次;采用全自動(dòng)生化分析儀每?jī)芍軠y(cè)量血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平1次。

1.3數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均用SPSS 16.0軟件進(jìn)行。計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。計(jì)量資料進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)和方差分析。組間對(duì)比分析用單因素方差分析方法(ANOVA),組間先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),以0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。方差齊時(shí),多個(gè)試驗(yàn)組之間的相互比較用LSD檢驗(yàn);方差不齊時(shí)先對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)變換,再對(duì)變換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。如變換后的數(shù)據(jù)仍不符合方差齊性要求,改用非參數(shù)兩個(gè)獨(dú)立樣本(Nonparametric test-2 independent samples)的mann-whitney-U檢驗(yàn)。p<0.05時(shí)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方多花黃精混提物對(duì)大鼠體重的影響

黃精混提物對(duì)大鼠體重的影響結(jié)果見(jiàn)表1。試驗(yàn)過(guò)程中,給藥第五周辛伐他汀陽(yáng)性組有1只大鼠死亡,死亡原因不明。各組大鼠每周體重原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求(p>0.05)。各組大鼠體重與模型組比較的均值差經(jīng)LSD檢驗(yàn),黃精混提物高、中、低劑量組對(duì)大鼠體重均沒(méi)有顯著影響(p>0.05),辛伐他汀陽(yáng)性組于給藥第二周體重顯著低于模型組(p<0.05),其它各時(shí)間點(diǎn)與模型組比較無(wú)顯著差異(p>0.05)。由此可見(jiàn),黃精混提物在降低血脂的同時(shí),并未對(duì)大鼠體重造成顯著影響。

表1 黃精混提物對(duì)大鼠體重的影響Table 1 Effects ofPolygonatum cyrtonemaprescription extracton body weight of

2.2 分組后各組大鼠血清TC、TG水平

分組后各組大鼠血清TC、TG水平結(jié)果見(jiàn)表2。分組后各組大鼠血清TC原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求(p>0.05)。經(jīng)LSD檢驗(yàn),模型組大鼠血清TC水平極顯著高于空白組(p<0.01),說(shuō)明模型成立;模型組與各給藥組比較均無(wú)顯著差異(p>0.05),說(shuō)明分組合理。經(jīng)LSD檢驗(yàn),分組后各組大鼠血清TG原始數(shù)據(jù)不符合方差齊性要求(p<0.05),對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行平方根變換后符合方差齊性要求,變換后模型組大鼠血清TG數(shù)據(jù)極顯著高于空白組(p<0.01),說(shuō)明模型成立;模型組與各給藥組間均無(wú)顯著差異(p>0.05),說(shuō)明分組合理。

表2 分組后各組大鼠血清TC、TG水平Table 2 The level of serum TC and TG in each group after

2.3 復(fù)方多花黃精混提物對(duì)大鼠TC水平的影響

黃精混提物對(duì)高血脂大鼠TC的影響結(jié)果見(jiàn)表3。各組大鼠給藥后第二周、第四周、第六周TC原始數(shù)據(jù)均符合方差齊性要求(p>0.05)。給藥二周后,黃精混提物高劑量組TC顯著低于模型組(p<0.05),辛伐他汀陽(yáng)性組和空白組TC極顯著低于模型組(p<0.01)。給藥四周后,辛伐他汀陽(yáng)性組和空白組TC極顯著低于模型組(p<0.01),黃精混提物高劑量組、中劑量組TC顯著低于模型組(p<0.05)。給藥第六周后,黃精混提物高、中劑量組TC均極顯著低于模型組(p<0.01)，而低劑量組顯著低于模型組(p<0.05),辛伐他汀陽(yáng)性組TC極顯著低于模型組(p<0.01)。說(shuō)明黃精混提物30 g生藥/kg和15 g生藥/kg均能顯著降低TC水平。中醫(yī)認(rèn)為,腎氣不足、肝陽(yáng)上亢、脾胃功能失調(diào)、濕熱郁結(jié)是引起高血脂的主要病因[2]。民間臨床用于降低血脂的復(fù)方黃精配方由黃精、枸杞子、荷葉、山楂、決明子5味藥材組成,本試驗(yàn)證實(shí)了此配方降低血脂的效果。

表3 黃精混提物對(duì)高血脂大鼠TC的影響Table 3 Effects of Polygonatum cyrtonema prescription extract on serum cholesterol in hyperlipidemic

2.4 復(fù)方多花黃精混提物對(duì)大鼠血清TG水平的影響

黃精混提物對(duì)高血脂大鼠血清TG的影響結(jié)果見(jiàn)表4。各組大鼠第二周、第四周、第六周血清TG原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求(p>0.05)。給藥二周后,辛伐他汀陽(yáng)性組和空白組血清TG極顯著低于模型組(p<0.01),黃精混提物高劑量組、中劑量組血清TG與模型組之間均有極顯著差異(p<0.01)。給藥第四周后,空白組及辛伐他汀陽(yáng)性組血清TG極顯著低于模型組(p<0.01),黃精沖劑高劑量組、中劑量組血清TG均顯著低于模型(p<0.05)。給藥第六周后,黃精混提物高、中劑量組、辛伐他汀陽(yáng)性組、空白組血清TG均極顯著低于模型組(p<0.01)。說(shuō)明黃精混提物30 g生藥/kg和15 g生藥/kg均能顯著降低血清TG水平。本實(shí)驗(yàn)選用的是混合型高脂血癥動(dòng)物模型,對(duì)動(dòng)物體重影響不大。從表4可知,實(shí)驗(yàn)期間模型組和各給藥組大鼠血清TG水平均有所下降,可能與動(dòng)物的適應(yīng)性有關(guān),故高血脂動(dòng)物模型試驗(yàn)時(shí)間一般不超過(guò)8周。

表4 黃精混提物對(duì)高血脂大鼠血清TG的影響Table 4 Effects of polygonatum cyrtonema prescription extract on serum triglyceride in hyperlipidemic

2.5 復(fù)方多花黃精混提物對(duì)大鼠血清HDL-C水平的影響

黃精混提物對(duì)高血脂大鼠血清HDL-C水平的影響結(jié)果見(jiàn)表5。各組大鼠第二周、第四周、第六周血清HDL-C原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求(p>0.05)。給藥第二周后,辛伐他汀陽(yáng)性組HDL-C水平顯著高于模型組(p<0.05)。給藥第四周后,辛伐他汀陽(yáng)性組、空白組及黃精混提物高劑量組血清高密度脂蛋白均極顯著高于模型組(p<0.01),黃精混提物中劑量組血清HDL-C均顯著高于模型組(p<0.05)。給藥第六周后,黃精混提物高劑量組、辛伐他汀陽(yáng)性組及空白組血清HDL-C極顯著高于模型組(p<0.01),黃精混提物中、低劑量組與模型組比較沒(méi)有顯著差異(p>0.05)。說(shuō)明黃精混提物30 g生藥/kg能顯著升高血清HDL-C水平。

表5 黃精混提物對(duì)高血脂大鼠血清HDL-C水平的影響Table 5 Effects of Polygonatum cyrtonema prescription extract on serum high-density lipoprotein levels

2.6 復(fù)方多花黃精混提物對(duì)大鼠血清LDL-C水平的影響

黃精混提物對(duì)高血脂大鼠血清LDL-C水平的影響結(jié)果見(jiàn)表6。各組給藥第二周、第六周大鼠血清LDL-C原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求(p>0.05),各組給藥第四周大鼠血清LDL-C原始數(shù)據(jù)不符合方差齊性要求(p<0.05),原始數(shù)據(jù)經(jīng)平方根變換后符合方差齊性要求(p>0.05)。給藥第二周后,除空白組外,其它各給藥組血清LDL-C與模型組比較均沒(méi)有顯著差異(p>0.05)。給藥第四周后,黃精混提物高、中劑量組及空白組血清LDL-C均極顯著低于模型組(p<0.01),而辛伐他汀陽(yáng)性組顯著低于模型組(p<0.05)。給藥第六周后,黃精混提物高劑量組、辛伐他汀陽(yáng)性組和空白組LDL-C與模式組之間均有顯著差異(p<0.05)。說(shuō)明黃精混提物30 g生藥/kg能顯著降低血清LDL-C水平。

表6 黃精混提物對(duì)高血脂大鼠血清LDL-C水平的影響Table 6 Effects of Polygonatum cyrtonema prescription extract on serum low density lipoprotein levels

3 結(jié)論

民間臨床用于降低血脂的復(fù)方黃精配方由黃精、枸杞子、荷葉、山楂、決明子5味藥食同源藥材組成。本文制備了復(fù)方多花黃精配方的混提物,并通過(guò)高血脂大鼠模型評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn),復(fù)方多花黃精混提物(30 g生藥/kg和15 g生藥/kg組)從給藥第二周起就能明顯降低血清TG水平,給藥第四周后既能降低血清TG水平,也能降低TC水平和血清LDL-C水平,同時(shí)能明顯升高血清HDL-C水平,其部分指標(biāo)甚至優(yōu)于陽(yáng)性藥物降脂靈,說(shuō)明服用復(fù)方多花黃精混提物對(duì)高血脂人群是有益處的,也證實(shí)了民間復(fù)方黃精配方的降脂效果。