王宏偉，申玉華，姜英子

（1.延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林 延吉 133002；2.吉林省藥品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130033）

0 引言

中藥的化學(xué)成分?jǐn)?shù)目眾多，且各成分之間具有相互協(xié)同作用，在研究其有效性時(shí)，單一成分含量無法全面反映中藥產(chǎn)品質(zhì)量，多指標(biāo)含量測定模式已成為眾多專家學(xué)者的共識(shí)，傳統(tǒng)的多指標(biāo)含量測定要求種類繁多的對照品，一測多評法（一標(biāo)多測）可以解決對照品的瓶頸問題[1]。從2009 年到2018年9 月20 日，在中國知網(wǎng)上檢索到的相關(guān)文獻(xiàn)達(dá)570 余篇，其中有關(guān)藥材、飲片采用一測多評方法的文獻(xiàn)研究306 篇，成方制劑210 篇，其他59 篇。中國藥典收載的品種從1 個(gè)（2010 年版）增加到9 個(gè)（2015 年版），由此可見，該方法已然成為未來中藥質(zhì)量整體可控性的發(fā)展趨勢之一。

1 概述

1.1 原理

依據(jù)在一定的范圍（線性范圍）內(nèi)成分的量（濃度或質(zhì)量）與檢測器響應(yīng)成正比的原理，即W=fA，在多指標(biāo)質(zhì)量評價(jià)時(shí)，假設(shè)某樣品中含有i 個(gè)組分，fi=Wi/Ai（i=1，2，…，k，…，m），式中Ai 為組分峰面積，Wi 為組分濃度。選取其中的一個(gè)組分k為內(nèi)參物，建立組分k 與其他組分m 之間的相對校正因子fkm=fk/fm=Wk/Wm×（Am/Ak），由此可導(dǎo)出計(jì)算公式：Wm=Wk×Am/（fkm×Ak），其中Ak 為內(nèi)參物的峰面積，Wk 為內(nèi)參物的濃度，Am 為其他組分峰面積，Wm 為其他組分m 的濃度[2-3]。

1.2 特點(diǎn)

傳統(tǒng)的多指標(biāo)成分定量評價(jià)方法在標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行階段，需要多個(gè)對照品，而一測多評法可以通過測定易得、簡單的一個(gè)有效成分，實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分（沒有對照品或難以供應(yīng)）的同步測定，最終達(dá)到控制中藥整體質(zhì)量的目的，不需要對每個(gè)組分都建立含量測定方法及相關(guān)的考察，具有檢測成本低、簡便、快速的特點(diǎn)[4]。同時(shí)，還存在一些不足之處，如其適用性有待進(jìn)一步驗(yàn)證，各個(gè)定量組分的色譜條件有一定要求等。

1.3 技術(shù)要求

一測多評方法的構(gòu)建內(nèi)容包括指標(biāo)成分的確立、分析方法的建立、測定條件的選擇、參照物及供試品溶液的制備、相對校正因子及相對保留時(shí)間的計(jì)算、方法學(xué)驗(yàn)證、相對校正因子耐用性考察、色譜峰的定位及多個(gè)實(shí)驗(yàn)室復(fù)核等，其中相對校正因子和待測色譜峰的準(zhǔn)確定位是一測多評方法的最關(guān)鍵的兩個(gè)環(huán)節(jié)，在標(biāo)準(zhǔn)中對于實(shí)驗(yàn)條件與參數(shù)要盡可能詳細(xì)地描述[5]。方法學(xué)驗(yàn)證應(yīng)參照藥典附錄要求對準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、定量限、線性、耐用性等內(nèi)容進(jìn)行考察，應(yīng)符合要求。

2 應(yīng)用

2.1 應(yīng)用在中藥材及飲片中

在量-效關(guān)系評價(jià)、同源中藥質(zhì)量評價(jià)及基源鑒定、采收加工及提取工藝優(yōu)化環(huán)節(jié)、飲片炮制質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、不穩(wěn)定成分定量評價(jià)等方面得到探索和應(yīng)用，具體見表1。

2.2 應(yīng)用在中藥成方制劑中

用于中藥制劑、藥材-中間體-制劑、同品種不同劑型的質(zhì)量評價(jià)，具有代表性的統(tǒng)計(jì)見表2。

表1 一測多評法在中藥材及飲片測定中的應(yīng)用

表2 一測多評法在中藥成方制劑中的應(yīng)用

3 一測多評法研究過程中主要影響因素

3.1 參照物的選擇

從以上表1 和表2 中可以看出，參照物具有以下特點(diǎn)：多為在樣品中有較高含量、有明確的藥理作用、分離及制備相對簡單、性質(zhì)比較穩(wěn)定、易于檢測。若測定成分中有2 個(gè)以上滿足條件，可通過比較一測多評法與外標(biāo)法測定結(jié)果或RCF 耐用性考察的RSD 進(jìn)行選擇[6]，也可選擇2 個(gè)參照物進(jìn)行分組計(jì)算，或用2 個(gè)參照物進(jìn)行保留時(shí)間的校準(zhǔn)。

3.2 相對校正因子（RCF）的耐用性

一測多評研究更多采用高效液相-紫外檢測器，主要分為兩種：（1）如果檢測的成分是結(jié)構(gòu)母核相同的類似物，由于同類成分紫外吸收光譜相近，選擇在最大吸收波長處即可；（2）如果檢測不同的成分，由于參照物的紫外吸收光譜和其他待測成分相差較遠(yuǎn)，檢測波長可選擇兩者共用的吸收波長區(qū)，或在梯度洗脫過程中根據(jù)各待測成分的最大吸收波長，實(shí)現(xiàn)可變波長檢測[7-8]。

除了檢測波長外，不同的實(shí)驗(yàn)室、pH 值、體積流量、不同檢測人員、不同的色譜儀器、柱溫等均會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不同的相對校正因子，因此導(dǎo)致實(shí)際測量值與計(jì)算值出現(xiàn)偏差。

3.3 相對校正因子的計(jì)算方法

基于現(xiàn)有研究一測多評實(shí)例，絕大部分相對校正因子的計(jì)算方法采用多點(diǎn)校正法，除此之外還有斜率校正法、定量因子校正法等。斜率校正法和定量因子校正法在一定程度上彌補(bǔ)了多點(diǎn)校正法的不足。相對校正因子的最終確定，要根據(jù)相對校正因子計(jì)算法得到的數(shù)值與不同儀器、不同色譜柱測得的相對校正因子一起進(jìn)行計(jì)算求得算數(shù)平均值，即相對校正因子值。

4 結(jié)語

一測多評方法是中藥多指標(biāo)控制的一種新穎、高效、低成本的方法，已經(jīng)取得較大進(jìn)展[9-10]。相關(guān)研究逐年增多，但目前一測多評法仍存在一些問題：色譜峰定位方法的探索不完善、定位不準(zhǔn)確；藥材樣品批次較少，產(chǎn)地未全面包含主產(chǎn)區(qū)、道地產(chǎn)區(qū)；缺少一測多評法的共享數(shù)據(jù)庫和更詳細(xì)的技術(shù)指南。因此有必要建立多成分一測多評測定法中相關(guān)參數(shù)的數(shù)據(jù)庫，制定通用的質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，對一測多評法的適用范圍、方法學(xué)考察驗(yàn)證等內(nèi)容做進(jìn)一步規(guī)范。