陳翔，黃瑩，龍春藝，廖品琥

腎臟是膿毒癥發(fā)生發(fā)展過(guò)程中損傷的主要靶器官，其中足細(xì)胞損傷是導(dǎo)致膿毒癥并發(fā)急性腎損傷（AKI）的主要原因，而足細(xì)胞損傷的主要機(jī)制為內(nèi)毒素和炎癥介質(zhì)作用導(dǎo)致基底膜（glomerular basement membrane，GBM）的降解與重塑，并進(jìn)一步造成足細(xì)胞從GBM 上脫落［1］，但具體機(jī)制尚未完全闡明。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9可以通過(guò)分解GBM 主要成分Ⅳ型膠原參與GBM 重塑［2］。MMP-2、MMP-9在血清中的表達(dá)水平與膿毒癥患者預(yù)后有關(guān)，提示兩者可能通過(guò)調(diào)控GBM重塑影響預(yù)后［3］。同源性磷酸酶張力蛋白（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，PTEN）及磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-AKT）信號(hào)通路在足細(xì)胞損傷和GBM重塑中起著重要作用［4］。miRNA 是一類(lèi)非編碼調(diào)控RNA，通過(guò)與靶基因mRNA的3′非翻譯區(qū)（3′UTR）結(jié)合負(fù)調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)［5］。其中miR-21 在心臟成纖維細(xì)胞中表達(dá)上升，通過(guò)調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）及相關(guān)基因的表達(dá)，參與膿毒癥時(shí)心臟損傷［6］。然而miR-21在膿毒癥時(shí)足細(xì)胞損傷GBM 重塑中的作用和潛在機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)探討miR-21 對(duì)脂多糖（LPS）刺激下足細(xì)胞損傷模型中MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響，并進(jìn)一步探討miR-21在PTEN/AKT 信號(hào)通路中對(duì)MMP-2、MMP-9 的調(diào)控機(jī)制，為臨床診斷和治療膿毒癥并發(fā)AKI提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器及試劑 小鼠足細(xì)胞購(gòu)自上海中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。DU530超微量紫外分光光度計(jì)（德國(guó)Beckman公司），ABI 7500 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)儀（美國(guó)Applied Biosystems 公司）、伯樂(lè)1658001 電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀（美國(guó)BIORAD 公司），MultiskanMK3 酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技有限公司），JS-680B 全自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)（上海培清科技有限公司）。MMP-2、MMP-9酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（美國(guó)R&D公司），PCR引物、miRNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒和熒光定量試劑盒（北京天根科技公司），miR-21 抑制劑（inhibitor）、模擬物（mimic）和對(duì)照物（上海吉碼公司），MMP-2、MMP-9、PTEN、AKT和p-AKT一抗及辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗（美國(guó)Abcam公司）。

1.2 方法

1.2.1 膿毒癥AKI 相關(guān)miRNA 生物信息學(xué)分析 本研究在GEO 數(shù)據(jù)庫(kù)中的檢索關(guān)鍵詞為sepsis、sepsis microRNAs、sepsis AKI、sepsis AKI microRNAs 并補(bǔ)充檢索Google Scholar和百度學(xué)術(shù)，在不同時(shí)間點(diǎn)檢索2 次，納入芯片集在2010年后，沒(méi)有語(yǔ)言限制。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng) 將足細(xì)胞接種于含10%胎牛血清培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)，每2 d換液1次，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況進(jìn)行傳代。

1.2.3 LPS 濃度選擇 將密度為1.0×105個(gè)/孔的足細(xì)胞接種于6孔板中過(guò)夜，按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、1、5和10 mg/L LPS組，每組3個(gè)復(fù)孔。分別給予0、1、5、10 mg/L LPS刺激24 h，構(gòu)建足細(xì)胞損傷模型。正常對(duì)照組給予相同體積的PBS。將培養(yǎng)板置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。采用Western blot 檢測(cè)各組MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)。根據(jù)Western blot結(jié)果選取最適宜的脂多糖濃度。

1.2.4 ELISA 檢測(cè)MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá) 按照試劑盒說(shuō)明書(shū)，采用ELISA法檢測(cè)各組MMP-2、MMP-9表達(dá)水平。

1.2.5 細(xì)胞模型建立及轉(zhuǎn)染 將密度為1.0×105個(gè)/孔的足細(xì)胞接種于6孔板中過(guò)夜，按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、脂多糖組（LPS組）、miR-21模擬物組（miR-21 mimic 組）、miR-21 模擬物對(duì)照組（miR-21 mimic NC 組）、miR-21 抑制物組（miR-21 inhibitor 組）和miR-21 抑制物對(duì)照組（miR-21 inhibitor NC 組），每組3 個(gè)復(fù)孔。LPS 組給予10 mg/L LPS 刺激24 h，構(gòu)建足細(xì)胞損傷模型。正常對(duì)照組給予相同體積的PBS。miR-21 mimic/inhibitor 組在含有細(xì)胞的1 500μL培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔中加入miR-21-mimic/inhibitor-lipo 2000混合液混勻；miR-21 mimic/inhibitor NC 組加入相同劑量miR-21-mimic/inhibitor NC-lipo 2000 混合液混勻。培養(yǎng)6 h 后，將含混合液的培養(yǎng)基移去，更換新鮮培養(yǎng)基，加入10 mg/L LPS，將培養(yǎng)板置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

1.2.6 PTEN 過(guò)表達(dá)與沉默 將密度為1.0×105個(gè)/孔的足細(xì)胞接種于6 孔板中過(guò)夜，按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組、LPS組、PTEN 過(guò)表達(dá)組、PTEN 過(guò)表達(dá)對(duì)照組、PTEN 沉默組、PTEN 沉默對(duì)照組，每組3 個(gè)復(fù)孔。LPS 組給予10 mg/L LPS刺激24 h，構(gòu)建足細(xì)胞損傷模型。正常對(duì)照組給予相同體積的PBS。按照Lipofectamine2000操作說(shuō)明進(jìn)行操作，PTEN過(guò)表達(dá)組中將pCDNA3.1-PTEN轉(zhuǎn)染至足細(xì)胞中，PTEN沉默組將shRNA-PTEN 轉(zhuǎn)染至足細(xì)胞中。PTEN 過(guò)表達(dá)對(duì)照組和PTEN沉默對(duì)照組分別給予轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒。培養(yǎng)6 h后，將含混合液的培養(yǎng)基移去，更換新鮮培養(yǎng)基，加入10 mg/L LPS，將培養(yǎng)板置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

1.2.7 熒光定量PCR 檢測(cè)miR-21基因表達(dá) 取傳3～8代的足細(xì)胞，按6×105個(gè)/孔接種于6 孔板中，37 ℃、5%CO2恒溫孵箱中培養(yǎng)12 h 后，去掉培養(yǎng)基。LPS 組加入10 mg/L LPS，對(duì)照組加入等量PBS，刺激6 h 后用離心柱法提取總RNA。按照反轉(zhuǎn)錄和熒光定量PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和熒光。以U6為內(nèi)參，數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCt法進(jìn)行分析，其中，ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因，ΔΔCt=ΔCt LPS組-ΔCt正常對(duì)照組。

1.2.8 Western blot 檢測(cè)蛋白表達(dá) 取LPS 刺激后24 h 的各組細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液后提取蛋白，并用BCA 法檢測(cè)蛋白濃度。取60μg 蛋白樣品進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)膜至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，室溫封閉1 h，分別加入MMP-2（1∶1 000）、MMP-9（1∶1 000）、PTEN（1∶1 000）、AKT（1∶1 000）、p-AKT（1∶1 000）一抗，同時(shí)以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH，1∶5 000稀釋?zhuān)閮?nèi)參，4 ℃孵育過(guò)夜，TBST 清洗3 次，每次10 min。加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗（1∶5 000），室溫孵育1 h，TBST清洗3次，每次10 min。洗膜結(jié)束后用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行顯影。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用表示，2組間比較用成組t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t法，采用Pearson法行相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膿毒癥AKI 相關(guān)miRNA 生物信息學(xué)分析 選取的數(shù)據(jù)集為GSE94717，芯片標(biāo)本分別來(lái)自健康人和膿毒癥AKI 患者，應(yīng)用3例健康人和6例膿毒癥AKI 患者樣本的標(biāo)準(zhǔn)化表達(dá)數(shù)據(jù)，根據(jù)是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）及其差異倍數(shù)（＞2）進(jìn)行分析篩選，符合條件的差異表達(dá)的miRNA 共有231 個(gè)，部分差異miRNA表達(dá)情況見(jiàn)表1。由于差異表達(dá)的miRNA數(shù)據(jù)相對(duì)較多，結(jié)合前期研究和文獻(xiàn)分析選取miR-21作為研究對(duì)象。

Tab.1 Differentially expressed miRNA in GSE94717表1 GSE94717中部分差異表達(dá)的miRNA

2.2 各組miR-21 和MMP-2、MMP-9 表達(dá)及相關(guān)性分析 不同濃度LPS 刺激后，足細(xì)胞MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)水平升高，且呈濃度依賴(lài)性，見(jiàn)圖1。本研究選取10 mg/L的LPS處理細(xì)胞。熒光定量PCR 和ELISA 結(jié)果顯示，LPS 組足細(xì)胞miR-21、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)量升高（均P＜0.01），見(jiàn)表2。LPS組中miR-21與MMP-2、MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān)（r分別為0.462、0.534，均P＜0.05）。

Fig.1 Effects of different doses of LPS on expressions of MMP-2 and MMP-9 in podocytes圖1 不同劑量LPS對(duì)足細(xì)胞MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響

2.3 miR-21促進(jìn)LPS刺激下足細(xì)胞MMP-2、MMP-9 表達(dá) miR-21 抑制物處理后，MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；miR-21模擬物處理后，MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)圖2、表3。

2.4 miR-21 靶向PTEN 參與LPS 刺激下足細(xì)胞損傷 miR-21靶基因分析結(jié)果顯示，miR-21與PTEN序列高度互補(bǔ)，PTEN可能為miR-21的靶基因，見(jiàn)表4。抑制miR-21 表達(dá)，PTEN 表達(dá)上升，p-AKT 表達(dá)降低（均P＜0.05）；miR-21 表達(dá)升高，PTEN 表達(dá)降低，p-AKT表達(dá)升高（均P＜0.05），見(jiàn)圖2、表5。

Tab.2 Comparison of expression levels of miR-21,MMP-2 and MMP-9 between the two groups表2 2組miR-21、MMP-2和MMP-9表達(dá)水平比較（n=20，）

Tab.2 Comparison of expression levels of miR-21,MMP-2 and MMP-9 between the two groups表2 2組miR-21、MMP-2和MMP-9表達(dá)水平比較（n=20，）

＊＊P＜0.01

組別正常對(duì)照組LPS組t miR-21（2－ΔΔCt）1.00±0 3.03±0.56 16.293＊＊MMP-2（mg/L）47.70±19.42 134.12±22.89 12.873＊＊MMP-9（mg/L）59.45±15.96 107.31±47.76 4.250＊＊

Fig.2 Effects of miR-21 mimic/inhibitor on MMP-2,MMP-9,PTEN and p-AKT protein expressions圖2 miR-21 模擬物/抑制物對(duì)MMP-2、MMP-9、PTEN和p-AKT蛋白表達(dá)的影響

Tab.3 The relative expression of MMP-2 and MMP-9 protein in six groups表3 各組MMP-2、MMP-9相對(duì)表達(dá)量比較（n=3，）

Tab.3 The relative expression of MMP-2 and MMP-9 protein in six groups表3 各組MMP-2、MMP-9相對(duì)表達(dá)量比較（n=3，）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與正常對(duì)照組比較，b與LPS 組比較，P＜0.05；t1：miR-21 模擬物組與miR-21 模擬物對(duì)照組比較，t2：miR-21抑制物組與miR-21抑制物對(duì)照組比較；表5、6同

組別正常對(duì)照組LPS組miR-21模擬物組miR-21抑制物組F miR-21模擬物對(duì)照組miR-21抑制物對(duì)照組t1 t2 MMP-2 0.51±0.31 1.16±0.02a 1.28±0.03ab 0.65±0.02ab 632.822＊＊1.06±0.03 0.89±0.02 8.731＊＊17.373＊＊MMP-9 0.68±0.01 1.16±0.02a 1.32±0.07ab 0.56±0.03ab 253.574＊＊1.01±0.03 0.96±0.05 7.802＊11.647＊＊

2.5 PTEN/AKT 參與LPS 刺激下足細(xì)胞MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá) 抑制PTEN表達(dá)，p-AKT、MMP-2和MMP-9 蛋白表達(dá)上升（均P＜0.05）；過(guò)表達(dá)PTEN，p-AKT、MMP-2 和MMP-9 蛋白表達(dá)下降（均P＜0.05）。見(jiàn)圖3、表6。

Tab.4 Bioinformatics analysis and prediction results表4 生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)結(jié)果

Tab.5 Comparison of the relative expression of PTEN and p-AKT protein between six groups表5 各組PTEN、p-AKT相對(duì)表達(dá)量比較 （n=3，）

Tab.5 Comparison of the relative expression of PTEN and p-AKT protein between six groups表5 各組PTEN、p-AKT相對(duì)表達(dá)量比較 （n=3，）

組別正常對(duì)照組LPS組miR-21模擬物組miR-21抑制物組F miR-21模擬物對(duì)照組miR-21抑制物對(duì)照組t1 t2 PTEN 0.73±0.04 0.84±0.02a 0.84±0.04a 0.67±0.01ab 18.397＊0.85±0.02 0.82±0.04 7.916＊1.135 p-AKT 0.52±0.01 0.47±0.01a 0.96±0.04ab 0.65±0.04ab 128.523＊＊0.77±0.04 0.83±0.02 5.962＊7.311＊AKT 0.66±0.01 0.65±0.02 0.63±0.03 0.50±0.02ab 53.393＊0.61±0.02 0.56±0.02 6.087＊2.662

Fig.3 Effects of pcDNA 3.1-PTEN and shRNA-PTEN on MMP-2,MMP-9 and p-AKT protein expressions圖3 過(guò)表達(dá)/沉默PTEN對(duì)MMP-2、MMP-9和p-AKT蛋白表達(dá)影響

Tab.6 Comparison of the relative expressions of MMP-2,MMP-9 and p-AKT protein between six groups表6 各組MMP-2、MMP-9和p-AKT相對(duì)表達(dá)量比較（n=3，）

Tab.6 Comparison of the relative expressions of MMP-2,MMP-9 and p-AKT protein between six groups表6 各組MMP-2、MMP-9和p-AKT相對(duì)表達(dá)量比較（n=3，）

組別正常對(duì)照組LPS組PTEN過(guò)表達(dá)組PTEN沉默組F PTEN過(guò)表達(dá)對(duì)照組PTEN沉默對(duì)照組t1 t2 MMP-2 0.66±0.01 1.07±0.02a 0.87±0.01ab 1.28±0.02ab 686.960＊＊1.13±0.01 1.09±0.01 37.277＊＊11.897＊MMP-9 0.66±0.01 0.82±0.03a 0.67±0.01b 0.92±0.01ab 144.586＊＊0.81±0.02 0.79±0.01 71.768＊＊16.350＊p-AKT 0.30±0.00 1.12±0.03a 0.73±0.01ab 1.26±0.04ab 1039.652＊＊1.12±0.03 1.15±0.03 21.264＊＊6.203＊AKT 0.65±0.01 0.64±0.03 0.61±0.03 0.64±0.04 24.504 0.63±0.05 0.63±0.04 2.217 3.719

3 討論

膿毒癥出現(xiàn)腎損害時(shí)預(yù)示病情危重且預(yù)后不良，因此，膿毒癥AKI的早期診斷和治療是膿毒癥治療的關(guān)鍵。本研究通過(guò)探討miR-21 對(duì)膿毒癥足細(xì)胞損傷模型中MMP-2、MMP-9 表達(dá)的影響，并進(jìn)一步探討miR-21的可能調(diào)控機(jī)制，為臨床診斷和治療膿毒癥AKI提供理論依據(jù)。

3.1 MMP-2、MMP-9在LPS刺激下足細(xì)胞中表達(dá)升高 MMP-2、MMP-9 是可以降解GBM 的基質(zhì)金屬蛋白酶家族的成員，被認(rèn)為是一種具有潛在診斷價(jià)值的膿毒癥標(biāo)志物，然而MMP-2、MMP-9 在膿毒癥足細(xì)胞損傷模型中的表達(dá)水平及與足細(xì)胞損傷的關(guān)系尚不明確。本研究通過(guò)構(gòu)建膿毒癥足細(xì)胞損傷模型，在LPS 刺激下，足細(xì)胞MMP-2、MMP-9 表達(dá)上升，提示MMP-2、MMP-9 可能參與膿毒癥足細(xì)胞損傷，同時(shí)兩者表達(dá)隨LPS濃度上升而升高，提示兩者的表達(dá)水平可能反映膿毒癥時(shí)足細(xì)胞的損傷程度。這與既往研究結(jié)果一致，既往研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膿毒癥患者血清中高水平的MMP-2、MMP-9 提示預(yù)后不良［3］，且與低水平MMP-2、MMP-9患者相比，發(fā)生多器官功能障礙綜合征的可能性升高［7-8］。因此，MMP-2、MMP-9能夠作為生物標(biāo)志物診斷及判斷膿毒癥AKI患者預(yù)后。

3.2 miR-21在LPS刺激下足細(xì)胞中表達(dá)升高 LPS刺激MMP-2、MMP-9 表達(dá)升高的同時(shí)也介導(dǎo)miR-21表達(dá)升高。通過(guò)基因芯片分析，我們發(fā)現(xiàn)miR-21在膿毒癥AKI中差異表達(dá)，然而miR-21在膿毒癥足細(xì)胞損傷中的表達(dá)變化和具體作用尚不清楚。通過(guò)構(gòu)建膿毒癥足細(xì)胞損傷模型，筆者發(fā)現(xiàn)LPS 刺激下的足細(xì)胞miR-21表達(dá)升高，這與基因芯片分析的結(jié)果相一致。然而，此結(jié)果與先前的一項(xiàng)研究結(jié)果相悖。該研究觀察到LPS 刺激后miR-21 的變化是動(dòng)態(tài)的，6 h 內(nèi)miR-21 表達(dá)升高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［9］。導(dǎo)致本研究結(jié)果與該研究結(jié)果相悖有以下可能：（1）選取不同類(lèi)型的細(xì)胞進(jìn)行研究。細(xì)胞的功能會(huì)受到細(xì)胞來(lái)源、組織特異性和激活方式的影響，同時(shí)LPS的促炎癥作用具有細(xì)胞特異性。本研究使用的是足細(xì)胞，而該研究使用的是肺泡巨噬細(xì)胞NR8383。（2）LPS 干預(yù)劑量的差異。LPS 的促炎癥作用具有劑量依賴(lài)性，不同劑量LPS具有不同的生物學(xué)效應(yīng)，低劑量LPS 主要促進(jìn)細(xì)胞增殖，高劑量LPS 可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。本研究根據(jù)課題組前期研究基礎(chǔ)選取10 mg/L的LPS，而該研究采用的LPS劑量為1 mg/L。

其次，LPS 誘導(dǎo)miR-21 和MMP-2、MMP-9 表達(dá)上升，且miR-21 與MMP-2、miR-21 與MMP-9 之間呈正相關(guān)，但兩者之間是否存在調(diào)控關(guān)系尚不清楚。本研究通過(guò)構(gòu)建miR-21過(guò)表達(dá)和抑制miR-21表達(dá)模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-21促進(jìn)MMP-2、MMP-9的表達(dá)；而抑制miR-21能抑制MMP-2、MMP-9的表達(dá)。這與既往研究結(jié)果一致，既往研究觀察到蘇子油能通過(guò)抑制miR-21降低血管內(nèi)皮細(xì)胞MMP-9表達(dá)［10］。同時(shí)miR-21 能通過(guò)PTEN 通路影響心臟成纖維細(xì)胞MMP-2表達(dá)［11］。這些結(jié)果表明miR-21可以影響MMP-2、MMP-9 表達(dá)，但具體調(diào)控機(jī)制尚不明確。

3.3 miR-21 對(duì)PTEN/AKT 通路的調(diào)控作用 為了進(jìn)一步研究miR-21 調(diào)控MMP-2、MMP-9 表達(dá)的機(jī)制，通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，miR-21與PTEN序列高度互補(bǔ)，PTEN 可能是miR-21 的靶基因。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-21 可抑制PTEN 的表達(dá)，而抑制miR-21能促進(jìn)PTEN的表達(dá)。這與生物信息學(xué)分析和既往研究結(jié)果一致，既往研究觀察到在乳腺癌［12］、肝癌［13］細(xì)胞中，PTEN 是miR-21 的直接靶點(diǎn)。這些結(jié)果表明miR-21 可以影響PTEN/AKT 通路，但miR-21 是否通過(guò)PTEN/AKT 通路影響MMP-2、MMP-9的表達(dá)尚不清楚。

3.4 PTEN/AKT 通路對(duì)MMP-2、MMP-9 的調(diào)控作用 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)PTEN 能抑制p-AKT、MMP-2 和MMP-9 表達(dá)，沉默PTEN 能促進(jìn)p-AKT、MMP-2和MMP-9表達(dá)，結(jié)果顯示PTEN/AKT可以影響MMP-2、MMP-9表達(dá)。而在本研究中，miR-21能靶向抑制PTEN/AKT 表達(dá)，miR-21 可能通過(guò)抑制PTEN/AKT 促進(jìn)LPS 刺激下足細(xì)胞MMP-2、MMP-9表達(dá)。

綜上，miR-21、MMP-2 和MMP-9 與膿毒癥AKI的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，監(jiān)測(cè)膿毒癥患者miR-21、MMP-2和MMP-9水平有利于及早發(fā)現(xiàn)膿毒癥AKI，同時(shí)miR-21 可以通過(guò)抑制PTEN/AKT 通路的激活提高M(jìn)MP-2、MMP-9 表達(dá)，對(duì)膿毒癥AKI 患者及早進(jìn)行以miR-21 為靶點(diǎn)的干預(yù)治療可能取得較好效果，然而miR-21 調(diào)控GBM 降解與重塑的具體機(jī)制尚未闡明。目前已知PTEN 能抑制AKT/mTOR 自噬通路［14］。而本研究發(fā)現(xiàn)miR-21 會(huì)抑制PTEN/AKT通路激活，激活A(yù)KT/mTOR 通路而抑制自噬。miR-21 是否通過(guò)抑制自噬來(lái)調(diào)節(jié)GBM 重塑參與膿毒癥AKI進(jìn)程仍需進(jìn)一步的研究。