薛 輝，莫玉鵬，肖愛歡，覃蘭中，鄧 禮，李 崢，莫傳俊，李 龍，黃學(xué)寧

（1.來賓市興賓區(qū)安源畜牧有限公司，廣西 來賓 546100；2.杭州貝爾塔獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室，杭州 310004）

國內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)大型化、規(guī)?；?、集約化的快速發(fā)展，使豬場疫病防控的難度與要求更高，存在的風(fēng)險(xiǎn)與隱患更大。所以各大規(guī)模養(yǎng)豬場在不斷完善與構(gòu)建自身生物安全生產(chǎn)體系的同時，也充分考慮了場內(nèi)人員流動、車輛管理走向、物資進(jìn)出等方面防疫要求，規(guī)定嚴(yán)格生物安全隔離與消毒措施，從源頭上杜絕可能存在的傳染源接近豬場，切斷疫病傳播途徑，以保護(hù)豬場整個豬群的健康穩(wěn)定。而血清抗體監(jiān)測技術(shù)是對動物體內(nèi)產(chǎn)生的血清抗體進(jìn)行監(jiān)測，并進(jìn)行有關(guān)數(shù)據(jù)處理分析，以對動物生長過程中的各階段健康和免疫狀況進(jìn)行分析與監(jiān)控，及時掌握抗體在動物體內(nèi)的消長變化規(guī)律，為下一步疫病的預(yù)防、免疫工作開展提供數(shù)據(jù)支撐。1 試驗(yàn)豬場與采樣方案

1.1 規(guī)模豬場飼養(yǎng)模式與免疫程序

本場為5 500頭基礎(chǔ)母豬現(xiàn)代化西式豬場，采用單點(diǎn)式生產(chǎn)、全進(jìn)全出、自繁自養(yǎng)的飼養(yǎng)模式，本場的疫苗免疫程序見表1。

表1 免疫跟蹤記錄

1.2 檢測送樣單與檢測項(xiàng)目

本次豬場第三季度血清抗體檢測項(xiàng)目包括豬瘟病毒抗體、藍(lán)耳病病毒抗體、偽狂犬病病毒gB抗體、偽狂犬病病毒gE抗體、口蹄疫病毒O抗體；委托負(fù)責(zé)檢測的機(jī)構(gòu)為杭州貝爾塔獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室，不同血清樣品檢測項(xiàng)目見表2和表3。

表2 豬場檢測送樣單

表3 血清樣品檢測項(xiàng)目

1.3 檢測采樣方案

2018年第三季度各階段豬只抽取合計(jì)有130份血清樣品，其中生產(chǎn)母豬55頭，公豬20頭，產(chǎn)房仔豬7頭，保育豬14頭，后備豬34頭。采樣豬只的類型、品種、階段、數(shù)量、胎次及送檢編號如表4。

1.4 檢測方法與結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

血清利用阻斷ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）原理來檢測血清中的抗體，不同檢測試劑盒的廠家、貨號及陰陽性判定標(biāo)準(zhǔn)如表5。

表4 檢測采樣方案

表5 血清抗體檢測試劑盒信息

1.5 相關(guān)分析指標(biāo)

血清抗體季度檢測主要用于評估整個豬群的免疫水平，是以群體為目標(biāo)，不針對單個個體。本文針對主要病原抗體檢測的陽性率、合格率、離散度和均值4個方面進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，評判豬群免疫效果或保護(hù)水平。離散度反映個體間均勻度或變異系數(shù)，即各個抗體值之間的差異程度，因此離散度越小越好。

2 檢測結(jié)果與分析

2.1 血清中豬瘟抗體檢測結(jié)果與分析

從表6可以看出，第三季度生產(chǎn)公豬與母豬都有一個較好的豬瘟抗體水平，其中初配母豬與公豬抗體陽性率均為100%，1~4胎齡生產(chǎn)母豬的抗體也都在95%以上。公豬與母豬的抗體平均值均在0.77以上，且離散度最大在22.12%范圍以下，最低離散度為5.90%；個體間豬瘟抗體水平的差異較小，均勻度較好。生產(chǎn)公豬與母豬整體檢查結(jié)果表明，公豬每4個月免疫一次豬瘟，一年3次，母豬產(chǎn)后2周跟胎免疫一次的免疫方式，可以使整個繁殖群體獲得良好豬瘟免疫保護(hù)力，保證繁殖群體免受豬瘟病毒的干擾。

同樣是在表6清晰反映出生長群體—產(chǎn)房仔豬在8~14日齡豬瘟抗體陽性率由85.71%，逐步降低至22~30日齡和7周齡的57.14%陽性率；抗體平均值由0.62降至0.41陽性臨界值水平，而且個體間的離散度越來越大。從這一豬瘟抗體的消長規(guī)律客觀反映了產(chǎn)房仔豬隨著日齡的增長，體內(nèi)的母源抗體在慢慢消退。因此在制定保育豬的豬瘟首免日齡時，一方面需要考慮豬瘟母源抗體對免疫效果的影響，如果首免日齡過早高滴度母源抗體往往會中和部分疫苗，達(dá)不到理想免疫效果。另一方面考慮到母源抗體消減到什么程度對仔豬仍起保護(hù)作用。我們認(rèn)為當(dāng)豬瘟陽性率低于60%時，需要通過人工主動免疫提高群體的豬瘟抗體水平，避免群體遭受豬瘟疫情的威脅。綜合以上兩方面的因素，我們制定了在保育豬5周齡進(jìn)行豬瘟首免，從首免2周后進(jìn)行豬瘟抗體監(jiān)測，7周齡豬瘟抗體并沒有得到很好的改善，其主要影響原因是豬瘟母源抗體的干擾，其次疫苗首免效應(yīng)沒有在機(jī)體建立很好抗原與抗體呈遞機(jī)制及開展免疫記憶細(xì)胞的功能，所以選擇在9周齡再加強(qiáng)一針豬瘟疫苗的免疫，而此時動物機(jī)體啟動快速有效免疫應(yīng)答，從持續(xù)的檢測11周齡、15周齡、21周齡豬瘟抗體水平上升規(guī)律來看，陽性率從83.33%提高到了100%，離散度從22.91%降低至8.78%。再結(jié)合24周齡豬瘟三免，29周齡與34周齡后備母豬入群前的陽性率均達(dá)100%，抗體的平均值與離散度均處于一個很理想的范圍。

綜上，開展豬瘟抗體季度監(jiān)測，一是可以很好地監(jiān)測繁殖群體中的豬瘟整體抗體水平。結(jié)果顯示，豬瘟抗體陽性率和保護(hù)率均在非常理想的水平，繁殖群體針對豬瘟具有很好的保護(hù)力。二是跟蹤監(jiān)測生長群體豬瘟免疫日齡與免疫效果。結(jié)果表明，5周齡與9周齡進(jìn)行兩次豬瘟免疫，可以有效刺激機(jī)體產(chǎn)生豬瘟抗體彌補(bǔ)仔豬斷奶后母源抗體的消減。從抗體水平增長的規(guī)律來看，在后備培育階段進(jìn)行3次豬瘟疫苗免疫可以有效保護(hù)后備豬不受豬瘟病毒的侵?jǐn)_。

表6 血清豬瘟抗體檢測數(shù)據(jù)匯總分析

2.2 血清中偽狂犬gE與gB抗體檢測結(jié)果與分析

從表7可知，繁殖群體的公豬和母豬（初配、1~4胎）通過定期的季度普免，可以獲得很好的偽狂犬病病毒gB抗體保護(hù)率，均為100%；抗體的平均值（S/N）在0.04~0.07范圍內(nèi)，遠(yuǎn)低于0.3的陽性值判斷臨界值；同時也反映出了繁殖群體內(nèi)具備高水平的偽狂犬病病毒gB抗體，而初配母豬與3~4胎母豬離散度偏高的原因是檢測樣品中SC0-2和SR3-5的S/N（0.18與0.11）稍微偏高所致，其余樣品檢測抗體S/N值均在平均值左右。而監(jiān)測保育7周齡偽狂犬病病毒gB抗體水平陽性率還是100%，且平均值在0.06，離散度只有23.22%，表明母源抗體完全有能力保護(hù)到仔豬保育7周齡。監(jiān)測11周齡生長豬的抗體水平已經(jīng)開始逐步下降，陽性率降至83.33%，抗體平均值與離散度均開始出現(xiàn)波動，因此根據(jù)以往季度監(jiān)測數(shù)據(jù)我們制定偽狂犬病疫苗的首免在保育10周齡開始，能及時避免母源抗體下降導(dǎo)致免疫空白，降低偽狂犬病的感染風(fēng)險(xiǎn)。與此在14周齡再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，在結(jié)合15周齡與21周齡監(jiān)測結(jié)果陽性率與平均值都得到了很好的提升，后期25周齡與30周齡兩針加強(qiáng)免疫保證后備母豬入群前依舊具有較高的抗體水平，以保護(hù)其在1胎妊娠期間不受偽狂犬病野毒感染。

表7 血清偽狂犬病gB抗體檢測數(shù)據(jù)匯總分析

本場在開場做引種評估時，就嚴(yán)格要求與把控引種場必須是偽狂犬病野毒（gE抗體）陰性場才考慮引種。從表8偽狂犬病gE抗體檢測結(jié)果表明，豬場繁殖群體（公豬與母豬）與生長群體（保育與后備）均未檢測出gE抗體陽性，陽性率0，且平均值與離散度均處于一個良好的水平，豬群未受到偽狂犬病野毒的感染。事實(shí)也證明了豬場進(jìn)行季度定期普免和指定日齡偽狂犬病的免疫計(jì)劃，使整個豬場具備很高偽狂犬病保護(hù)性抗體（gB），結(jié)合嚴(yán)格豬場生物安全管理措施，完全有能力將本場維持在一個偽狂犬病野毒（gE）抗體陰性場水平。

表8 血清偽狂犬病gE抗體檢測數(shù)據(jù)匯總分析

2.3 血清中藍(lán)耳病抗體檢測結(jié)果與分析

從表9血清藍(lán)耳病的抗體數(shù)據(jù)可知，母豬群體的藍(lán)耳病病毒抗體的陽性率隨著母豬胎次上升而逐漸下降，平均值由0.89降至0.11，遠(yuǎn)低于抗體陰性值（S/P=0.4）臨界值判定標(biāo)準(zhǔn)。這一抗體消長規(guī)律很好地解釋了本場藍(lán)耳病的控制思路，在防控藍(lán)耳病本場構(gòu)建的是一個藍(lán)耳病穩(wěn)定陽性場，因此在開場引種之初對所有后備母豬進(jìn)行一次藍(lán)耳病的普免，就停止場內(nèi)一切藍(lán)耳病疫苗免疫工作，藍(lán)耳病病毒抗體也隨著母豬胎次上升而下降。場內(nèi)通過自繁自養(yǎng)選留后備母豬擴(kuò)群達(dá)到更新與滿負(fù)荷生產(chǎn)需求，在培育過程中將配懷出現(xiàn)流產(chǎn)、屢配不孕、產(chǎn)木乃伊胎等繁殖問題的母豬與14~16周齡日齡階段后備豬混群，通過直接接觸自然感染馴化3周，且每周一次在各欄放置2份木乃伊胎/死胎進(jìn)行強(qiáng)返飼，當(dāng)后備豬培育達(dá)190~200日齡時，采集個體血樣及唾液（欄為單位）進(jìn)行ELISA和PCR檢測，檢測結(jié)果要求個體血清抗體ELISA為陽性，唾液PCR檢測為陰性，才可以轉(zhuǎn)配懷舍配種入群。從仔豬22~30日齡到7周齡、11周齡、15周齡、21周齡不同階段豬只的血清藍(lán)耳病病毒抗體檢測上升情況（14.29%升至100%），也說明采取問題母豬馴化與返飼方案確實(shí)可以保證母豬入群時有一個穩(wěn)定有效的藍(lán)耳病保護(hù)性抗體。結(jié)合場內(nèi)各環(huán)節(jié)關(guān)鍵指標(biāo)如母豬配種受胎率、流產(chǎn)率、產(chǎn)死胎與木乃伊率、保育死淘比例等，均處于比較良好控制水平范圍內(nèi)，雖然各階段藍(lán)耳病病毒離散度差異較大（其原因是豬只間抗體消長的速度不一樣所致），實(shí)際上場內(nèi)沒有出現(xiàn)指標(biāo)明顯比較異常的波動，這充分證實(shí)了我們開展場內(nèi)針對藍(lán)耳病防控措施是確實(shí)有效的，符合藍(lán)耳病抗體客觀消長規(guī)律的。

表9 血清藍(lán)耳病抗體檢測數(shù)據(jù)匯總分析

2.4 血清中口蹄疫O型抗體檢測結(jié)果與分析

從表10血清口蹄疫O型抗體數(shù)據(jù)可知，繁殖群體（母豬與公豬）通過每個季度定期普免，可以獲得很好的口蹄疫O型抗體保護(hù)率，均為100%；抗體的平均值在84.43以上，遠(yuǎn)高于50.00的陽性值斷臨界值；且群體抗體的離散度比較理想，最高不超過11.47%。此結(jié)果說明季度普免口蹄疫可以有效保護(hù)繁殖群體，整體抗體陽性率、平均值與離散度都比較良好。而通過監(jiān)測保育7周齡血清口蹄疫O型抗體陽性率為71.43%，抗體均值也只有69.05，所以在這一階段為了避免保育豬因?yàn)槌霈F(xiàn)母源抗體的快速消退，而自身抗體水平?jīng)]有升高導(dǎo)致免疫空白期過長，增加感染的風(fēng)險(xiǎn)，我們把保育豬口蹄疫的首免日齡定在8周齡，監(jiān)測11周齡生長豬的口蹄疫O型抗體水平已經(jīng)開始逐步上升，再結(jié)合14周齡進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，二免后的6周，即21周齡監(jiān)測結(jié)果表明陽性率與平均值都得到了很好的提升，而在后備豬24周齡進(jìn)行三免是為了保證后備母豬入群（34周齡）前仍能保持一個較高的抗體水平，進(jìn)一步減少感染風(fēng)險(xiǎn)。配種入群后，結(jié)合每個季度的普免使整個豬場各階段豬群均有一個穩(wěn)定、可靠、均勻的口蹄疫抗體保護(hù)水平，避免豬場遭受口蹄疫的感染風(fēng)險(xiǎn)。

表10 血清口蹄疫O型抗體數(shù)據(jù)匯總分析

3 結(jié)論

對現(xiàn)代規(guī)?；i場開展血清抗體季度檢測，定期監(jiān)控豬場不同階段豬群豬瘟、偽狂犬病、藍(lán)耳病、口蹄疫O型抗體水平的變化規(guī)律，其意義在于一方面可以很好把控整個繁殖群體主要疫病的免疫效果，同時也驗(yàn)證普免+跟胎的免疫方式是否切實(shí)合理。本次季度監(jiān)測從各項(xiàng)抗體檢測的陽性率、平均值與離散度檢測結(jié)果來看，繁殖豬群對豬瘟、偽狂犬病、藍(lán)耳病、口蹄疫均有一個比較理想的抗體保護(hù)水平，符合疫苗免疫后抗體的變化趨勢，再結(jié)合豬場實(shí)際各項(xiàng)生產(chǎn)指標(biāo)平穩(wěn)，豬群健康度良好表現(xiàn)，未出現(xiàn)較大的異常波動，數(shù)據(jù)分析表明各項(xiàng)免疫工作已達(dá)到了我們預(yù)期要求。另一方面季度抗體監(jiān)測對我們在制定不同疫苗的首免日齡、馴化效果評估、入群前藍(lán)耳病監(jiān)測方面提供很好的數(shù)據(jù)參考與支撐。最后血清抗體監(jiān)測技術(shù)作為一種有效的監(jiān)測與診斷方法，我們需切實(shí)發(fā)揮其在疫病防控中的重要作用，針對本場制定切實(shí)有效采樣方案、送檢注意事項(xiàng)、檢測的內(nèi)容與項(xiàng)目、有一套合理規(guī)范的分析方法，精準(zhǔn)判斷出豬場可能存在的風(fēng)險(xiǎn)與隱患，及時采取相應(yīng)有效措施保證豬群的健康達(dá)到穩(wěn)定高效的生產(chǎn)目的。