韓永剛，劉 浩

（1.陜西省漢中市漢臺(tái)區(qū)畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣中心，陜西 漢中 723000；2.陜西省動(dòng)物衛(wèi)生與屠宰管理站，西安 710000）

豬瘟是由豬瘟病毒引起的高度接觸性傳染病，最早發(fā)現(xiàn)于美國(guó)俄亥俄州。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列入OIE疫病名錄，為必須申報(bào)的（Notifiable）動(dòng)物傳染病，我國(guó)也將其列為一類動(dòng)物傳染病[1]。該病在世界范圍內(nèi)流行，以流行范圍廣、發(fā)病率和致死率高為主要特征，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重危害。近年來(lái)，豬瘟在亞洲、歐洲、南美洲等地區(qū)呈現(xiàn)復(fù)發(fā)的趨勢(shì)，一些已宣布消滅了豬瘟的國(guó)家（如法國(guó)、荷蘭、德國(guó)等）又見豬瘟復(fù)發(fā)的報(bào)道[2]。王琴等對(duì)我國(guó)流行的不同臨床致病力和不同基因亞型的9株豬瘟病毒流行毒株進(jìn)行了免疫保護(hù)效力研究，結(jié)果表明，以C株疫苗種毒生產(chǎn)的豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）對(duì)我國(guó)目前流行的豬瘟高、中、低致病力毒株及不同基因亞型（1.1、2.1、2.2）流行毒株均具有很強(qiáng)的保護(hù)力，且免疫豬接種不同流行毒株后不排毒[3]，研究結(jié)果為我國(guó)繼續(xù)使用豬瘟兔化弱毒活疫苗進(jìn)行全面免疫提供了重要科學(xué)依據(jù)。但是，C株疫苗具有一定局限性，不能區(qū)分免疫和自然感染動(dòng)物，為了凈化、消滅豬瘟，新型豬瘟標(biāo)記疫苗將發(fā)揮重要作用[4]。隨著CSFV病毒學(xué)的發(fā)展研究者們逐漸認(rèn)識(shí)到CSFV在感染中誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體主要是與結(jié)構(gòu)蛋白Erns、E2和非結(jié)構(gòu)蛋白NS3結(jié)合的。由于NS3所含有的抗原表位在瘟病毒屬具有很高的保守性[5]，使得Erns和E2成為進(jìn)行標(biāo)記疫苗候選毒株構(gòu)建的首選。中國(guó)臺(tái)灣研究者利用巴斯德比赤酵母系統(tǒng)成功表達(dá)了重組E2蛋白，并在其后的動(dòng)物試驗(yàn)中取得成功[6]。中國(guó)大陸對(duì)亞單位疫苗的研究比較深入，已有一個(gè)桿狀病毒表達(dá)的E2亞單位疫苗被注冊(cè)使用，還有正在研究的如CHO表達(dá)E2等。

為準(zhǔn)確了解、把握豬瘟E2蛋白滅活疫苗免疫對(duì)臨床豬瘟病毒感染的控制效果，在某規(guī)模豬場(chǎng)發(fā)生的非典型豬瘟病例中，筆者使用已在國(guó)內(nèi)上市的該疫苗進(jìn)行了疫苗臨床免疫保護(hù)試驗(yàn)，取得了良好的控制效果?，F(xiàn)將該豬場(chǎng)發(fā)病、診斷及免疫保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果整理如下，供臨床獸醫(yī)技術(shù)人員參考，為今后規(guī)模豬場(chǎng)非典型豬瘟病例的防控提供技術(shù)支撐。

1 基本情況

A場(chǎng)為某省級(jí)生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)，種豬繁育場(chǎng)，存欄母豬數(shù)量332頭，其中能繁母豬為278頭。圈舍條件較好，生產(chǎn)工藝先進(jìn)并執(zhí)行程序化免疫。但該場(chǎng)人員素質(zhì)偏低，管理不夠規(guī)范，措施具體執(zhí)行過程缺乏有效監(jiān)督。

B場(chǎng)為A場(chǎng)新建合作肥育場(chǎng)，圈舍條件較好，肥育豬總存欄規(guī)模500頭，但飼養(yǎng)管理人員生產(chǎn)防疫理念、技術(shù)素養(yǎng)均有待提高。

上述兩場(chǎng)發(fā)病前一直使用某廠生產(chǎn)的豬瘟（ST傳代細(xì)胞源）活疫苗和豬瘟（脾淋源）活疫苗。其中種豬每年免疫豬瘟疫苗4次，每次注射2頭份/頭，使用豬瘟（ST傳代細(xì)胞源）活疫苗、豬瘟（脾淋源）活疫苗交替免疫；仔豬采用在30日齡、60日齡各免疫豬瘟（ST傳代細(xì)胞源）活疫苗1~2頭份/頭的免疫方案。

豬瘟E2蛋白滅活疫苗為新疆天康生物制品廠提供的正式上市產(chǎn)品，批號(hào)20171120，有效期 20181119，50毫升/瓶，2毫升/頭份。豬瘟免疫抗體間接ELISA檢測(cè)試劑盒由北京試劑元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司提供，批號(hào)：CSF20180918E，有效期 20190917；豬瘟免疫抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒由美國(guó)愛德仕公司提供，批號(hào)：L871。

2 發(fā)病情況

（1）A場(chǎng)自2018年8月中旬保育豬和肥育豬陸續(xù)出現(xiàn)死亡。臨床癥狀主要表現(xiàn)為：精神高度沉郁，體溫升高（41~42℃），稽留熱，嚴(yán)重時(shí)不能行走、站立困難、扎堆。有明顯結(jié)膜炎，部分豬拉黃綠色稀便，病豬在耳部、頜下、頸部、腹部、四肢等處出現(xiàn)淤血、出血斑點(diǎn)，病程稍長(zhǎng)，約1~2周。保育豬、肥育豬群體死亡率5%~11%。

（2）B場(chǎng)2018年9月中旬自A場(chǎng)轉(zhuǎn)入外觀健康、60日齡左右保育豬106頭（未進(jìn)行豬瘟二次加強(qiáng)免疫），進(jìn)圈3日后即表現(xiàn)臨床癥狀，發(fā)病豬只日漸增多。臨床癥狀主要表現(xiàn)為：精神高度沉郁，體溫升高達(dá)40.5~42℃，稽留熱，扎堆，有明顯結(jié)膜炎，部分豬拉黃綠色稀便，病豬在耳部、頜下、頸部、腹部、四肢等處出現(xiàn)淤血、出血斑點(diǎn)，個(gè)別豬死亡后從鼻孔、嘴角流出大量白色或血色泡沫，甚至有的直接流出血液。病程約3~7天。至10月底，群體死亡率69.8%。

3 剖檢變化

分別對(duì)A、B兩場(chǎng)4頭死亡豬只進(jìn)行病理解剖：尸體外表耳部、頜下、頸部、腹部、四肢等處出現(xiàn)淤血、出血斑點(diǎn)，其中一頭氣管和支氣管充血，腔內(nèi)充滿白色或淡紅色泡沫，肺門淋巴結(jié)水腫，特征性變化為脾臟稍腫大、有出血性梗死，腎臟表面及腎盂內(nèi)有大量針尖大小出血點(diǎn)，腸系膜、腹股溝淋巴結(jié)切面成大理石樣出血斑紋，膀胱、喉頭會(huì)厭軟骨內(nèi)點(diǎn)狀出血，回盲口有扣狀潰瘍。胃底黏膜有片狀出血，大小腸各部多見充血、出血。心耳、心冠多有出血點(diǎn)或斑，1個(gè)病例心內(nèi)膜有出血斑。A場(chǎng)剖檢典型病變見圖1—圖4，B場(chǎng)剖檢典型病變見圖5—圖8。

圖1 A場(chǎng)脾臟出血性梗死

圖2 A場(chǎng)腎臟表面有出血點(diǎn)

圖3 A場(chǎng)腸系膜淋巴結(jié)大理石樣出血

圖4 A場(chǎng)會(huì)厭軟骨出血

圖5 B場(chǎng)脾臟出血性梗死

圖6 B場(chǎng)腎臟土黃色、表面有出血點(diǎn)

圖7 B場(chǎng)會(huì)厭軟骨出血

圖8 B場(chǎng)肺臟表面出血斑

4 實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)及病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

通過流行病學(xué)調(diào)查、現(xiàn)場(chǎng)解剖診斷，初步判定懷疑A、B兩場(chǎng)發(fā)病豬均為豬瘟病毒感染。2018年9月對(duì)A場(chǎng)保育豬分別采集同群假定健康豬血清8份、發(fā)病豬血清4份，對(duì)B場(chǎng)采集發(fā)病死亡豬病料兩套（包含扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、肺臟），送相關(guān)級(jí)別實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清學(xué)和病原學(xué)診斷。同時(shí)對(duì)母豬免疫豬瘟E2蛋白滅活疫苗所產(chǎn)的30日齡斷奶仔豬（未首免豬瘟）采血樣8份，進(jìn)行母源抗體監(jiān)測(cè)。

（1）血清學(xué)檢測(cè)。某BLS-2級(jí)實(shí)驗(yàn)室采用進(jìn)口愛德仕豬瘟液相阻斷ELISA試劑盒對(duì)20份血清學(xué)進(jìn)行血清抗體阻斷率檢測(cè)；某縣級(jí)BLS-1級(jí)實(shí)驗(yàn)室對(duì)其中的5份同群假定健康豬血清和4份發(fā)病豬血清采用免疫后早期抗體檢測(cè)中敏感性明顯高于進(jìn)口阻斷ELISA試劑盒，而特異性與之沒有明顯差異的國(guó)產(chǎn)豬瘟間接ELISA試劑盒[7-8]，按試劑盒說(shuō)明操作步驟進(jìn)行了檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果見表1和表2。

（2）病原學(xué)檢測(cè)。某BLS-2級(jí)實(shí)驗(yàn)室在病原學(xué)檢測(cè)中對(duì)上述樣品進(jìn)行了合并，其中B場(chǎng)兩套病料合并為樣品B，假定健康群8份血清合并為樣品A1，4份發(fā)病豬血清合并為樣品A2，采用熒光PCR檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示樣品B、A1、A2均為豬瘟病原學(xué)陽(yáng)性。

表1 豬瘟抗體液相阻斷ELISA（愛德仕）檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

表2 豬瘟抗體間接ELISA（北京世紀(jì)元亨）檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

5 結(jié)論

由表1液相阻斷ELISA檢測(cè)數(shù)據(jù)可見，保育豬假定健康群血清樣品陰性率為62.5%（5/8），癥狀明顯豬只樣品卻沒有陰性樣品，且數(shù)據(jù)離散度降低至4.18%，應(yīng)為抗體陰性豬受豬瘟野毒感染抗體逐漸上升，抗體陽(yáng)性豬受野毒感染中和，抗體水平降低從而拉低了群體檢測(cè)數(shù)據(jù)的離散度。結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查、病理解剖及實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)、病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果判斷上述兩場(chǎng)豬群發(fā)生死亡的主要原因?yàn)樨i瘟病毒感染。同時(shí)注射過豬瘟E2蛋白重組桿狀病毒滅活疫苗母豬所產(chǎn)的30日齡斷奶仔豬檢測(cè)數(shù)據(jù)體現(xiàn)了良好的母源抗體水平和整齊度。

6 處理措施

（1）A場(chǎng)2018年8月中旬經(jīng)對(duì)保育、肥育豬進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)臨床解剖診斷后，立即采用豬瘟E2蛋白滅活疫苗對(duì)母豬普免1次；同時(shí)加強(qiáng)了斷奶仔豬30日齡豬瘟（ST傳代細(xì)胞源）活苗首免工作的管理和監(jiān)督，并對(duì)肥育豬緊急接種豬瘟（ST傳代細(xì)胞源）活苗1次，劑量為3頭份/頭，但直至9月底保育及肥育階段的發(fā)病情況依然沒有明顯改觀。結(jié)合9月底B場(chǎng)發(fā)病及實(shí)驗(yàn)室診斷情況，獸醫(yī)技術(shù)人員建議，10月份開始母豬采用豬瘟E2蛋白重組桿狀病毒滅活疫苗產(chǎn)前45天跟胎免疫，劑量為2毫升/頭；且自10月2日起將30日齡仔豬豬瘟初免疫苗也調(diào)整為豬瘟E2蛋白重組桿狀病毒滅活疫苗，并對(duì)所有肥育早期（120日齡以內(nèi)）豬只普免豬瘟E2蛋白滅活疫苗1次，劑量均為2毫升/頭。自10月20日以后，保育及肥育豬群恢復(fù)穩(wěn)定，再未出現(xiàn)批量死亡。

（2）B場(chǎng)豬群9月底經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)和實(shí)驗(yàn)室診斷后，采用豬瘟（脾淋源）活疫苗進(jìn)行了緊急接種，劑量為4頭份/頭，病情沒有得到有效控制，至10月下旬總死亡率達(dá)69.8%。

7 討論

（1）豬瘟C株活疫苗被譽(yù)為控制豬瘟的“金標(biāo)準(zhǔn)”疫苗，能誘導(dǎo)針對(duì)不同強(qiáng)毒株和各種基因群的免疫保護(hù)[9]，臨床保護(hù)率可達(dá)100%[10]。但筆者在長(zhǎng)達(dá)10余年的20余次重大動(dòng)物疫病春、秋季強(qiáng)制免疫病種抗體水平監(jiān)測(cè)和50余個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)日常商業(yè)送檢過程中，均有一定比例的免疫個(gè)體抗體陰性樣品檢出。這些陰性樣品分布于保育末期、肥育早期、臨產(chǎn)及產(chǎn)床母豬等各個(gè)階段，比例從93.33%（14/15）到3.33%（1/30）不等。這與徐璐等（2014年）報(bào)道的從1 245份臨床免疫血清樣品中采用間接ELISA試劑盒檢出14.62%（182/1 245）陰性樣品、采用愛德仕公司液相阻斷ELISA試劑盒檢出27.71%（345/1 245）陰性樣品[7]的研究結(jié)果一致。生產(chǎn)中將上述現(xiàn)象的原因主要?dú)w結(jié)為免疫操作不規(guī)范、免疫程序不合理或所用豬瘟活疫苗品質(zhì)下降等，較少歸結(jié)為豬只自身因各種原因?qū)е碌拿庖吣褪埽瑢?duì)豬瘟C株活疫苗免疫反應(yīng)低下不能產(chǎn)生有效保護(hù)抗體的原因。在本案例初期雖然加強(qiáng)了斷奶仔豬豬瘟活疫苗的首免工作，但依然在50日齡前后的樣品中檢出大比例的豬瘟抗體陰性個(gè)體，分析表明免疫耐受應(yīng)是此次保育仔豬和肥育前期仔豬發(fā)生豬瘟病毒感染的主要原因。

（2）豬繁殖與呼吸綜合征和豬圓環(huán)病毒病在豬場(chǎng)內(nèi)的感染普遍存在[11]，作為豬的主要免疫抑制病對(duì)豬瘟疫苗誘導(dǎo)的體液和細(xì)胞免疫具有顯著的影響[12-13]，是造成豬瘟疫苗免疫個(gè)體樣品中檢出陰性樣品的重要原因。在臨床多起產(chǎn)房仔豬發(fā)生非典型豬瘟的處置案例中，母豬繁殖與呼吸綜合征或豬圓環(huán)病毒感染長(zhǎng)期沒有得到有效馴化和控制是關(guān)鍵誘因。在實(shí)踐中往往隨著以上兩病的有效控制，豬瘟免疫抗體的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)也明顯好轉(zhuǎn)。

（3）豬瘟疫苗種類多，抗原含量差距較大，C株疫苗免疫后，可很快誘導(dǎo)細(xì)胞免疫，免疫早期雖然檢測(cè)不到中和抗體，但豬只卻能抵抗強(qiáng)毒的攻擊，說(shuō)明免疫早期細(xì)胞免疫的作用更加重要[14-15]。如果接種后晚些時(shí)間攻毒，豬群中和抗體水平與攻毒保護(hù)之間呈一定相關(guān)性[16-17]。因此規(guī)模化豬場(chǎng)制定免疫程序最好以群體抗體檢測(cè)結(jié)果為依據(jù)。另外母豬群的免疫水平及均勻性直接關(guān)系到仔豬群的群體免疫效果，因此做好種豬群免疫，對(duì)仔豬豬瘟防控水平至關(guān)重要。豬瘟綜合防控是一個(gè)復(fù)雜的工程，免疫預(yù)防是目前控制豬瘟的重要手段，在使用疫苗的同時(shí)，應(yīng)配合良好的檢測(cè)手段和科學(xué)的評(píng)價(jià)方法、以優(yōu)化免疫程序才能保證豬瘟免疫效果。

（4）豬瘟E2蛋白重組桿狀病毒滅活疫苗與豬瘟（脾淋源、ST細(xì)胞源）活疫苗在本次發(fā)病案例的控制效果對(duì)比中表現(xiàn)出一定比較優(yōu)勢(shì)，但作為一種新工藝的豬瘟防控工具，在面對(duì)豬瘟這一對(duì)養(yǎng)豬行業(yè)舉足輕重的重大疫病，在其防控中大范圍推廣使用尚需更多技術(shù)專家的系統(tǒng)攻毒保護(hù)試驗(yàn)和大量的田間處置案例及免疫檢測(cè)對(duì)比分析研究數(shù)據(jù)的支持。