(1.蕪湖市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所， 蕪湖 241000；2.河北工程大學(xué) 分析測試實驗中心， 邯鄲 056038；3.河北工程大學(xué) 生命科學(xué)與食品工程學(xué)院， 邯鄲 056038)

血液凈化方法直接去除患者血液中存在的致病物質(zhì)，是一種十分有效的治療方法，具有操作方便、安全性高、價格相對較低的特點，適合國情[1]。應(yīng)用血液凈化吸附劑去除血液及血液制品中的有毒物，是血液凈化的一個重要方面，而吸附樹脂是應(yīng)用較多的血液凈化吸附劑之一。吸附樹脂按化學(xué)結(jié)構(gòu)可分成極性吸附樹脂和非極性吸附樹脂兩大類。苯乙烯-二乙烯苯型吸附樹脂是典型的非極性吸附樹脂[2]，該類樹脂在生產(chǎn)過程中的殘留產(chǎn)物有苯、甲苯、二甲苯、二乙苯、硝基苯、萘等，對人體有不同程度的傷害，為保證使用安全，根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局要求，需對其殘留物進行限量檢查，因此建立一種準(zhǔn)確、靈敏的分析方法來監(jiān)測血液凈化醫(yī)用吸附樹脂中的有機溶劑殘留顯得十分必要。

目前國內(nèi)吸附樹脂中有機殘留物的報道較多見于藥品中的檢測[3-5]，且分析方法多采用氣相色譜法[6-9]，而具有更加強大定性定量能力的氣相色譜-質(zhì)譜法的應(yīng)用研究較少[10]。本實驗建立了一種GC-MS法測定血液凈化醫(yī)用吸附樹脂中有機溶劑殘留的分析方法，以限量較為嚴(yán)格的苯、硝基苯、二乙苯和萘為研究對象，方法簡便、快速、靈敏，為安全使用血液凈化醫(yī)用吸附樹脂提供了質(zhì)量控制方法。

1 實驗部分

1.1 儀器設(shè)備

Agilent 6890-5973 N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS，安捷倫公司)，配備EI電離源；XS 205型電子天平(瑞士梅特勒-托利多國際有限公司)；KQ 3200E超聲波萃取儀(江蘇昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 藥品與試劑

苯(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，純度：99.5 %)；硝基苯(天津市福晨化學(xué)試劑廠，分析純)；萘(天津市大茂化學(xué)儀器供應(yīng)站，分析純)；間二乙苯(AccuStandard，純度：98 %)；對二乙苯(AccuStandard，純度：96.5 %)；鄰二乙苯(Alfa,純度：97 %)，內(nèi)標(biāo)物4-溴氟苯(濃度：1 000 μg/mL，美國SUPELCO公司)；供試品(某醫(yī)療器械公司提供)。

二氯甲烷、丙酮、甲醇、異丙醇均為HPLC級，購自O(shè)CEANPAK公司，三氯甲烷為分析純試劑(萊陽經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠)重蒸制得。

1.3 溶液的配制

對照品溶液：精密稱取苯86.1 mg、硝基苯46.2 mg、萘49.5 mg、二乙苯(間、對、鄰)58.3、55.3、53.9 mg于10 mL容量瓶中，加三氯甲烷制成對照品儲備溶液，各化合物濃度如下：苯8.57 mg/mL，硝基苯4.61 mg/mL，萘4.94 mg/mL，二乙苯(間、對、鄰)5.71 mg/mL、5.34 mg/mL、5.23 mg/mL。取對照品儲備液加三氯甲烷溶液稀釋成5種不同濃度的系列溶液作為標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液，內(nèi)標(biāo)溶液稀釋成20 μg/mL的內(nèi)標(biāo)工作溶液。

供試品溶液：精密稱取供試品0.5 g，置10 mL具塞離心管中，精密加入三氯甲烷2.5 mL，蓋上塞子后超聲提取10min，過濾，取1 mL濾液于進樣小瓶，加入內(nèi)標(biāo)混勻后得。

1.4 GC-MS條件

GC分析條件：Agilent DB-624毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×1.4 μm)；He載氣(純度﹥99.999 %)，載氣流速：1.0 mL/min；脈沖不分流進樣1.00 μL(均采用自動進樣器)；進樣口溫度為250 ℃；色譜柱升溫程序：起始溫度為40 ℃，保持5 min，以10 ℃/min升溫至160 ℃，再以25 ℃/min升溫至230 ℃，保持3 min。

MS條件：離子源溫度為230 ℃；四級桿溫度為150 ℃；接口溫度為280 ℃；質(zhì)譜采集模式為選擇離子檢測(SIM)，各化合物的SIM離子選擇如下：苯(m/z)-78、52，二乙苯(m/z)-105、119、134，硝基苯(m/z)-77、123，萘(m/z)-128、102，4-溴氟苯(m/z)-174、176、95。

2 結(jié)果與討論

2.1 專屬性實驗

在具塞離心管中加入2.5 mL三氯甲烷后按供試品溶液制備方法進行全程空白實驗，得到的譜圖見圖1，可見目標(biāo)物未檢出，處理過程未引入污染?；旌蠈φ掌飞V圖見圖2，可見在此儀器條件下可得到分離效果較好的色譜圖。

圖1 全程空白色譜圖

圖2 混合對照品色譜圖

2.2 提取條件的選擇

本實驗考察了幾種常用的提取溶劑的提取效果，發(fā)現(xiàn)二氯甲烷中苯的本底含量較高，無法忽略溶劑中目標(biāo)物的存在，實驗繼而考查了丙酮、甲醇、異丙醇這幾種溶劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丙酮中苯也有較高含量，甲醇、異丙醇中苯的本底含量較低，但苯在兩溶劑中峰形異常，最終考查了自行重蒸的三氯甲烷作為溶劑的效果，較為理想，所以本實驗采取重蒸制得的三氯甲烷作為本實驗所用溶劑。

實驗考察發(fā)現(xiàn)不同的溶劑量與樹脂重量比例差異并不大，在樣品被充分浸泡的前提下選用盡量少的溶劑以提高樣品中目標(biāo)物的檢測靈敏度，實驗最終選用2.5 mL溶劑提取0.5 g樣品的方法制備供試品。

實驗也考察了提取時間對實驗結(jié)果的影響。精密稱取3份樹脂0.5 g于10 mL具塞離心管中，精密加入2.5 mL三氯甲烷，分別超聲5、10、20 min，過濾，取1 mL濾液加入5 μL內(nèi)標(biāo)工作溶液后上機分析，檢測結(jié)果見表1。

表1 提取時間考察結(jié)果

注：因供試品中硝基苯含量遠(yuǎn)低于線性最低點，無法得到準(zhǔn)確含量，因此未將硝基苯納入考察范圍，下同。

由表中數(shù)據(jù)可知，提取時間為10 min和20 min的提取效率較好，其中又以10 min的提取結(jié)果最為理想，實驗最終選定的提取時間為10 min。

2.3 方法的線性和精密度考察

取5種不同濃度的工作溶液各1 mL于進樣小瓶中，加入5 μL內(nèi)標(biāo)工作溶液，混勻后吸取上述溶液各1 μL上機分析，以各成分的進樣濃度與內(nèi)標(biāo)濃度比值為橫坐標(biāo)，響應(yīng)值與內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值比值作為縱坐標(biāo)進行回歸分析，結(jié)果見表2。

表2 6種有機溶劑的線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢測限及方法精密度

取最低濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液1μL注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，以所述條件進行測定，記錄色譜圖，利用色譜軟件計算各成分信噪比(S/N)，繼而計算檢測限，結(jié)果見表2。

精密稱取6份樹脂0.5 g，按供試品制備方法制備樣品后上機分析，考察方法精密度，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表2，表明方法精密度良好。

2.4 準(zhǔn)確度考察

取樹脂0.5 g，精密稱定，一式6份，置10 mL具塞離心管中，精密加入三氯甲烷2.5 mL，再加入對照品混合溶液得到加標(biāo)樣品溶液，照供試品制備方法制備樣品，分別測定，加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表3。從表中可以看出，平均加標(biāo)回收率為89.7 %～109.5 %，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于14 %，符合痕量有機殘留分析要求。

2.5 穩(wěn)定性考察

取0.5 g樹脂制備供試品，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣檢測，結(jié)果見表4，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于4.5 %，表明供試品溶液在12 h內(nèi)測定穩(wěn)定性良好。

表3 樣品中有機溶劑殘留的測定結(jié)果及平均加標(biāo)回收率

表4 穩(wěn)定性考察結(jié)果

3 小結(jié)

國家食品藥品監(jiān)督管理局對血液凈化醫(yī)用吸附樹脂中殘留有機溶劑有嚴(yán)格的限量規(guī)定，根據(jù)國家藥品審評中心的有關(guān)要求，暫定此類產(chǎn)品中有機殘留物的限度為：苯 1.0×10-5%，硝基苯 5.0×10-5%，萘和二乙苯均為5.0×10-4%，對應(yīng)含量為：苯 100 μg/kg，硝基苯 500 μg/kg，萘和二乙苯均為5 000 μg/kg，本文檢測限遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于此限量標(biāo)準(zhǔn)，充分滿足藥品監(jiān)督部門的限量要求。實驗所用供試品中4種化合物含量見表3中“本底含量”欄，可見供試品中目標(biāo)化合物殘留量符合限量要求。

GC-MS聯(lián)用技術(shù)與單一的氣相色譜檢測技術(shù)相比，在保證有足夠高的靈敏度以外還具有更加強大的定性能力，本實驗建立的GC-MS聯(lián)用法適用于血液凈化醫(yī)用吸附樹脂中苯、二乙苯、硝基苯和萘的準(zhǔn)確測定，經(jīng)方法學(xué)試驗驗證，方法專屬性強，穩(wěn)定性好，靈敏度高，滿足相關(guān)殘留定量檢測的要求，可作為血液凈化醫(yī)用吸附樹脂中有機溶劑殘留的質(zhì)量控制方法。