劉毅，冷鵑，劉亮亮，肖愛平

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所，湖南長(zhǎng)沙410205）

大麻（CannabissativaL.），別名漢麻、線麻、火麻等，是大麻科大麻屬一年生草本植物，包括纖維用大麻、藥用大麻、野生大麻等3類［1］。大麻用途很多，可以提供纖維、纖維素、種子和種子油、大麻醇類物質(zhì)，以及生物質(zhì)材料，此外還可作為研究特殊代謝途徑的模式植物，具有很大的開發(fā)價(jià)值［2］。大麻還具有藥用價(jià)值，根莖葉均可入藥，大麻花主治記憶力衰退；大麻籽主治便秘、消渴、血痢不止、發(fā)落不生等；大麻莖或莖皮主治破血、跌打損傷等［3］。我國(guó)是世界上最主要的大麻生產(chǎn)國(guó)，南起云南，北達(dá)黑龍江都有大麻種植，大麻在我國(guó)主要用作紡織原料［4］。大麻的葉、花、莖中有62種化合物，包括黃酮及其苷類化合物、生物堿類化合物、香豆素類化合物、萜類及甾醇類化合物、脂肪酸類化合物、菲類化合物及其他化合物［5］，其中黃酮為極具研究?jī)r(jià)值的活性物質(zhì)。

黃酮類化合物具有抗氧化、清除自由基［6］、抗突變、抗衰老、抗菌［7］、抗腫瘤［8］等生物活性，有強(qiáng)心、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、降血壓、降血脂、祛痰、鎮(zhèn)咳、平喘以及減少糖醇堆積、利于白內(nèi)障防治等藥用功效［9］。在抗氧化作用上，黃酮表現(xiàn)為對(duì)單線態(tài)氧及含氧自由基的清除能力，其中，單線態(tài)氧以及生物系統(tǒng)中產(chǎn)生的自由基如超氧化物自由基和羥基自由基均可誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，損傷細(xì)胞［10］。目前黃酮類化合物的提取方法包括水提法、有機(jī)溶劑提取法、微波提取法、超聲波提取法、酶解法、大孔樹脂吸附法和超濾法等［11］。在黃秋葵［12］、金雀花［13］、苦參［14］、枇杷［15］、半枝蓮［16］、薄荷［17］、水芹［18］等植物中，對(duì)黃酮提取工藝及抗氧化性研究均有報(bào)道。大麻中黃酮提取純化工藝的研究已有報(bào)道［19］，而對(duì)其抗氧化能力的研究還未見報(bào)道。黃酮類化合物多數(shù)以甙的形式存在，少數(shù)以游離形式存在，是一種很強(qiáng)的活性氧自由基清除劑，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域［20］。不同植物中黃酮提取的最佳條件及抗氧化能力存在差異：在沙棘中，確定最佳提取條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)60&、提取時(shí)間 40 min、料液比1∶50（g／mL）；在黃秋葵中，最佳提取工藝為料液比1∶25（g／mL）、提取時(shí)間2 min、提取溫度75℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)50&，沙棘果渣黃酮和黃秋葵黃酮提取液對(duì)羥自由基和超氧陰離子自由基均有一定的清除作用，表現(xiàn)出較好的體外抗氧化活性［21］。

本試驗(yàn)以大麻葉片為試驗(yàn)材料，探究回流法提取大麻葉片總黃酮的工藝條件，即以總黃酮浸提量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，運(yùn)用單因素試驗(yàn)考察乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、料液比、提取溫度對(duì)黃酮提取效率的影響，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上通過響應(yīng)面分析法優(yōu)化總黃酮提取工藝；通過FRAP法、ABTS法、DPPH自由基清除能力等測(cè)定黃酮的總抗氧化能力，評(píng)價(jià)大麻葉總黃酮的體外抗氧化活性，旨在為大麻葉總黃酮的開發(fā)利用提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大麻葉：“大麻2號(hào)”頂部向下8～12片成熟葉，隨機(jī)采集于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所麻類種質(zhì)資源圃。采集葉片后，于烘箱中45℃干燥充分，粉碎得到大麻葉粉末，供后續(xù)試驗(yàn)用。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（上海源葉生物科技有限公司，分析純）、乙醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純）、甲醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純）、乙酸鉀（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純）、六水合三氯化鋁（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純）。

FRAP試劑盒（南京建成有限公司）、DPPH試劑盒（南京建成有限公司）、ABTS試劑盒（南京建成有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

PB602-L電子天平（梅特勒-托利多國(guó)際有限公司）、KY15-19粉碎機(jī)（天津美斯特有限公司）、UV-2700紫外可見分光光度計(jì)（島津企業(yè)管理有限公司）、EV351旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（北京萊伯泰儀器股份有限公司）、BPG-9140A風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）、KQ-5200DV超聲波清洗器（昆山市儀器超聲有限公司）、WEB-6多孔水浴鍋（DAIHAN Scientific Co，Ltd）。

1.3 方法

1.3.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品20 mg，加甲醇溶解并定容到100 mL，得到0.2 mg／mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，得到0.005、0.010、0.020、0.040、0.060、0.080mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)品梯度溶液，各取1mL到試管中，加入2 mL 0.10 mol／L三氯化鋁溶液，搖勻，靜置6 min，再加入3 mL 1 mol／L乙酸鉀溶液，搖勻后靜置6 min，再用甲醇（甲醇∶水（V∶V）＝70∶30）溶液定容到10 mL，靜置15 min后，于420 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 總黃酮含量測(cè)定

準(zhǔn)確稱取大麻葉粉末3批，每批2 g，分別加入乙醇溶液后在一定溫度下回流提取，將提取液過濾，然后用乙醇溶液定容到100 mL。取提取液1 mL至10 mL比色管中，各加入2 mL 0.10 mol／L三氯化鋁溶液搖勻，靜置6 min，再加入3 mL 1 mol／L乙酸鉀溶液，搖勻，靜置6 min，再加入甲醇溶液（甲醇∶水（V∶V）＝70∶30）定容至刻度，放置15 min。樣品空白不加顯色劑，分別在420 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，保證吸光值在線性范圍內(nèi)。代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算濃度數(shù)據(jù)C（mg／mL）（以蘆丁為參比），3次結(jié)果取平均值。按公式（1）計(jì)算總黃酮浸提量。

式中：X—測(cè)出的濃度，mg／mL；

n—稀釋倍數(shù)，量綱為1；

V—測(cè)定時(shí)取樣體積，mL；

W—樣品質(zhì)量，g。

1.3.3 單因素試驗(yàn)

分別以提取時(shí)間（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h），乙醇體積分?jǐn)?shù)（50&、60&、70&、80&、90&、100&），料液比（g／mL）（1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30），提取溫度（50、60、70、80、90℃），提取次數(shù)（1、2、3、4次）為單因素，考察其對(duì)總黃酮浸提量的影響。

1.3.4 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用Design-Expert 8.0軟件進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)［22］。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選取料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、提取溫度為影響因素，以總黃酮浸提量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，提取2次，設(shè)計(jì)四因素三水平響應(yīng)面分析試驗(yàn)，中心試驗(yàn)重復(fù)4次，共29個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)［23］。試驗(yàn)因素水平如表1所示。

表1 響應(yīng)面分析因素與水平編碼值Table 1 Factors and levels of response surface analysis

1.3.5 FRAP法測(cè)定總抗氧化能力

參照試劑盒的FRAP法測(cè)定總黃酮的總抗氧化能力。總抗氧化能力用FeSO4標(biāo)準(zhǔn)液的濃度表示。FRAP工作液按照檢測(cè)緩沖液、基質(zhì)液與底物液體體積比為10∶1∶1配置，充分混合避光37℃孵育，現(xiàn)配現(xiàn)用，1～2 h內(nèi)用完。標(biāo)準(zhǔn)品 FeSO4·7H2O溶液設(shè)置 0.10、0.20、0.25、0.50、1.00、2.00 mmol／L 6個(gè)濃度梯度，各取5μL與180μL FRAP工作液反應(yīng)后測(cè)定A593，以標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品檢測(cè)取5μL，設(shè)置3次重復(fù)，測(cè)定吸光度后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其總抗氧化能力（以FeSO4.7H2O為參比）。

1.3.6 ABTS快速法測(cè)定總抗氧化能力

參考T-AOC試劑盒（ABTS快速法）測(cè)定總黃酮總抗氧化能力，用相對(duì)Trolox總抗氧化能力表示。Trolox標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)置0.1、0.2、0.3、0.4、0.8、1.0 mmol／L 6個(gè)濃度梯度，與過氧化物酶工作液、ABTS工作液反應(yīng)后在414 nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測(cè)定組為稀釋的黃酮提取液與過氧化酶工作液、ABTS工作液反應(yīng)，反應(yīng)相同時(shí)間后測(cè)吸光值A(chǔ)414，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮相對(duì)于Trolox的總抗氧化能力（以Troxlox為參比）。

1.3.7 DPPH自由基清除能力測(cè)定

取1mg DPPH溶解于20mL的甲醇，超聲5 min，配制成DPPH溶液。取DPPH溶液2mL加入5個(gè)試管中，依次加入樣品液20、40、60、80、120μL，加入相應(yīng)體積的無水乙醇定容到3 mL，混合反應(yīng)5 min后，在519 nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸光值A(chǔ)1；空白對(duì)照組用2 mL無水乙醇代替DPPH溶液［24-25］，反應(yīng)相同時(shí)間后，測(cè)定519 nm波長(zhǎng)下吸光值A(chǔ)0。此外，抗壞血酸（VC）作陽性對(duì)照。DPPH自由基清除率按式 （2）計(jì)算。

假設(shè)樣品的最大抑制率是100&，此時(shí)A1＝A2；最小抑制率是0，此時(shí)A2-A1＝A0，

式中：A0—空白吸光度；

A1—樣品吸光度；

A2—最小吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，蘆丁質(zhì)量濃度（C，mg／mL）為橫坐標(biāo)繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y＝31．35x-0．0114，R2＝0．994，相關(guān)性良好，線性范圍 0.05～0.08 mg／mL。

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 提取時(shí)間對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響

以1∶15（g／mL）料液比加入無水乙醇，在70℃的水浴鍋中回流提取1次，測(cè)定不同提取時(shí)間（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h）對(duì)總黃酮浸提量的影響。由圖2可知，在提取時(shí)間1～2 h內(nèi)，隨著提取時(shí)間的增加，總黃酮浸提量也隨之增加，而在2 h后出現(xiàn)降低趨勢(shì)，2.5 h后緩慢增加。這是由于提取時(shí)間會(huì)影響大麻葉細(xì)胞壁的破壞程度，隨著提取時(shí)間增長(zhǎng)，細(xì)胞壁破壞更加充分，更多黃酮得以釋放，達(dá)到閾值后，提取時(shí)間過長(zhǎng)，黃酮可能被破壞［16］。因此，提取時(shí)間優(yōu)選為2.0 h。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of rutin

圖2 提取時(shí)間對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響Fig.2 The effect of extraction time on the yield of flavonoids from hemp leaves

2.2.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響

以1∶15（g／mL）料液比加入不同體積分?jǐn)?shù)乙醇（50&、60&、70&、80&、90&、100&），在70℃水浴鍋中提取2.0 h，提取1次，測(cè)定乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響。由圖3可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)為80&時(shí)，總黃酮浸提量最大。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)在50&～80&時(shí)，總黃酮浸提量隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加而增加，而乙醇體積分?jǐn)?shù)超過80&后則有所降低。乙醇可影響葉片細(xì)胞穿透能力，從而改變黃酮提取效率，此外，乙醇體積分?jǐn)?shù)過高，可能導(dǎo)致其他醇溶性物質(zhì)被提出，而總黃酮溶出較少［26］。

2.2.3 料液比對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響

以不同料液比 （g／mL）（1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30）加入 80&乙醇，在 70℃水浴鍋中提取2.0 h，提取1次，測(cè)定料液比對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響。由圖4可知，隨著浸提液用量的增加，總黃酮浸提量總體上有增大趨勢(shì)，當(dāng)料液比為1∶25（g／mL）時(shí)總黃酮浸提量達(dá)到最大，之后則隨著浸提液用量的增加，總黃酮浸提量減小。浸提液用量增加，黃酮物質(zhì)溶解析出增加，但達(dá)到閾值后，提取量減少，此外，提取成本也增加。因此1∶25（g／mL）為最優(yōu)料液比。

圖3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響Fig.3 The effect of ethanol concentration on the yield of flavonoids from hemp leaves

圖4 料液比對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響Fig.4 The effect of soild-to-liquid ratio on the yield of flavonoids from hemp leaves

2.2.4 提取溫度對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響

以1∶25（g／mL）料液比加入 80&乙醇，在不同提取溫度（50、60、70、80、90℃）下水浴提取2.0 h，提取1次，測(cè)定不同提取溫度對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響。由圖5可知，提取溫度在50～80℃時(shí)，隨著溫度升高，總黃酮浸提量增加，在80℃時(shí)總黃酮浸提量達(dá)到最高。當(dāng)提取溫度高于80℃時(shí)，總黃酮浸提量下降。這可能是由于溫度升高導(dǎo)致分子運(yùn)動(dòng)增加，黃酮與溶劑接觸增加，故提取量升高，而過高的溫度會(huì)導(dǎo)致黃酮被氧化，導(dǎo)致提取量降低［27］。因此，80℃是最優(yōu)提取溫度。

圖5 提取溫度對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響Fig.5 The effect of extraction temperature on the yield of flavonoids from hemp leaves

2.2.5 提取次數(shù)對(duì)大麻葉總黃酮提取量的影響

以1∶25（g／mL）料液比加入80&乙醇，在80℃水浴鍋中，提取4次，測(cè)定不同提取次數(shù)對(duì)大麻葉總黃酮提取量的影響。由圖6可知，隨著提取次數(shù)的增加，總黃酮浸提量逐次減小，提取3次后總黃酮浸提取量幾乎不再增加。因此，本研究中最佳提取次數(shù)為2次。

圖6 提取次數(shù)對(duì)大麻葉總黃酮提取量的影響Fig.6 The effect of extraction times on the yield of flavonoids from hemp leaves

2.3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 響應(yīng)面結(jié)果分析

利用Design-Expert8.0軟件的Box-Behnken設(shè)計(jì)［28］，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)間、料液比和提取溫度為自變量，總黃酮浸提量為響應(yīng)值，進(jìn)行響應(yīng)面分析，結(jié)果見表2。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多元二次回歸擬合，建立提取工藝參數(shù)回歸模型?；貧w方程為：Y＝14．21+1．38A+1．34B+0．84C+0．88D+0．18AB-2．73AC-0．65AD+0．83BC-0．24BD+0．062CD-1．48A2-3．21B2-5．59C2-3．13D2。

表2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Box-Behnken design with experimental results

續(xù)表2

模型的決定系數(shù)R2＝0．9105，校正系數(shù)，說明該模型能解釋82.10&響應(yīng)值的變化，與實(shí)際試驗(yàn)擬合良好，表明該模型可以對(duì)總黃酮浸提量結(jié)果進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。由回歸方程各項(xiàng)方差分析中F檢驗(yàn)可以判斷自變量對(duì)因變量的影響。由表3可知，模型的p＜0．0001，表明方程擬合極顯著；模型失擬項(xiàng)不顯著p＞0．05。A的一次項(xiàng)，B、C、D的二次項(xiàng)、交互項(xiàng)AC，對(duì)應(yīng)的p值遠(yuǎn)小于0.01，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響極顯著；B的一次項(xiàng)、A的二次項(xiàng)對(duì)應(yīng)的p值小于0.05，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響顯著。此外，還可得出，試驗(yàn)中各因素對(duì)黃酮浸提量影響的主次順序?yàn)椋篈＞B＞D＞C，即乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)黃酮提取率的影響最大，其次是提取時(shí)間和提取溫度，最后是料液比。

表3 回歸方程及方差分析Table 3 Analysis of variances for the developed regression equation

2.3.2 交互作用的影響

通過Box-Behnken試驗(yàn)得到多元二次回歸模型所作的響應(yīng)面圖，響應(yīng)面圖形是響應(yīng)值與各試驗(yàn)因素（乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時(shí)間、提取溫度）所構(gòu)成的三維空間曲面圖。在其他試驗(yàn)因素固定不變的情況下，考察交互項(xiàng)對(duì)浸提量的影響，即乙醇體積分?jǐn)?shù)與提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)與料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)與提取溫度、提取時(shí)間與料液比、提取時(shí)間與提取溫度、提取溫度與料液比的交互作用對(duì)大麻葉總黃酮浸提量的影響，如圖7所示。

響應(yīng)面坡度越陡，表明響應(yīng)值對(duì)于操作條件的改變?cè)矫舾?，該因素?duì)黃酮得率的影響越大；反之則表明因素對(duì)黃酮得率的影響越小。在交互項(xiàng)對(duì)得率的影響中，料液比與乙醇體積分?jǐn)?shù)之間交互作用明顯，其他因素之間交互作用不明顯，這與方差分析的結(jié)果一致。

2.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

通過Design-Expert8.0軟件對(duì)回歸方程進(jìn)行多次擬合優(yōu)化，得出最優(yōu)提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)50&，提取時(shí)間2.0 h，料液比 1∶20（g／mL），提取溫度 70℃，總黃酮浸提量預(yù)測(cè)值為14.21 mg／g。按1.3.2的方法進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，平行3次，測(cè)得總黃酮平均浸提量為14.28 mg／g，與預(yù)測(cè)值14.21 mg／g的誤差為0.5&左右，說明采用響應(yīng)面法優(yōu)化得到的提取工藝參數(shù)可靠，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

2.5 總黃酮抗氧化活性分析

2.5.1 FRAP法測(cè)定總抗氧化能力

如圖8 FeSO4標(biāo)準(zhǔn)曲線所示，隨著FeSO4溶液濃度增加，F(xiàn)e2+-TPTZ增多，測(cè)定的吸光度值A(chǔ)593增加。它們之間存在線性關(guān)系。大麻葉總黃酮提取液與FRAP工作液反應(yīng)后測(cè)得A593的3次重復(fù)值分別為0.409、0.400、0.401，平均值為0.403，與 1.288 mmol／L FeSO4溶液的吸光度A593值相同，表明該總黃酮的抗氧化能力為1.288 mmol／L。

2.5.2 ABTS法測(cè)定總抗氧化能力

ABTS在適當(dāng)?shù)难趸瘎┳饔孟卵趸删G色的ABTS自由基，而在抗氧化物存在時(shí)自由基的產(chǎn)生會(huì)被抑制。黃酮抑制ABTS自由基產(chǎn)生的能力可以表示其總抗氧化能力，用相對(duì)抗氧化劑Trolox的抗氧化能力表示。如圖9 Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線，Trolox濃度越高，ABTS自由基的量則越少，吸光度A414也越小。擬合方程：y＝-1．1226x+0．8032，R2＝0．9973。大麻葉總黃酮提取液與工作液反應(yīng)后測(cè)得的吸光度A4143次重復(fù)值分別為0.705、0.644、0.618?？傸S酮清除ABTS自由基的總抗氧化能力相當(dāng)于0.391 mmol／L的Trolox。

圖8 FeSO4標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.8 Standard curve of FeSO4

圖9 Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.9 Standard curve of Trolox

2.5.3 DPPH自由基清除活性的測(cè)定

由圖10（a）可知，隨著樣品總黃酮濃度的增加，DPPH清除能力增加。在黃酮樣品濃度達(dá)到0.008 mg／mL時(shí)，DPPH清除率達(dá)到100&，這表明黃酮清除DPPH自由基的能力與黃酮質(zhì)量濃度間存在量效關(guān)系，擬合方程為y＝12576x+3．3166，R2＝0．9952。陽性對(duì)照VC對(duì)DPPH自由基清除能力如圖10（b），擬合方程為y＝21414x+0．9749，R2＝0．9985。大麻葉總黃酮對(duì)DPPH自由基的半抑制濃度IC50為3.7μg／mL，對(duì)比VC對(duì)DPPH自由基的清除能力（IC50＝2.3μg／mL），可知黃酮清除DPPH自由基能力低于VC。

圖10 大麻葉總黃酮（a）和VC（b）對(duì)DPPH自由基清除能力Fig.10 DPPH radical-scavenging activities of flavonids from hemp leaves（a）and VC（b）

3 小結(jié)

本研究采用響應(yīng)面法優(yōu)化了回流法提取大麻葉中總黃酮的工藝，得到最佳提取工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)50&、料液比1∶20（g／mL）、提取時(shí)間2.0 h、提取溫度70℃，在此條件下大麻葉總黃酮浸提量為14.28 mg／g。FRAP法、ABTS法以及DPPH自由基清除試驗(yàn)結(jié)果表明，大麻葉總黃酮提取物具有一定的抗氧化能力。該研究結(jié)果為大麻葉總黃酮的提取提供了參考，同時(shí)為大麻葉提取物的生物活性研究提供了前期基礎(chǔ)。本研究?jī)H針對(duì)大麻葉總黃酮的提取及抗氧化能力進(jìn)行了研究，大麻葉中黃酮化合物的組成仍需進(jìn)一步探索。今后可圍繞大麻葉中黃酮成分的鑒定、抗氧化應(yīng)激以及其它生物作用機(jī)理等方面進(jìn)行探究，為大麻葉的多用途開發(fā)利用提供更為科學(xué)可靠的依據(jù)和參考。