王慶武 唐麗娜 李秀梅

（山東省泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東泰安271000）

黑木耳（Auricularia auricular）是我國傳統(tǒng)食用菌栽培品種[1]，市場反應(yīng)較好[2]，栽培面積逐年增加[3]，但關(guān)于黑木耳菌絲的培養(yǎng)特性研究相對較少。為了掌握黑木耳菌絲的培養(yǎng)特性，了解目的菌株的生長發(fā)育特點[4]，筆者對黑木耳菌絲培養(yǎng)適宜的碳氮源、配方、溫度和pH進行了研究，旨在為黑木耳的栽培提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株及培養(yǎng)基

黑木耳菌株TH02由泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院保存。

碳源試驗基礎(chǔ)培養(yǎng)基（CK）：蛋白胨0.2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，瓊脂2%。

氮源試驗基礎(chǔ)培養(yǎng)基（CK）：葡萄糖2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，瓊脂2%。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同碳源試驗

在碳源基礎(chǔ)培養(yǎng)基（CK）中分別加入2%的玉米粉、葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、淀粉、果糖、乳糖7種不同碳源組成供試培養(yǎng)基，制作直徑9 cm的平板培養(yǎng)基，每平板培養(yǎng)基倒入量一定，接入一塊邊長4 mm的菌塊，置于恒溫培養(yǎng)箱中25℃暗培養(yǎng)。每處理5個重復(fù)。

1.2.2 不同氮源試驗

在氮源基礎(chǔ)培養(yǎng)基（CK）中分別加入0.2%的酵母膏、麩皮、牛肉膏、NH4NO3、（NH4）2SO4、蛋白胨6種不同氮源組成供試培養(yǎng)基，其他方法同1.2.1。

1.2.3 不同碳氮比試驗

最佳碳、氮源選定后，采用L9（34）法進行正交試驗，試驗方法同1.2.1。

1.2.4 不同培養(yǎng)溫度試驗

采用以上試驗最佳配方，制作直徑9 cm的平板培養(yǎng)基，每平板培養(yǎng)基倒入量一定，接入一塊邊長4 mm的菌塊，分別置于15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃共7個處理溫度，恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)。每處理5個重復(fù)。

1.2.5 菌絲致死溫度測定

無菌條件下，挑取邊長4 mm、厚2.5 mm的菌塊置于2 mL無菌離心管中，每管放5塊，分別置于50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃共7個溫度水浴鍋中處理10 min后，再將菌塊無菌條件下置于平板培養(yǎng)基上，于培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)。每處理5個重復(fù)。

1.2.6 不同pH試驗

pH設(shè)4、5、6、7、8、9、10共7個處理，平板制作方法同1.2.4，置于恒溫培養(yǎng)箱中30℃暗培養(yǎng)。每處理5個重復(fù)。

1.2.7 統(tǒng)計分析

各處理培養(yǎng)7 d，采用“十”字交叉法測量菌落直徑，計算各處理菌絲日生長速度，分析各處理對菌絲生長的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源對黑木耳菌絲生長的影響

由表1可以看出，在不同碳源培養(yǎng)基上黑木耳菌絲生長速度、長勢和菌落形態(tài)均不同，在玉米粉為碳源的培養(yǎng)基上，菌絲生長速度最快，達到3.53 mm/d，且菌絲長勢好、菌落邊緣整齊；在葡萄糖培養(yǎng)基上菌絲生長速度較快，菌絲長勢較好、菌落邊緣較齊；乳糖培養(yǎng)基上菌絲生長速度最慢且不及對照，長勢差、菌落邊緣不整齊，其他碳源培養(yǎng)基上菌絲生長速度一般、長勢均較好、菌落邊緣均不整齊。

表1 不同碳源對黑木耳菌絲生長的影響

2.2 不同氮源對黑木耳菌絲生長的影響

由表2可以看出，在不同氮源培養(yǎng)基上黑木耳菌絲生長速度、長勢和菌落形態(tài)均不同，在酵母膏為氮源的培養(yǎng)基上，菌絲生長速度最快，達到4.20 mm/d，且菌絲長勢好、菌落邊緣整齊；在麩皮培養(yǎng)基上菌絲生長速度較快、菌落邊緣整齊，但菌絲長勢差；在牛肉膏培養(yǎng)基上菌絲生長速度較快、菌落邊緣較齊，但菌絲長勢好；在NH4NO3和（NH4）2SO4培養(yǎng)基上菌絲生長速度一般、菌落邊緣較齊，但菌絲長勢差；在蛋白胨培養(yǎng)基上菌絲生長速度最慢、菌落邊緣不齊、菌絲長勢較好。

表2 不同氮源對黑木耳菌絲生長的影響

2.3 碳氮比對黑木耳菌絲生長的影響

由表4可以看出，4個單因子對黑木耳菌絲生長速度的影響順序為B＞A＞C＞D，即葡萄糖影響最大，其次是玉米粉、酵母膏，牛肉膏影響最小，在4個單因子組成的培養(yǎng)基上菌絲長勢均好。極差分析結(jié)果表明，各因素對菌絲生長的最佳碳氮組合為A1B1C1D3。

表3 正交試驗因素水平

表4 L9（34）正交試驗結(jié)果

2.4 不同培養(yǎng)溫度對黑木耳菌絲生長的影響

由表5可以看出，在不同培養(yǎng)溫度黑木耳菌絲生長速度、長勢和菌落形態(tài)均不同。在15～45℃菌絲均可存活，35℃培養(yǎng)菌絲生長速度最快，達到5.66 mm/d，且菌絲長勢好、菌落邊緣整齊，其次是培養(yǎng)溫度30℃；25℃菌絲生長速度一般、菌絲長勢較好，菌落邊緣整齊；20℃以下菌絲生長較慢、菌絲長勢一般、菌落邊緣較齊；40～45℃菌絲只萌發(fā)，但不致死。

表5 不同溫度對黑木耳菌絲生長的影響

2.5 菌絲致死溫度

由表6可以看出，菌絲在53℃及其以下溫度處理10 min后，再放回至常溫培養(yǎng)菌絲均能萌發(fā)、恢復(fù)生長，菌落邊緣整齊；菌絲在54℃處理10 min后，常溫下菌絲萌發(fā)數(shù)減少，表明此溫度為臨界致死溫度；菌絲在55℃及其以上溫度處理10 min后，常溫下菌絲均未萌發(fā)，菌絲致死；隨處理溫度的提高，常溫下菌絲長滿平板天數(shù)增加、長勢減弱。

表6 菌絲致死溫度測定結(jié)果

2.6 pH對黑木耳菌絲生長的影響

由表7可以看出，菌絲在供試pH條件下均能生長，且菌絲長勢均好、菌落邊緣均整齊。菌絲在pH為6時，菌絲生長速度快，達到5.25 mm/d，其次是pH為7；pH低于6或高于7時菌絲生長速度均下降，但高過低pH更不利于菌絲生長。

表7 不同pH對黑木耳菌絲生長的影響

3 小結(jié)與討論

黑木耳菌絲在無碳、氮源培養(yǎng)基上，菌絲長勢均最差、生長速度慢、菌落邊緣不齊，在添加碳、氮源培養(yǎng)基上菌絲普遍轉(zhuǎn)好，但有差異，表明菌絲生長需要適宜的碳、氮源，適宜的碳源為玉米粉和葡萄糖，且植物性碳源優(yōu)于糖類。氮源對菌絲生長有一定的促進作用[5]，以酵母膏、牛肉膏為氮源時，菌絲長速、長勢、菌落邊緣整齊度均較好，而麩皮作為氮源時，雖然菌絲長速快，但菌絲長勢差，不宜作為培養(yǎng)黑木耳氮源。菌絲生長需要適宜的碳氮比[6]，適宜的碳氮源組合為玉米粉1%，葡萄糖2%，酵母膏0.1%，牛肉膏0.4%。

溫度對黑木耳菌絲生長影響較大，較低和較高溫度均不適宜菌絲生長，較適宜的菌絲生長溫度為25～35℃，這與姚占芳等[7]得出的最適溫度為25～30℃下限結(jié)果一致，但上限結(jié)果不一致，可能與供試菌株不同有關(guān)。高溫一直是限制生物生長發(fā)育的一個重要因素[8]，試驗表明黑木耳菌絲最低致死溫度為55℃、10 min。

微生物生長和生物合成都有其最適和能夠耐受的pH范圍[9]，pH過低或過高均不利于黑木耳菌絲生長，較適宜菌絲生長pH為6～7，這比姚占芳等[7]試驗得出的最適pH為5～6略高。試驗表明菌絲在偏堿條件下比在偏酸條件下長速快，可利用這一特點，馴化、篩選耐堿菌株，減少雜菌污染[7]。