付騫卉，柯愈詩，宋銘晶，劉偉志*

(1. 中央民族大學(xué)藥學(xué)院，民族醫(yī)藥教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中央民族大學(xué))，北京 100081；2. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院比較醫(yī)學(xué)中心，國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)人類疾病比較醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100021)

野罌粟(PapavernudicauleL.)為罌粟科罌粟屬的藥用植物, 以全草或花入藥,其味微苦微寒且酸澀,歸肺、大腸、胃、腎經(jīng)。在北方各少數(shù)民族中臨床用于鎮(zhèn)咳、止瀉時(shí)間已久?！都种胁菟帯酚涊d野罌粟鎮(zhèn)咳、澀腸等。目前發(fā)現(xiàn)野罌粟全草的主要有效成分為生物堿，既能拮抗白三烯與其受體結(jié)合阻止炎癥反應(yīng)導(dǎo)致支氣管痙攣和氣道高反應(yīng)，又能有效降低潰瘍結(jié)腸炎模型大鼠血管活性腸肽及其受體含量,改善腹瀉癥狀促進(jìn)腸黏膜組織修復(fù)，相關(guān)研究證實(shí)野罌粟堿具有鎮(zhèn)咳平喘、止瀉的作用[1-2]。

前期研究中發(fā)現(xiàn)野罌粟堿鎮(zhèn)咳止瀉的主要活性成分野罌粟堿在模型大鼠的結(jié)腸組織和肺組織中有較高濃度富集,能引起腸炎大鼠肺、大腸胞內(nèi)環(huán)核苷酸含量出現(xiàn)顯著生物學(xué)變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步揭示野罌粟堿的藥效作用途徑與其歸經(jīng)作用相關(guān)[3]。歸經(jīng)，指藥物作用歸屬, 即表示藥物對(duì)機(jī)體的選擇性作用[4-5]。本研究基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)獲得關(guān)于特定條件下大鼠肺和結(jié)腸組織中幾乎所有轉(zhuǎn)錄物序列的全面信息,從而分析出肺、腸組織相同差異表達(dá)基因[6-7]。通過建立大鼠過敏性哮喘動(dòng)物模型[8]及潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型[9]，給與野罌粟堿治療后，觀察野罌粟堿對(duì)兩組模型大鼠肺、腸組織相同差異表達(dá)基因的調(diào)控作用，試圖部分揭示野罌粟歸肺、大腸經(jīng)的分子內(nèi)涵。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠(200 ～ 220 g)，72只，雄雌各半，鼠齡8 ～ 10周，由斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司提供[SCXK (京) 2016-0002]。飼養(yǎng)環(huán)境為SPF級(jí)動(dòng)物房[SYXK (京) 2016-0043]，12 h/12 h晝夜循環(huán)照明及常溫環(huán)境，自由飲食飲水適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。無菌手術(shù)在SPF級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)實(shí)驗(yàn)操作室[SYXK (京) 2016 - 0043]進(jìn)行。本實(shí)驗(yàn)涉及的動(dòng)物飼養(yǎng)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案已得到中央民族大學(xué)生物與醫(yī)學(xué)倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)[ECMUC-2018-12]，并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

野罌粟藥材干燥全草采集自河北承德壩上草原，經(jīng)中央民族大學(xué)藥學(xué)院朱丹教授鑒定為罌粟科罌粟屬植物野罌粟種 (PapavernudicauleL.)。

TRIzol(Invitrogen公司,USA,貨號(hào)：MRN2100);DNase I(Fermentas(MBI)公司,USA, 貨號(hào)：MRT1009);RNase抑制劑(Fermentas(MBI)公司,貨號(hào):MRT1007);Buffer, dNTP (寶生物工程(大連)有限公司), 2 ×Ex TaqMix(寶生物工程(大連)有限公司,貨號(hào):MPC1001);DL2000 DNA Marker(寶生物工程(大連)有限公司, 貨號(hào)：DM0101)；

Illumina 平臺(tái)PCR儀(美國(guó)ABI公司，2720型)；電泳槽(日本TaKaRa公司，Mupid 2plus)；凝膠成像系統(tǒng)(韓國(guó)Korea Biotech公司，EUV-LDUV)；離心機(jī)(韓國(guó)Hanil公司，MICRO 17TR)；漩渦混合器(美國(guó)SI公司，Voltex-Genie2)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)(德國(guó)Roche公司，480II)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)藥物野罌粟有效成分(總生物堿)的制備

取野罌粟全草原植物，切段，用 8 倍量 80% 乙醇回流提取3次(2 h/次)，回收溶劑，鹽酸調(diào) pH=3 ～ 4 的酸水溶解浸膏，靜置，過濾，適量氯仿洗去脂溶性雜質(zhì)，酸水液用濃氨水調(diào)節(jié) pH=10 ～ 11，氯仿萃取 5 ～ 6 次，回收氯仿，得野罌粟堿脂溶性總生物堿，冷凍干燥，保存?zhèn)溆谩Ｊ褂脮r(shí)取野罌粟堿總生物堿按給藥劑量配置含生藥0.18 g/mL濃度的溶液，水浴加熱至 25°C。

1.3.2 動(dòng)物模型建立

(1)過敏性哮喘大鼠模型：將OVA 1 mg 和氫氧化鋁 200 mg 溶于生理鹽水 1 mL 中新鮮配制成凝膠致敏劑，第1 天和第7 天在大鼠雙側(cè)胸部，腹股溝共4 點(diǎn)各皮下注射0.15 mL該致敏劑，同時(shí)腹腔注射0.4 mL共計(jì)1 mL進(jìn)行致敏。14 d開始將大鼠置于有機(jī)玻璃盒內(nèi)，超聲霧化吸入1% OVA 誘發(fā)哮喘，每天 1 次，每次30 min，共計(jì)1 周。以大鼠出現(xiàn)噴嚏、咳嗽、呼吸急促等典型哮喘樣發(fā)作為標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證是否造模成功。

(2)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型：取健康家兔結(jié)腸黏膜組織，無菌生理鹽水勻漿， 4°C離心，3000 r/min，30 min，取上清，雙縮脲法進(jìn)行蛋白定量，加入等體積的完全弗氏佐劑，制成抗原乳化液。分別于第1、15、22、29天注射抗原乳化液于SD大鼠足跖、腹股溝等部位，每次含抗原8 mg。第29天麻醉后進(jìn)行濃度為120 mg/mL的三硝基苯磺酸-50%乙醇 1∶1 比例灌腸復(fù)制UC 模型。通過對(duì) UC大鼠模型的體重、大便等形態(tài)學(xué)方面的變化及便潛血實(shí)驗(yàn)對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.3.3 分組及給藥

SD大鼠單只單獨(dú)飼養(yǎng)，雌雄各半，選取同批大鼠設(shè)兩組空白組(每組12只),其余SD大鼠按上述方法造模, 造模成功后隨機(jī)分哮喘模型組12只和哮喘給藥組12只與UC組12只和UC給藥組12只。空白組和兩組模型組給與等計(jì)量溶媒灌胃2 mL，給藥劑量按照大鼠和人的體表面積比確定大鼠的給藥量，即大鼠的給藥量(kg/d)=0.018×5×人的最大給藥量。野罌粟堿治療組:180 mg/kg。連續(xù)給藥7日，末日禁食禁水 24 h次日動(dòng)物常規(guī)處死，解剖剪取新鮮同一位置肺組織塊與肛門上2～8 cm處結(jié)腸組織塊。

1.3.4 HE染色觀察模型形態(tài)學(xué)變化

截取部分大腸組織和肺組織固定于4%多聚甲醛，經(jīng)酒精梯度脫水(70%、80%、90%、100%I、100%II)，二甲苯石蠟包埋后將組織切成5 μm厚的薄片，并貼于載玻片上制成石蠟切片，60℃ 恒溫烘烤2 h，將石蠟切片保存。取各組的石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟、酒精梯度復(fù)水(100%I、II、90%、80%、70%)，水洗，蘇木精-伊紅(HE)染色，在光鏡下觀察各個(gè)組的組織結(jié)構(gòu)并獲取圖像。

1.3.5 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析后KEGG注釋相同差異表達(dá)基因

使用分析軟件 Cuffdiff，依據(jù)所有樣本與參考基因組比對(duì)的結(jié)果，計(jì)算每個(gè)基因在樣本中的 FPKM 值，以該值作為基因在樣本中的表達(dá)量。將兩個(gè)模型組分別與空白組進(jìn)行差異顯著性分析，識(shí)別出有相同差異表達(dá)的基因基于 KEGG 數(shù)據(jù)庫，運(yùn)用 BLAST 算法(blastx/blastp 2.2.24+)進(jìn)行KEGG注釋。為控制計(jì)算假陽性率，采用FDR方法進(jìn)行多重檢驗(yàn)，找出有相同差異表達(dá)的信號(hào)通路。

1.3.6 Real-time PCR檢測(cè)C-C基序趨化因子11，碳酸酐酶1,核激素受體亞家族D組成員1的mRNA表達(dá)水平

(1)RNA提取：剪取新鮮的潰瘍組織樣品和哮喘肺組織樣品放入盛有1 mL變性緩沖液(TRIzol)的勻漿器中，冰浴 (將勻漿液移至1.5 mL EP管中，15℃～30℃ 靜置5 min(加入0.2 mL三氯甲烷充分混勻15 s，靜置 (15℃～30℃) 2～3 min，4℃ 12 000 r/min離心15 min，取上層水相置于新的離心管內(nèi)，加入等體積的異丙醇，混勻后靜置10 min，4℃ 12 000 r/min離心10 min。 棄去上清,加入1 mL的80% 乙醇清洗沉淀，4℃ 12 000 r/min離心10 min,室溫風(fēng)干沉淀，用 20 μL DEPC水溶解沉淀，取2 μL稀釋100倍后測(cè)定260 nm 吸光度 A，計(jì)算RNA 濃度。

(2)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系：0.1 mol/L DTT 2 μL，5×RT-buffer 4 μL,10 mmol/L dNTPs 1 μL,RNase (40 U/μL) 0.5 μL，Oligo(dT)18(50 nmol/L)2 μL, M-MLV(200 U/μL)1 μL, RNA模板2 μg, DEPC水加至20 μL。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：42℃ 60 min，70℃ 15 min，在冰上冷卻5 min備用定量PCR。

(3)引物設(shè)定：根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則利用Primer 6.5設(shè)計(jì)Ca1、Ccl11和Nr1d1基因的引物，見表1，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，引物由北京天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司合成，以GAPDH作為內(nèi)參。

表1 引物序列

(4)實(shí)時(shí)定量PCR：實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)體系的配制：2 Ex TaqMix5 μL，Eva green 5 μL，cDNA模板1.0 μL，目的基因上游引物0.3 μL，下游引物0.3 μL，cDNA模板1.0 μL，ddH2O補(bǔ)至10 μL。實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)條件：95℃ 5min預(yù)變性后，95℃ 15 s→65℃ 30 s(熒光檢測(cè))，45個(gè)循環(huán)。熔解曲線65℃～95℃。在 120 V 的電壓水平下,制備 2% 瓊脂糖凝膠,并提取 5 μL PCR 反應(yīng)產(chǎn)物上樣于 其中進(jìn)行電泳,觀察并攝取圖像。用Quantity One軟件進(jìn)行圖像半定量分析,測(cè)定光密度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

注:(1)結(jié)腸的形態(tài)學(xué)結(jié)果(10×10)；(2)肺組織的形態(tài)學(xué)結(jié)果(10×10)。圖1 各組大鼠腸與肺組織的組織學(xué)改變(HE染色)Note. (1) Colon tissues of each group (10 × 10). (2) Lung tissues of each group (10 × 10). Figure 1 Histological changes of the lung and intestinal tissues in each group of rats.HE staining

2 結(jié)果

2.1 哮喘模型和UC模型的評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)經(jīng)造模措施處理后，大鼠活動(dòng)減少形體消瘦，毛發(fā)色澤灰暗凌亂，哮喘模型組的大鼠尤其在霧化后呼吸急促呼吸頻率明顯增高，并且大便時(shí)干時(shí)稀。潰瘍性結(jié)腸炎大鼠便血、大便不成型大便次數(shù)增多。

2.2 大鼠病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果

如圖1所示，正常對(duì)照組為正常組的結(jié)腸(1)和肺組織(2)，圖(1)A結(jié)腸壁的四層分層(黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜)明顯且結(jié)構(gòu)完整，圖(2)A低倍鏡下肺組織中的肺泡結(jié)構(gòu)完整。UC模型組結(jié)腸組織(1)和肺組織(2)，通過圖(1)B可以看出結(jié)腸組織的四層分層不明顯，上皮不完整有明顯的潰瘍存在，在結(jié)腸壁的各層有大量彌散淋巴細(xì)胞；圖(2)B顯示肺泡結(jié)構(gòu)完整，但肺泡隔厚局部有炎癥團(tuán),說明結(jié)腸有炎癥同時(shí)肺組織也存在炎癥。給野罌粟堿后UC模型組結(jié)腸四層結(jié)構(gòu)明顯,肺組織中肺泡完整，但肺泡隔仍比正常組厚，但比模型組薄。經(jīng)過治療后UC組和哮喘組的肺、結(jié)腸組織的炎癥反應(yīng)均有一定的緩解見圖C。圖(1)D中結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)完整，但是黏膜層中潰瘍存在；圖(2)D中在細(xì)支氣管壁附件有大量炎癥細(xì)胞，但周圍肺泡與正常組相似，肺泡隔薄結(jié)構(gòu)完整；圖(1)E四層結(jié)構(gòu)明顯，大腸腺排列整齊，圖(2)E肺邊緣處仍有炎癥存在，肺泡隔較厚。經(jīng)給藥的大鼠食欲恢復(fù)大便逐漸成形，急促呼吸頻率減少。

2.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序哮喘模型和潰瘍性結(jié)腸炎模型檢測(cè)差異表達(dá)基因結(jié)果

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序后，將顯著表達(dá)的基因編號(hào)進(jìn)行KEGG注釋分析得到共同差異表達(dá)的基因分別為核受體亞家族1D1組，碳酸酐酶1及C-C基序趨化因子11。見表2。

2.4 野罌粟堿對(duì)兩組模型大鼠肺和腸組織中Ccl11 mRNA、Ca1 mRNA及 Nr1d1 mRNA表達(dá)的影響

RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示關(guān)鍵差異表達(dá)基因表達(dá)水平的變化與測(cè)序結(jié)果上下調(diào)情況基本一致，見表3、表4和圖2。Ccl11 mRNA表達(dá)在圖A中與空白組相比Ccl11 mRNA表達(dá)顯著升高(P<0.001)，與模型組比較，給藥組表達(dá)顯著降低，統(tǒng)計(jì)結(jié)果具有顯著性差異(P<0.01)。圖B中UC模型組與空白組相比表達(dá)顯著升高(P<0.001)，與UC模型組比較，給藥組表達(dá)顯著降低(P<0.001)。圖C中哮喘模型組表達(dá)顯著高于空白組(P<0.01)，與模型組對(duì)比，給藥組表達(dá)降低(P<0.01)。圖D中模型組表達(dá)顯著高于空白組(P<0.001)，與模型組對(duì)比給藥組表達(dá)明顯降低(P<0.001)。Ca1 mRNA表達(dá)在圖E中，哮喘模型組表達(dá)顯著降低(P<0.001)，而給藥組表達(dá)升高(P<0.001)。圖F中UC模型組表達(dá)顯著降低(P<0.001)，給藥組表達(dá)升高(P<0.001)。圖G中，與空白組對(duì)比，哮喘模型組表達(dá)顯著低于空白組(P<0.001)，但給藥組表達(dá)升高(P<0.01)。圖H中，UC模型組表達(dá)顯著低于空白組(P<0.001)，給藥組表達(dá)明顯升高(P<0.001)。Nr1d1 mRNA表達(dá)在圖I中哮喘模型組表達(dá)顯著降低(P<0.001)，給藥組表達(dá)升高(P<0.001)。圖J中UC模型組與空白組相比表達(dá)顯著降低(P<0.001)，與模型組比，給藥組表達(dá)升高(P<0.001)。圖K中與空白組對(duì)比，模型組表達(dá)顯著低于空白組(P<0.05)，而與模型組相比給藥組表達(dá)升高(P<0.001)。圖L中與空白組對(duì)比，UC模型組表達(dá)顯著低于空白組(P<0.001)，與模型組對(duì)比，給藥組表達(dá)明顯升高(P<0.01)。

表2 兩組模型肺組織和腸組織共同差異表達(dá)基因

表3 野罌粟堿對(duì)腸組織中Ccl11mRNA、Ca1mRNA及 Nr1d1mRNA表達(dá)的影響

注：與空白對(duì)照組比較，#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001；與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

Note. Compared with the blank control group,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001. Compared with the model group,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.

表4 野罌粟堿對(duì)肺組織中Ccl11 mRNA、Ca1 mRNA及 Nr1d1 mRNA表達(dá)的影響

注：與空白對(duì)照組比較，#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001；與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。

Note. Compared with the blank control group,#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001. Compared with the model group,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.

注：模型與空白比較，#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001;給藥組與模型比較*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。A：哮喘組肺;B：UC組肺;C：哮喘組腸;D：UC組腸;E：哮喘組肺;F：UC組肺;G：哮喘組腸;H：UC組腸;I：哮喘組肺;J：UC組肺;K：哮喘組腸;L：UC組腸。圖2 野罌粟堿對(duì)Ccl11 mRNA、Ca1 mRNA及 Nr1d1 mRNA表達(dá)水平的影響結(jié)果Note. Compared with the control group, #P<0.05,##P<0.01,###P<0.001. Compared with the model group, *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001. A: Lung tissue in the asthma model group; B: lung tissue in the UC model group; C: intestinal tissue in the asthma model group; D: intestinal tissue in the UC model group; E: lung tissue in the asthma model group; F: UC model group lung tissue; G: asthma model group intestinal tissue; H: UC model group intestinal tissue; I: asthma model group lung tissue; J: UC model group lung tissue; K: model group intestinal tissue; L: UC model group intestinal tissue.Figure 2 Effect of Papaver nudicaule L. on the expression levels of Ccl11 mRNA, Ca1 mRNA, and Nr1d1 mRNA

3 討論

過敏性哮喘 (allergic asthma,AA)的氣道反應(yīng)性增高、間歇性可逆氣道阻塞和氣道炎癥是其主要特征。潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是炎癥性腸病的主要代表之一。最近研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)炎性腸病中潰瘍性結(jié)腸炎的患者增加并發(fā)哮喘的可能性[10]。另一方面，在Raj等人[11]臨床研究中也發(fā)現(xiàn)呼吸道疾病患者炎性腸病發(fā)病率與普通人相比增加了四倍。然而此類并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制還未闡明，但在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論《黃帝內(nèi)經(jīng)·靈樞·本輸》記載“肺合大腸，大腸者傳導(dǎo)之府”最早提出了肺與大腸相表里理論，認(rèn)識(shí)到肺、腸在功能上互聯(lián)，在病理?xiàng)l件下相互影響[12]。長(zhǎng)期的中醫(yī)臨床實(shí)踐也發(fā)現(xiàn) 當(dāng)肺功能失常,氣機(jī)不利,則勢(shì)必影響大腸傳導(dǎo)功能,出現(xiàn)大便困難或腹瀉，表現(xiàn)出肺病可及腸;而若腸腑壅實(shí),腸腑氣機(jī)失調(diào)，終致肺失宣肅,出現(xiàn)咳嗽氣喘，表現(xiàn)為腸病可及肺[13]。因而中醫(yī)在治療方針中提出肺腸合治、肺病治腸和腸病治肺等治則。通過RNA-Seq最終得到三個(gè)關(guān)鍵差異表達(dá)基因C-C基序趨化因子11，碳酸酐酶1,核激素受體亞家族D組成員1。采用RT-PCR驗(yàn)證，與測(cè)序結(jié)果表達(dá)一致，說明結(jié)果重復(fù)性較好穩(wěn)定性高。經(jīng)給藥后，發(fā)現(xiàn)野罌粟堿使兩組模型肺和結(jié)腸組織中C-C基序趨化因子11表達(dá)與模型組相比顯著降低，而碳酸酐酶表達(dá)和核激素受體亞家族D組成員表達(dá)顯著升高。

C-C基序趨化因子11(Ccl11)是野罌粟歸經(jīng)作用的關(guān)鍵基因之一，也稱為嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子，參與哮喘患者嗜酸性粒細(xì)胞氣道募集的趨化因子參與免疫反應(yīng)包括先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)[14]。有研究表明過敏性哮喘患者持續(xù)氣道嗜酸性粒細(xì)胞增多，Ccl11表達(dá)水平對(duì)于誘發(fā)哮喘病癥有實(shí)質(zhì)性的貢獻(xiàn)。另有研究已經(jīng)證實(shí)了Ccl11在結(jié)腸炎中的關(guān)鍵作用，UC的兩種動(dòng)物模型中，DSS結(jié)腸炎模型和急性惡唑酮結(jié)腸炎模型受損小鼠的結(jié)腸組織中都發(fā)現(xiàn)Ccl11水平增加[15-16]。碳酸酐酶(carbonic anhydrase(Ca)1)也是野罌粟歸經(jīng)作用的關(guān)鍵基因之一，其屬于Cas同工酶，廣泛分布在肺泡上皮細(xì)胞，其催化反應(yīng)對(duì)呼吸作用極為重要[17-18]。而在消化道，Ca主要定位于結(jié)腸上皮細(xì)胞幫助腸道吸收養(yǎng)分。白雪[19]等人研究表示，Ca在正常腸粘膜高表達(dá)，但在癌組織中明顯下調(diào),Ca不僅是人體內(nèi)調(diào)節(jié)酸堿內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的關(guān)鍵酶，而且可以降低腫瘤的侵襲能力和炎癥反應(yīng)的趨化能力。本次研究野罌粟歸經(jīng)作用的關(guān)鍵基因Nr1d1(nuclear receptor subfamily 1, group D, member 1)，其在炎癥反應(yīng)中占有重要地位[20]。最近的研究表明睡眠障礙與炎癥性疾病活動(dòng)有關(guān)[21]。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)Nr1d1具有通過改變肺部晝夜節(jié)律功能從而改善哮喘患者的呼吸功能和炎癥的能力[22]。另外Polidarova[23]等人發(fā)現(xiàn)晝夜節(jié)律的變化也是炎性腸病尤其是結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制。正常情況下，免疫系統(tǒng)具有晝夜節(jié)律性，但如果晝夜節(jié)律紊亂可能對(duì)腸黏膜屏障產(chǎn)生影響且破壞腸黏膜中的腸道微生物穩(wěn)態(tài)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)[24]。

本研究在分子水平首次證明了野罌粟歸肺與大腸經(jīng)可能是通過調(diào)控這兩類疾病共同表達(dá)的相關(guān)基因。野罌粟堿治療后降低兩組大鼠模型Ccl11基因的表達(dá)，抑制了嗜酸性粒細(xì)胞向肺及腸道的浸潤(rùn)募集，并且野罌粟堿能夠上調(diào)哮喘模型大鼠和UC模型大鼠肺組織和腸組織中Ca1和Nr1d1基因從而抑制促炎因子作用且降低趨化因子活性，HE染色結(jié)果也提示野罌粟堿能夠促進(jìn)肺腸組織的修復(fù)功能的恢復(fù)。這項(xiàng)研究還有一定的不足，需進(jìn)一步敲除關(guān)鍵基因觀察野罌粟堿治療哮喘模型和UC模型與空白對(duì)照組病理變化的差異性，探究其中潛在的分子基礎(chǔ)[25]。綜上所述，哮喘模型和UC模型大鼠肺與腸組織中的Ccl11、Ca1和Nr1d1基因可能是野罌粟“歸肺、大腸經(jīng)”選擇性調(diào)節(jié)的分子靶點(diǎn)。此外，基因的表達(dá)變化可能是呼吸道疾病及炎性腸病相互影響導(dǎo)致發(fā)病的重要機(jī)制之一，為進(jìn)一步探索疾病發(fā)病機(jī)制提供基礎(chǔ)。