黃怡文， 謝家駿， 楊藝帆， 陳 錳， 宋艷榮

（上海中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全評價研究中心，上海201203）

研究表明，在中藥注射液靜脈注射產(chǎn)生的不良反應(yīng)中，類過敏反應(yīng)居多［1-2］，它主要通過直接刺激肥大細胞［3-5］、 激活補體［6-8］等途徑致肥大細胞脫顆粒，并釋放組胺等多種活性介質(zhì)，進而引發(fā)毛細血管擴張、腺體分泌增加、平滑肌收縮等一系列病理變化，導(dǎo)致皮膚、呼吸道、消化道、甚至全身發(fā)生過敏樣反應(yīng)［9］。目前，檢測類過敏的方法有體外細胞、皮膚組織、整體動物試驗，其中大鼠皮膚類過敏試驗是較常用的評價方法［10］，它不僅具備在體動物試驗的屬性，而且相對于動物全身類過敏試驗具有操作簡便、敏感性高、重復(fù)性好的特點。為了提高該方法在評定藥物類過敏性時的準(zhǔn)確性，并克服因受試藥物而造成評定結(jié)果的假陽性，課題組前期對該方法評定標(biāo)準(zhǔn)進行了研究［11-12］，本實驗在此基礎(chǔ)上主要從形態(tài)學(xué)角度出發(fā)，對大鼠皮膚類過敏試驗的組織學(xué)機制進行探索，并就肥大細胞脫顆粒率作為補充指標(biāo)的可行性進行分析。

1 材料

1.1 動物 清潔級SD大鼠，雄性，體質(zhì)量250～300 g，購自上海斯萊克實驗動物有限公司，生產(chǎn)許可證號SCXK（滬）2012-0002，于上海中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心清潔級飼養(yǎng)室飼養(yǎng)。大鼠實驗期間自由飲水?dāng)z食，室內(nèi)溫度22～25℃，相對濕度45%～70%。

1.2 試藥 Compound 48／80 （N-甲基-對甲氧基苯乙胺和甲醛縮合產(chǎn)生的聚合物，簡稱 C48／80，美國Sigma公司，批號086M4 041 V）；吐溫-80（聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯，美國Fluka公司，批號 BCBF4 913 V）；碘海醇注射液 （揚子江藥業(yè)集團有限公司，批號17102561）；喜炎平注射液 （江西青峰藥業(yè)有限公司，批號2016031003）；注射用血塞通 （凍干）（哈爾濱珍寶制藥有限公司，批號F7 070 46a 4）；紫杉醇注射液（北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司，批號 20170501）。伊文思藍 （批號W20111101）、 甲醛 （批號 20161221）、 二甲苯（批號 20140111）、 無水乙醇 （批號 20160920）、75%乙醇 （批號 20150915）、95%乙醇 （批號20160612）、甲苯胺藍 （批號20161121）、 冰醋酸（批號20160912）（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；石蠟 （德國Microm公司，批號385243）。

1.3 儀器 全封閉組織脫水機 （VIP-5型，日本櫻花公司）；石蠟包埋機 （HistoStar型，美國Thermo公司）；全自動染色機 （HMS70型）、輪轉(zhuǎn)式組織切片機 （HM340E型） （德國Microm公司）；雙人共覽生物顯微鏡 （BX43型）、圖像拍攝系統(tǒng) （日本Olympus公司）。

2 方法

2.1 分組及給藥 30只大鼠隨機分為5組，每組6只，稱定質(zhì)量后25%烏拉坦 （4 mL／kg）麻醉，背部剃毛5 cm×8 cm，脊柱兩側(cè)皮內(nèi)注射 （給藥位置輪轉(zhuǎn)）生理鹽水 （陰性生理鹽水組）、C48／80（0.062 5、 0.25、 1、 4、 16 μg／mL）、 吐 溫-80（0.5%、1%、2%、4%、8%）、碘海醇注射液（5.5、 21.9、 87.5、 350 mg／mL）、 紫杉醇注射液（0.75、 1.5、 3、 6 mg／mL）、 血栓通注射液 （0.4、0.8、 1.6、 3.2 mg／mL）、 喜炎平注射液 （2.5、 5、10、 20 mg／mL）， 50 μL／點， 然后立即尾靜脈注射0.5%伊文思藍染液0.5 mL／100 g，15 min后剪取背部皮膚，測量皮膚內(nèi)側(cè)藍斑直徑，藍斑直徑＞0.5 cm為類過敏反應(yīng)陽性。

2.2 藍染皮膚組織形態(tài)學(xué)研究 將注射部位皮膚放入10%甲醛固定液中固定48 h以上，取中心位置約1 cm×0.5 cm大小皮膚組織，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇置水，甲苯胺藍染色后封片，顯微鏡觀察肥大細胞形態(tài)變化及脫顆粒程度。每只大鼠連續(xù)隨機計數(shù)5個高倍視野 （×200）內(nèi)肥大細胞總數(shù)及脫顆粒數(shù)，計算脫顆粒率 （肥大細胞脫顆粒數(shù)／肥大細胞總數(shù)×100%），并對其與給藥濃度質(zhì)量或藍斑直徑進行相關(guān)性分析。

2.3 統(tǒng)計學(xué)分析 通過SPSS 21.0軟件進行處理，計量資料采用 （±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗。P＜0.05表示有顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 C48／80對大鼠皮膚藍斑直徑、肥大細胞形態(tài)變化的影響

3.1.1 藍斑直徑 分析結(jié)果見表1。

表1 C48／80對大鼠皮膚藍斑直徑的影響 （±s， n＝6）Tab.1 Effect of C48／80 on blue spot diameter in rat skins （±s， n＝6）

表1 C48／80對大鼠皮膚藍斑直徑的影響 （±s， n＝6）Tab.1 Effect of C48／80 on blue spot diameter in rat skins （±s， n＝6）

組別 質(zhì)量濃度／（μg·mL－1） 動物數(shù)／只藍斑直徑≤0.5 cm 藍斑直徑＞0.5 cm 類過敏性評價生理鹽水組 — 6 0 陰性C48／80組 0.062 5 6 0 陰性C48／80組 0.25 4 2 陰性-陽性C48／80組 1 0 6 陽性C48／80組 4 0 6 陽性C48／80組 16 0 6 陽性

3.1.2 肥大細胞形態(tài)變化 大鼠皮膚組織中的肥大細胞主要分布于表皮、真皮及皮下組織，其中皮下組織中細胞數(shù)量相對較多，肥大細胞呈紫紅色，背景呈藍色。生理鹽水組大鼠肥大細胞胞膜完整，邊界清晰，呈類圓形，未見明顯脫顆粒現(xiàn)象，皮下注射C48／80后，肥大細胞脫顆?，F(xiàn)象隨其質(zhì)量濃度提高而增加，其中0.062 5 μg／mL組偶見脫顆粒，細胞輪廓略不規(guī)則，呈深紫紅色；0.25 μg／mL組可見半數(shù)或半數(shù)以上脫顆粒；1、4 μg／mL組脫顆粒細胞數(shù)占總的80%以上，脫出顆粒散在細胞周圍，呈邊緣不規(guī)則長圓形或桑葚形，顏色為紫紅色；16 μg／mL組大量脫顆粒，占比高達90%以上，細胞外有大量顆粒存在，部分細胞內(nèi)顆粒幾乎全部脫出，細胞胞漿空虛，細胞形態(tài)模糊。見圖1。

3.1.3 相關(guān)性分析 各質(zhì)量濃度C48／80藍斑直徑、脫顆粒率均較生理鹽水顯著增加 （P＜0.01，除0.062 5 μg／mL時藍斑直徑外），但肥大細胞數(shù)均無明顯變化 （P＞0.05），見表2。相關(guān)性分析顯示，藍斑直徑、脫顆粒率與C48／80質(zhì)量濃度均呈高度正相關(guān) （藍斑直徑r＝0.863，P＝0.000；脫顆粒率r＝0.869，P＝0.000）， 兩者之間亦然 （r＝0.937， P＝0.000）。

圖1 C48／80對肥大細胞形態(tài)變化的影響 （甲苯胺藍，×200）Fig.1 Effects of C48／80 on the morphological changes of mast cells（toluidine blue， ×200）

表2 C48／80對藍斑直徑、 肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.2 Effects of C48／80 on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate （±s， n＝6）

表2 C48／80對藍斑直徑、 肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.2 Effects of C48／80 on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate （±s， n＝6）

注：與生理鹽水組比較，??P＜0.01

組別 質(zhì)量濃度／（μg·mL－1） 藍斑直徑／cm 肥大細胞數(shù)／個 脫顆粒率／%生理鹽水組 — 0.27±0.05 6.07±2.62 5.5±5.5 C48／80 組 0.062 5 0.28±0.10 6.87±0.94 22.0±9.1??C48／80 組 0.25 0.50±0.11?? 9.80±4.43 50.2±16.1??C48／80 組 1 0.67±0.05?? 8.93±2.73 83.6±5.8??C48／80 組 4 0.77±0.08?? 7.97±2.37 81.6±6.8??C48／80 組 16 0.93±0.12?? 7.03±3.06 93.6±7.0??

3.2 吐溫-80對大鼠皮膚藍斑直徑、肥大細胞脫顆粒的影響 吐溫-80以0.5%、1%、2%、4%、8%體積分數(shù)皮下注射，分別相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的1／2、1、2、4、8倍，結(jié)果見表3。由表可知，2%、4%、8%吐溫-80藍斑直徑，1%、2%、4%、8%吐溫-80脫顆粒率均較生理鹽水顯著增加（P＜0.05，P＜0.01），但肥大細胞數(shù)均無明顯變化（P＞0.05）。

表3 吐溫-80對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.3 Effects of Tween-80 on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

表3 吐溫-80對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.3 Effects of Tween-80 on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

注：與生理鹽水組比較，?P＜0.05，??P＜0.01

／%生理鹽水組 — — 陰性 0.32±0.08 6.70±0.99 12.2±5.9吐溫-80組 0.5 1／2 陰性 0.38±0.16 5.67±2.38 19.3±9.4吐溫-80組 1 1 陰性-陽性 0.53±0.24 8.20±1.81 37.6±24.7?吐溫-80組 2 2 陽性 0.72±0.17?? 10.53±3.71 64.6±13.5??吐溫-80組 4 4 陽性 0.80±0.18?? 10.80±7.51 73.7±8.9??吐溫-80組 8 8 陽性 1.02±0.21?? 6.67±0.99 89.3±8.6??

組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果顯示，肥大細胞脫顆?，F(xiàn)象隨吐溫-80體積分數(shù)提高而增加，其中0.5%組胞膜完整，細胞邊界清晰，呈類圓形、深紫紅色，未見明顯脫顆?，F(xiàn)象，與生理鹽水組比較無明顯差異；1%組部分皮膚組織可見少量脫顆粒，細胞輪廓略不清晰，呈不規(guī)則長圓形；2%組脫顆粒率為50%以上；4%組脫顆粒率為70%左右，細胞內(nèi)顆粒脫于細胞周圍，細胞呈桑葚形、紫紅色；8%組脫顆粒率約90%，脫出顆粒散在細胞周圍，細胞形態(tài)模糊，細胞胞漿空虛。

相關(guān)性分析顯示，藍斑直徑、脫顆粒率與吐溫-80體積分數(shù)均呈高度正相關(guān) （藍斑直徑r＝0.832，P＝0.000； 脫顆粒率 r＝0.892， P＝0.000）， 兩者之間亦然 （r＝0.929， P＝0.000）。

3.3 碘海醇注射液對大鼠皮膚藍斑直徑、肥大細胞脫顆粒的影響 碘海醇注射液以5.5、21.9、87.5、350 mg／mL質(zhì)量濃度皮下注射，分別相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的 1／64、 1／16、 1／4、 1 倍， 結(jié)果見表4。由表可知，21.9、87.5、350 mg／mL碘海醇注射液藍斑直徑、脫顆粒率均較生理鹽水顯著增加 （P＜0.05，P＜0.01），但肥大細胞數(shù)均無明顯變化 （P＞0.05）。

組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果顯示，肥大細胞脫顆粒現(xiàn)象隨碘海醇注射液質(zhì)量濃度提高而增加，其中5.5 mg／mL組未見明顯脫顆?，F(xiàn)象，細胞呈輪廓清晰的深紫紅色類圓形，與生理鹽水組比較無明顯差異；21.9 mg／mL組部分大鼠少數(shù)肥大細胞有脫顆粒現(xiàn)象，細胞邊界略不清晰；87.5 mg／mL組大鼠肥大細胞脫顆?，F(xiàn)象較明顯，脫出顆粒散在細胞周圍，呈邊緣不規(guī)則長圓形或桑葚形，顏色為紫紅色；350 mg／mL組大鼠肥大細胞內(nèi)顆粒大量脫出，部分細胞胞漿空虛。

相關(guān)性分析顯示，藍斑直徑、脫顆粒率與碘海醇注射液質(zhì)量濃度均呈高度正相關(guān) （藍斑直徑r＝0.883，P＝0.000；脫顆粒率 r＝0.863，P＝0.000）， 兩者之間亦然 （r＝0.958， P＝0.000）。

表4 碘海醇注射液對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.4 Effects of Iohexol Injection on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

表4 碘海醇注射液對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.4 Effects of Iohexol Injection on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

注：與生理鹽水組比較，?P＜0.05，??P＜0.01

組別 質(zhì)量濃度／（mg·mL－1）臨床最高用藥劑量倍數(shù)／倍 類過敏性評價 藍斑直徑／cm 肥大細胞數(shù)／個 脫顆粒率／%生理鹽水組 — — 陰性 0.317±0.075 8.87±3.21 8.9±6.7 C48／80組 0.015 — 陽性 1.067±0.082?? 9.33±3.50 99.7±0.4?碘海醇注射液組 5.5 1／64 陰性 0.317±0.041 9.40±1.84 8.2±4.6碘海醇注射液組 21.9 1／16 陰性-陽性 0.483±0.147? 9.53±1.88 29.7±19.9?碘海醇注射液組 87.5 1／4 陽性 0.617±0.075?? 9.70±3.15 60.8±7.0??碘海醇注射液組 350 1 陽性 0.817±0.041?? 9.97±4.37 79.0±16.2??

3.4 紫杉醇注射液對大鼠皮膚藍斑直徑、肥大細胞脫顆粒的影響 紫杉醇注射液以0.75、1.5、3、6 mg／mL質(zhì)量濃度皮下注射，分別相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的 1／4、 1／2、 1、 2倍， 結(jié)果見表 5。 由表可知，各質(zhì)量濃度紫杉醇注射液藍斑直徑、脫顆粒率均較生理鹽水顯著增加 （P＜0.01），但肥大細胞數(shù)均無明顯變化 （P＞0.05）。

表5 紫杉醇注射液對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.5 Effects of Paclitaxel Injection on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

表5 紫杉醇注射液對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.5 Effects of Paclitaxel Injection on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

注：與生理鹽水組比較，?P＜0.05，??P＜0.01

組別 質(zhì)量濃度／（mg·mL－1）臨床最高用藥劑量倍數(shù)／倍 類過敏性評價 藍斑直徑／cm 肥大細胞數(shù)／個 脫顆粒率／%生理鹽水組 — — 陰性 0.250±0.105 5.43±2.07 7.9±4.8 C48／80 組 0.015 — 陽性 1.067±0.121?? 8.53±2.35? 96.9±3.2??紫杉醇注射液組 0.75 1／4 陽性 0.617±0.098?? 5.97±0.87 51.4±11.8??紫杉醇注射液組 1.5 1／2 陽性 0.700±0.089?? 7.13±1.67 63.4±15.3??紫杉醇注射液組 3 1 陽性 0.733±0.175?? 6.63±1.36 63.0±13.3??紫杉醇注射液組 6 2 陽性 1.000±0.126?? 5.97±1.46 81.4±9.5??

組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果顯示，肥大細胞脫顆?，F(xiàn)象隨紫杉醇注射液質(zhì)量濃度提高而增加，其中0.75 mg／mL組可見50%左右肥大細胞脫顆粒，未脫顆粒細胞呈邊界清晰的深紫紅色類圓形；1.5、3 mg／mL組可見 60%左右肥大細胞脫顆粒；6 mg／mL組脫顆粒數(shù)占總數(shù)的80%左右，脫顆粒細胞呈輪廓不清晰的長圓形或桑葚形，部分細胞內(nèi)顆粒大量脫出，細胞胞漿空虛。

相關(guān)性分析顯示，藍斑直徑、脫顆粒率與紫杉醇注射液質(zhì)量濃度均呈高度正相關(guān) （藍斑直徑r＝0.846，P＝0.000；脫顆粒率 r＝0.820，P＝0.000）， 兩者之間亦然 （r＝0.923， P＝0.000）。

3.5 注射用血塞通 （凍干）對大鼠皮膚藍斑直徑、肥大細胞脫顆粒的影響 注射用血塞通 （凍干） 以0.4、0.8、1.6、3.2 mg／mL質(zhì)量濃度皮下注射，分別相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的1／4、1／2、1、2倍，結(jié)果見表6。由表可知，各質(zhì)量濃度注射用血塞通 （凍干）藍斑直徑、脫顆粒率均較生理鹽水顯著增加 （P＜0.01）， 并且 0.8、 1.6 mg／mL時肥大細胞數(shù)也顯著增加 （P＜0.05）。

組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果顯示，注射用血塞通（凍干）各質(zhì)量濃度組肥大細胞脫顆?，F(xiàn)象與生理鹽水組比較均較顯著，其中0.4、0.8、1.6 mg／mL組脫顆粒率均在50%以上；3.2 mg／mL組脫顆粒率接近80%，肥大細胞邊界不清晰，細胞外有大量顆粒存在，呈不規(guī)則長圓形、桑葚形。

相關(guān)性分析顯示，藍斑直徑、脫顆粒率與注射用血塞通 （凍干）質(zhì)量濃度均呈正相關(guān) （藍斑直徑 r＝0.604， P＝0.000； 脫顆粒率 r＝0.582， P＝0.001）， 兩者之間亦然 （r＝0.552， P＝0.000）。

表6 注射用血塞通 （凍干）對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.6 Effects of Xuesaitong Freeze-dried Powder for Injection on blue spot diameter，mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

表6 注射用血塞通 （凍干）對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.6 Effects of Xuesaitong Freeze-dried Powder for Injection on blue spot diameter，mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

注：與生理鹽水組比較，?P＜0.05，??P＜0.01

組別 質(zhì)量濃度／（mg·mL－1）臨床最高用藥劑量倍數(shù)／倍 類過敏性評價 藍斑直徑／cm 肥大細胞數(shù)／個 脫顆粒率／%生理鹽水組 — — 陰性 0.25±0.15 4.67±0.60 18.7±11.7 C48／80 組 0.015 — 陽性 1.02±0.04?? 4.40±1.36 88.8±12.3??注射用血塞通（凍干）組 0.4 1／4 陽性 0.75±0.16?? 7.57±2.99 77.6±20.5??注射用血塞通（凍干）組 0.8 1／2 陽性 0.78±0.08?? 6.67±2.24? 74.0±20.7??注射用血塞通（凍干）組 1.6 1 陽性 0.83±0.14?? 7.53±1.81? 76.5±18.0??注射用血塞通（凍干）組 3.2 2 陽性 0.85±0.35?? 5.70±1.21 86.0±21.7??

3.6 喜炎平注射液對大鼠皮膚藍斑直徑、肥大細胞脫顆粒的影響 喜炎平注射液以2.5、5、10、20 mg／mL質(zhì)量濃度皮下注射，分別相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的1／2、1、2、4倍，結(jié)果見表7。由表可知，僅5 mg／mL喜炎平注射液藍斑直徑顯著減少 （P＜0.05），而肥大細胞數(shù)、脫顆粒率均無明顯變化 （P＞0.05）。

組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果顯示，喜炎平注射液各質(zhì)量濃度組均未見明顯肥大細胞脫顆?，F(xiàn)象，細胞邊界清晰，呈深紫色類圓形，與生理鹽水組無明顯差異。

表7 喜炎平注射液對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.7 Effects of Xiyanping Injection on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

表7 喜炎平注射液對藍斑直徑、肥大細胞數(shù)及脫顆粒率的影響 （±s， n＝6）Tab.7 Effects of Xiyanping Injection on blue spot diameter， mast cell count and degranulation rate（±s， n＝6）

注：與生理鹽水組比較，?P＜0.05，??P＜0.01

組別 質(zhì)量濃度／（mg·mL－1）臨床最高用藥劑量倍數(shù)／倍 類過敏性評價 藍斑直徑／cm 肥大細胞數(shù)／個 脫顆粒率／%生理鹽水組 — — 陰性 0.32±0.13 5.80±1.73 9.0±10.2 C48／80 組 0.015 — 陽性 0.98±0.13?? 7.03±2.92 97.2±4.3??喜炎平注射液組 2.5 1／2 陰性 0.30±0.14 5.70±2.42 5.4±1.7喜炎平注射液組 5 1 陰性 0.17±0.08? 5.90±1.34 5.6±3.6喜炎平注射液組 10 2 陰性 0.38±0.10 6.97±1.73 7.8±4.8喜炎平注射液組 20 4 陰性 0.20±0.09 7.80±3.43 8.7±6.1

4 討論

大鼠皮膚類過敏試驗是指將能引起類過敏的物質(zhì)注入大鼠皮內(nèi)，刺激皮膚肥大細胞脫顆粒，釋放活性物質(zhì)，使局部毛細血管通透性增高，同時靜脈注射生物染料伊文思藍隨血漿白蛋白由毛細血管內(nèi)滲出至血管外，導(dǎo)致注射部位皮膚藍染，然后通過測定皮膚注射部位藍斑直徑大小對受試藥可能引起的類過敏性進行評定，該方法由于操作簡便、檢測敏感性強、重復(fù)性好而在業(yè)內(nèi)受到一定關(guān)注。但由于在具體操作過程中將受試物刺入皮內(nèi)的針頭角度及深淺與技術(shù)操作人員個體習(xí)慣及隨意性密切相關(guān)，可導(dǎo)致藍斑直徑大小和深淺有著明顯差異，從而對以藍斑直徑為類過敏性評價標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)果造成一定影響［11］，同時由于藍斑直徑是基于擴血管機制所致，故同樣具有擴張毛細血管通透性的受試藥物（如活血化瘀藥）采用該方法時可能會產(chǎn)生假陽性結(jié)果［12］。因此，本實驗應(yīng)用組織形態(tài)學(xué)檢測手段，觀察給藥部位皮膚組織中肥大細胞脫顆粒狀況，分析脫顆粒率、功能反應(yīng) （藍斑直徑）、給藥濃度三者之間的相關(guān)性，探索大鼠皮膚類過敏反應(yīng)的組織學(xué)機制，同時評價給藥部位皮膚組織中肥大細胞脫顆粒率作為評定類過敏性補充指標(biāo)的可行性。

首先，選用公認的致類過敏反應(yīng)陽性物質(zhì)Compound 48／80 （C48／80） 進行考察。

在此基礎(chǔ)上，再選用中藥注射液常用輔料吐溫-80、西藥制劑碘海醇注射液、中藥單一成分制劑紫杉醇注射液、中藥復(fù)合成分制劑注射用血塞通（凍干）及喜炎平注射液進行考察。結(jié)果，吐溫-80體積分數(shù)在1%時開始出現(xiàn)肥大細胞脫顆現(xiàn)象，2%～8%時大量脫顆粒，其陽性反應(yīng)體積分數(shù)與前期報道［13-14］一致，藍斑直徑、脫顆粒率與其體積分數(shù)均呈高度正相關(guān)，兩者之間亦然；碘海醇注射液為臨床常用造影劑，其致過敏樣休克甚至死亡的事件有多篇報道［15-19］，本實驗發(fā)現(xiàn)其質(zhì)量濃度相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的1／16倍時可出現(xiàn)肥大細胞脫顆現(xiàn)象，1／4～1倍時大量脫顆粒，藍斑直徑、脫顆粒率與其質(zhì)量濃度均呈高度正相關(guān)，兩者之間亦然；紫杉醇注射液為乳腺癌、卵巢癌等治療的常用藥物，臨床常有類過敏反應(yīng)發(fā)生［20］，其類過敏反應(yīng)發(fā)生機制可能是通過激活補體系統(tǒng)和直接刺激兩方面導(dǎo)致肥大細胞脫顆粒釋放活性物質(zhì)［21］，本實驗發(fā)現(xiàn)其質(zhì)量濃度相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的1／4、1／2、1、2倍時均顯示出較強的致類過敏性，藍斑直徑、脫顆粒率與其質(zhì)量濃度均呈高度正相關(guān)，兩者之間亦然；注射用血塞通 （凍干）具有活血祛瘀、通脈活絡(luò)功效，臨床主要用于治療動脈粥狀硬化性血栓性腦梗塞、腦栓塞等疾病，本實驗發(fā)現(xiàn)其質(zhì)量濃度相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的1／4、1／2、1、2倍時均出現(xiàn)較明顯肥大細胞脫顆?，F(xiàn)象，藍斑直徑、脫顆粒率與其質(zhì)量濃度均呈正相關(guān)，兩者之間亦然；喜炎平注射液具有清熱解毒、止咳止痢功效，臨床主要用于質(zhì)量支氣管炎、扁桃體炎、細菌性痢疾等疾病，本實驗發(fā)現(xiàn)其質(zhì)量濃度相當(dāng)于臨床最高用藥劑量的1／2、1、2、4倍時均未出現(xiàn)明顯肥大細胞脫顆粒、藍斑直徑增加現(xiàn)象，雖然它為國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布 《藥品不良反應(yīng)信息通報》第48期提示的能引起嚴重過敏反應(yīng)的藥物，但至今未見有文獻確證其臨床不良反應(yīng)由類過敏反應(yīng)所致的證據(jù)，本研究結(jié)果亦然，故是否因過敏或類過敏所致需作進一步探討。