陶 李，杜 明，王昱斌，李光迪

(蘭州大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)中心,甘肅蘭州 730000)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種慢性炎癥性、自身免疫性疾病，目前病因不明。臨床多表現(xiàn)為手、足小關(guān)節(jié)的對(duì)稱性、侵襲性炎癥。免疫細(xì)胞的激活，炎癥介質(zhì)的浸潤，在RA的發(fā)生發(fā)展中扮演至關(guān)重要的角色[1-2]。鈣衛(wèi)蛋白是由S100A8和S100A9兩種鈣結(jié)合蛋白組成的異源二聚體。作為一種炎癥性蛋白質(zhì)，其血清水平會(huì)在組織出現(xiàn)損傷或炎癥時(shí)升高[3-4]。有研究指出鈣衛(wèi)蛋白在RA患者滑膜及滑液中高表達(dá)，其可能參與RA的致病過程[5-6]。本研究通過分析RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白水平，探討其與RA患者臨床疾病活動(dòng)度及實(shí)驗(yàn)室相關(guān)參數(shù)[C反應(yīng)蛋白(CRP)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體、類風(fēng)濕因子-IgM (RF-IgM)]之間的聯(lián)系，從而為RA患者臨床病情評(píng)估提供新的思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年10月至2018年5月在蘭州大學(xué)第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院的診斷明確的70例RA患者(RA組)，診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2010版美國風(fēng)濕病學(xué)院/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟制定的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。其中女61例，男9例，平均年齡(57.98±9.68)歲。同時(shí)根據(jù)DAS28評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，將RA組患者分為3組，分別為高疾病活動(dòng)組(DAS28>5.1分),中疾病活動(dòng)組(3.2分0.05)。兩組受試者無高血壓、心臟病、糖尿病等慢性系統(tǒng)性疾病，并排除合并其他自身免疫系統(tǒng)性疾病，且心、肝、腎等重要臟器功能均正常。本次研究獲得蘭州大學(xué)第二醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1臨床及實(shí)驗(yàn)室資料的收集 通過蘭州大學(xué)第二醫(yī)院患者數(shù)據(jù)庫對(duì)70例RA患者的臨床及實(shí)驗(yàn)室相關(guān)資料進(jìn)行整理收集。包括：(1)患者一般情況;年齡、性別、疾病持續(xù)時(shí)間；(2)患者臨床信息：疼痛持續(xù)時(shí)間、晨僵持續(xù)時(shí)間、28腫脹和疼痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)(28-SJC和28-TJC)、患者全身模擬評(píng)分(100-mm VAS)；(3)患者實(shí)驗(yàn)室相關(guān)指標(biāo)： CRP、ESR、RF-IgM、抗CCP抗體。計(jì)算DAS28評(píng)分[8]。

1.2.2鈣衛(wèi)蛋白定量檢測 收取RA患者的血清樣本，-80 ℃保存直到使用時(shí)取出，避免反復(fù)凍融。采用人鈣衛(wèi)蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(武漢華美)檢測血清鈣衛(wèi)蛋白水平。首先每孔加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本100 μL，覆蓋板貼，37 ℃孵育2 h。每孔加生物素抗體工作液100 μL，覆蓋新板貼，37 ℃孵育1 h。洗滌，每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液100 μL，覆蓋新板貼，37 ℃孵育1 h。洗滌，每孔加底物溶液90 μL，37 ℃避光顯色15 min。每孔加終止液50 μL，5 min內(nèi)用酶標(biāo)儀(北京朗普)在450 nm波長依次測量各孔的光密度(OD值)。

2 結(jié) 果

2.1RA患者及健康對(duì)照組血清鈣衛(wèi)蛋白水平測定 RA患者平均血清鈣衛(wèi)蛋白水平[(108.91±113.15)ng/mL]明顯高于健康對(duì)照組[(8.33±1.98)ng/mL],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)],見圖1。低疾病活動(dòng)組RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白水平[(19.89±14.29)ng/mL]與健康對(duì)照組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.071)。中疾病活動(dòng)組和高疾病活動(dòng)組血清鈣衛(wèi)蛋白水平分別為[(77.35±99.79)ng/mL]和[(216.39±85.83)ng/mL]，均顯著高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高疾病活動(dòng)組較中疾病活動(dòng)組也有明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖2。

圖1 RA組與健康對(duì)照組血清衛(wèi)蛋白表達(dá)

圖2 不同疾病活動(dòng)度RA組患者鈣衛(wèi)蛋白的表達(dá)

2.2RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白表達(dá)與臨床相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析 RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白水平與28腫脹關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)(r=0.652,P<0.05)，28疼痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)(r=0.633,P<0.05)，DAS28評(píng)分(r=0.581,P<0.05)，RF-IgM(r=0.438,P<0.05)相關(guān)，而與CRP、ESR、抗-CCP抗體水平，疾病持續(xù)時(shí)間和年齡無相關(guān)性。見表1。

表1 RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白水平與其臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)相關(guān)性

2.3以DAS28為因變量進(jìn)行多元線性回歸分析 鈣衛(wèi)蛋白、血沉與其呈正相關(guān)，而CRP、年齡、性別、病程與其不相關(guān)。即在矯正CRP、ESR、年齡、性別、疾病持續(xù)時(shí)間后，鈣衛(wèi)蛋白與DAS28評(píng)分相關(guān)性(P<0.05)依然存在。并且結(jié)果還提示鈣衛(wèi)蛋白對(duì)于DAS28評(píng)分的相關(guān)性要優(yōu)于CRP與ESR。

3 討 論

RA是一種多病因引起的慢性、炎癥性自身免疫性疾病，它可以導(dǎo)致關(guān)節(jié)的破壞和功能的喪失[9]。對(duì)于RA患者來說，疾病活動(dòng)性的監(jiān)測在疾病的治療中尤為重要。使用傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)如CRP和ESR反映RA疾病的活動(dòng)性，因?yàn)樗鼈冎皇情g接反映了局部炎癥的程度[10]，特異度和靈敏度都不夠理想。因此，迫切需要尋找用于診斷和評(píng)估RA疾病活動(dòng)的特異性血清學(xué)標(biāo)志物。

鈣衛(wèi)蛋白-屬于S100鈣結(jié)合蛋白家族。其由中性粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、激活的巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板及成纖維細(xì)胞中表達(dá)分泌[11]。鈣衛(wèi)蛋白約占中性粒細(xì)胞胞質(zhì)蛋白的45%，單核細(xì)胞胞質(zhì)蛋白的1%[12]。在細(xì)胞內(nèi)，鈣衛(wèi)蛋白通過以鈣依賴性方式促進(jìn)微管蛋白聚合并穩(wěn)定微管蛋白，從而促進(jìn)吞噬細(xì)胞遷移。在細(xì)胞外主要是從活化的或壞死的中性粒細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞中釋放，作為炎癥蛋白質(zhì)參與多種自身免疫性疾病的致病過程[13]。并且鈣衛(wèi)蛋白能直接反映RA患者滑膜和滑液的炎癥活動(dòng)[14]。HURNAKOVA等[15]發(fā)現(xiàn)在反映RA患者炎癥方面，鈣衛(wèi)蛋白比CRP更加敏感。CHOI等[16]研究認(rèn)為監(jiān)測RA患者血清中鈣衛(wèi)蛋白的表達(dá)可以用來評(píng)估RA患者藥物的療效。另有研究者發(fā)現(xiàn)鈣衛(wèi)蛋白與超聲滑膜炎評(píng)分相關(guān)，而且可以用于預(yù)測RA患者影像學(xué)的相關(guān)進(jìn)展[17]。HAMMER等[18]的報(bào)道中顯示RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白與其抗-CCP抗體水平和RF-IgM水平相關(guān)。而最新研究表明RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白水平與其RF-IgM水平相關(guān)，但是與抗-CCP抗體水平?jīng)]有相關(guān)性[14]，不同研究結(jié)果的出現(xiàn)可能與他們選擇的患者接受了不同的藥物治療有關(guān)。具體結(jié)論還需要進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果顯示，RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白的表達(dá)水平明顯高于健康人群，顯示出血清鈣衛(wèi)蛋白可能參與RA的發(fā)生發(fā)展。為了驗(yàn)證RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白水平是否與其臨床疾病活動(dòng)程度和實(shí)驗(yàn)室特異性指標(biāo)相關(guān)聯(lián)，將70例RA患者根據(jù)DAS28評(píng)分分為3組。結(jié)果顯示，高疾病活動(dòng)組患者具有更高的鈣衛(wèi)蛋白水平。在相關(guān)性分析中，RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白水平與其28腫脹關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)、28疼痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)、DAS28評(píng)分、RF-IgM水平呈正相關(guān)。在以DAS28評(píng)分為因變量的多元線性回歸分析中，發(fā)現(xiàn)在矯正年齡、性別、疾病持續(xù)時(shí)間、CRP、CER后，鈣衛(wèi)蛋白水平與DAS28評(píng)分依然具有良好的相關(guān)性。同時(shí)結(jié)果還提示，鈣衛(wèi)蛋白與DAS28評(píng)分的相關(guān)性優(yōu)于傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)CRP與ESR。這說明RA患者血清鈣衛(wèi)蛋白水平與其臨床疾病活動(dòng)性和實(shí)驗(yàn)室特異性標(biāo)志物之間存在密切關(guān)系。

由于本研究只進(jìn)行了橫向的觀察性研究，同時(shí)樣本含量相對(duì)較小，還需要更大樣本的深入研究來進(jìn)一步驗(yàn)證相關(guān)結(jié)論。同時(shí)，還可對(duì)鈣衛(wèi)蛋白作為RA患者診斷、預(yù)后評(píng)估、藥物療效預(yù)測及治療靶點(diǎn)的可能性進(jìn)行探索。

綜上所述，血清鈣衛(wèi)蛋白水平與RA實(shí)驗(yàn)特異性指標(biāo)和臨床疾病活動(dòng)度之間存在密切關(guān)系，對(duì)評(píng)估和監(jiān)測RA患者病情有重要的指導(dǎo)和參考意義。