仇業(yè)鵬 張庭然

1. 重慶師范大學(xué)體育與健康科學(xué)學(xué)院，重慶 401331 2. 西南大學(xué)體育學(xué)院，重慶 400715

在《美國醫(yī)學(xué)會雜志》 (The Journal of theAmerican Medical Association，JAMA)和《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》 (The New England Journal of Medicine，NEJM)等權(quán)威期刊頻頻刊登代謝綜合征 (metabolic syndrome， MS) 相關(guān)研究[1-2]。在流行病學(xué)領(lǐng)域MS亦是研究熱點(diǎn)[3]。MS是多種代謝成分紊亂集中體現(xiàn)的病理狀態(tài)，主要包括糖、脂類、蛋白質(zhì)、尿酸和骨代謝紊亂等，MS能夠顯著加速肥胖、高血脂、高血壓、2型糖尿病進(jìn)程，同時會大幅度增加心腦血管疾病的患病風(fēng)險[4-5]。Daudt、Lim等[6-7]研究表明，絕經(jīng)期女性被認(rèn)為MS 的易感人群，MS在絕經(jīng)期婦女中患病率約為33%～42%。MS中高血壓、糖尿病、心腦血管等表現(xiàn)由于其直接的危險性和危害性受到較高的關(guān)注，相關(guān)研究也較多。而肥胖和骨代謝異常由于其危害性需要較長時間的積累方能顯現(xiàn)，所以受關(guān)注程度較低。婦女絕經(jīng)后由于雌性激素水平下降，體內(nèi)激素環(huán)境呈現(xiàn)明顯改變，絕經(jīng)婦女經(jīng)常出現(xiàn)內(nèi)臟脂肪和皮下脂肪的堆積增加，從而導(dǎo)致肥胖的發(fā)生，與肥胖伴生的高血脂癥則是心腦血管疾病的重要危險因素。女性進(jìn)入絕經(jīng)期，由于雌激素下降，骨量流失加劇，髖部、股骨和腰椎等位置骨量流失較為嚴(yán)重，容易出現(xiàn)骨質(zhì)疏松現(xiàn)象。絕經(jīng)期女性往往會伴隨肥胖高血脂與骨質(zhì)疏松發(fā)生。有研究認(rèn)為這可能與雌激素下降和皮質(zhì)醇上升有關(guān)[2]。適量運(yùn)動被認(rèn)為能夠有效改善骨質(zhì)，增加骨密度。而運(yùn)動減肥一直以來是最被推崇的科學(xué)減肥方法。但是通過跑步改善骨量和骨密度，一般要連續(xù)運(yùn)動35周以上才能實(shí)現(xiàn)[4]。在降低血脂方面，美國運(yùn)動醫(yī)學(xué)會的運(yùn)動處方指南中提到，中低強(qiáng)度跑步運(yùn)動同時配合清血脂類膳食添加劑降低血脂作用會顯著優(yōu)于單純跑步[8]。銀杏葉提取物(Ginkgo biloba extract，GBE)是一種應(yīng)用廣泛的傳統(tǒng)中藥，主要有效成分為是銀杏萜內(nèi)酯類化合物和黃酮類化合物，GBE因其具有抗氧化、改善缺血心肌功能等功效，已被應(yīng)用于心腦血管疾病治療[9-10]。但隨著有關(guān)GBE研究深入，發(fā)現(xiàn)GBE的應(yīng)用遠(yuǎn)不止于此。有研究顯示GBE能夠顯著提升骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，同時能夠抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化[11]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)攝入GBE對骨質(zhì)疏松大鼠的成骨有促進(jìn)作用，可以加速骨小梁的形成，增強(qiáng)骨密度[12]。也有研究顯示GBE能夠明顯降低大鼠血清總膽固醇水平，并且夠緩解高脂飲食導(dǎo)致的心血管炎癥[13]。但目前將運(yùn)動聯(lián)合GBE攝入對人或動物降低血脂或改善骨健康的研究尚少。但運(yùn)動和GBE在降低血脂或改善骨健康方面具有類似作用，聯(lián)合使用有可能形成疊加效應(yīng)，從而增加治療效果或者縮短治療時間。因此，本研究將跑步運(yùn)動配合銀杏葉提取物攝入作為干預(yù)方案，以去卵巢肥胖骨質(zhì)疏松大鼠為研究對象，探討跑步運(yùn)動配合銀杏葉提取物攝入對骨密度、血脂和抗氧化能力的影響。為探索改善絕經(jīng)期肥胖骨質(zhì)疏松婦女的骨健康、脂代謝提供有效參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物：本實(shí)驗(yàn)從重慶醫(yī)科大學(xué)下屬動物實(shí)驗(yàn)中心(SCXK(渝) 2017-0023)購得12周齡未經(jīng)產(chǎn)SPF級健康雌性Sprague Dawley(SD)大鼠80只，體重為(270.4±18.6)g。所有SD大鼠進(jìn)行分籠飼養(yǎng)，大鼠自由飲水飲食，在適應(yīng)期飼養(yǎng)期間，飼料采用符合國家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物飼料進(jìn)行喂食，動物房內(nèi)溫度保持22～25 ℃，相對濕度保持45%～55%，明暗分期為12/12 h，所有大鼠實(shí)驗(yàn)前均未在動物跑臺上進(jìn)行過運(yùn)動。本研究中對實(shí)驗(yàn)動物處理完全符合我國科學(xué)技術(shù)部辦公廳2004年發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動物的指導(dǎo)性意見》。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑：GBE(總黃酮醇苷含量26.2%、萜類內(nèi)酯含量為7.8%)由江蘇金納多生物科技有限公司生產(chǎn)，配置過程時稱取GBE，將銀杏葉提取物溶解于生理鹽水中(50 g /L)并且進(jìn)行2 min研磨混懸，在4 ℃ 避光保存。戊巴比妥鈉，上海信裕生物科技有限公司生產(chǎn)。青霉素鈉，河北石家莊制藥集團(tuán)四廠生產(chǎn)。大鼠骨鈣素(OC) 檢測試劑盒-ELISA檢測試劑盒，美國R&D Systems生物科技有限公司生產(chǎn)。大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP) 檢測試劑盒-ELISA檢測試劑盒，美國R&D Systems生物科技有限公司生產(chǎn)。雌二醇(E2)檢測試劑盒-ELISA檢測試劑盒，美國R&D Systems生物科技有限公司生產(chǎn)。丙二醛(malondialdehyde，MDA)檢測試劑盒-ELISA檢測試劑盒，美國R&D Systems生物科技有限公司生產(chǎn)。超氧歧化酶(superoxide dismutase, SOD)檢測試劑盒-ELISA檢測試劑盒，美國R&D Systems生物科技有限公司生產(chǎn)。谷胱甘肽過氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)檢測試劑盒-ELISA檢測試劑盒，過氧化氫酶(catalase, CAT)檢測試劑盒-ELISA檢測試劑盒，美國R&D Systems生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.1.3實(shí)驗(yàn)設(shè)備：美國Johnson&Johnson 公司DT-60Ⅱ型血液分析儀，上海分析儀器公司UV-8000ST觸屏版雙光束紫外可見分光光度計，日本日立公司HITACHI-7000全自動生化分析儀，湖南湘儀集團(tuán)CTK-130C低溫離心機(jī)，美國AWARENESS 公司Statfax 4200 酶標(biāo)儀，韓國InAlyzer公司DXA雙能 X 線骨密度儀，江蘇賽昂斯公司SA109動物跑臺。

1.2 研究方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計：第1步：購回SD大鼠后，進(jìn)行1周適應(yīng)性籠內(nèi)飼養(yǎng)，自由飲食。第2步：將大鼠隨機(jī)分為去卵巢高脂組和對照組，去卵巢高脂組進(jìn)行卵巢切除手術(shù)，對照組進(jìn)行假手術(shù)，術(shù)后去卵巢高脂組進(jìn)行高脂飼料喂食，對照組進(jìn)行正常喂食，共進(jìn)行6周，將接受切除卵巢手術(shù)和高脂喂食的的大鼠又隨機(jī)分為模型組、銀杏葉組、運(yùn)動組、銀杏葉+運(yùn)動組，接受假手術(shù)和正常喂食的大鼠歸為假手術(shù)組。第3步：進(jìn)行12周干預(yù)，干預(yù)方案見表1。第4步：全部干預(yù)結(jié)束后，將各組大鼠分組置入代謝籠，采集24 h的尿樣，尿樣采集結(jié)束后，進(jìn)行大鼠的腹腔靜脈取血，對大鼠進(jìn)行骨掃描、血液生化指標(biāo)檢查、骨代謝標(biāo)志物檢查。

1.2.2制造動物模型：大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)結(jié)束后，將大鼠隨機(jī)分為切除卵巢高脂喂食組(ovariectomized，OVX組)和對照組，數(shù)量分別為60只和20只。將80只SD大鼠利用50 mg /kg戊巴比妥鈉(0.1 g/kg)進(jìn)行腹腔注射麻醉，剔除體毛，在大鼠脊柱左右側(cè)剪開背部肌肉約1.5 cm切口，對大鼠進(jìn)行卵巢切除，對照組大鼠只切除卵巢附近脂肪組織。最后利用可被大鼠自體吸收的羊腸線進(jìn)行刀口縫合，完成手術(shù)后對大鼠腹腔注射80萬IU/kg青霉素鈉，1次/d，連續(xù)注射7 d，以防出現(xiàn)術(shù)后感染。術(shù)后切除卵巢高脂喂食組進(jìn)行高脂飼料喂食，對照組進(jìn)行正常飼料喂食，進(jìn)行6周干預(yù)。本次造模中被切除卵巢和高脂喂食的60只大鼠均存活、精神良好，全部造模成功。假手術(shù)正常喂食的20只大鼠，全部存活且狀態(tài)良好。

1.2.3分組方案：術(shù)后6周后，停止高脂飼料喂食，進(jìn)行正常飼料喂食。將進(jìn)行假手術(shù)正常飼料喂食處理的對照組的20只大鼠定為假手術(shù)組(sham-operated，SO組，n=20)；接受去卵巢手術(shù)高脂飼料喂食的大鼠隨機(jī)分為模型組(model，M組，n=15)、跑步運(yùn)動組(run，R組,n=15)、GBE組(Ginkgo biloba extract,G組，n=15)、GBE+跑步運(yùn)動組(Ginkgo biloba extract+run,GR組,n=15)。其中G組按照100 mg /(kg·d)灌胃給予相應(yīng)的藥物，正常飼養(yǎng)不進(jìn)行運(yùn)動，GR組與G組采用相同給藥方式并進(jìn)行運(yùn)動，R組、S組、M組按與G組相同體積0.5% CMC-Na進(jìn)行灌胃，其中R組每天進(jìn)行與GR組相同運(yùn)動，S組、M組進(jìn)行正常飼養(yǎng)，不運(yùn)動。所有實(shí)驗(yàn)大鼠每天灌胃1次，每周灌胃6 d，連續(xù)給藥12周。在12周干預(yù)后所有大鼠皆存活，未出現(xiàn)死亡，且精神狀態(tài)良好。

1.3 觀察檢測指標(biāo)

1.3.1觀測大鼠健康及生活狀態(tài)指標(biāo)：自大鼠購回后，專人觀察所有大鼠適應(yīng)狀況、大鼠術(shù)后傷口恢復(fù)、精神、飲食、體重、排泄等狀況，每周記錄大鼠體重。

1.3.2骨密度、骨代謝檢測指標(biāo)：①12周干預(yù)結(jié)束后，本研究利用韓國InAlyzer-DXA雙能 X 線骨密度檢測儀中RCP活體小動物掃描模式對大鼠左腿股骨進(jìn)行檢查。②12周干預(yù)結(jié)束對大鼠進(jìn)行后腹腔采血，常溫(22 ℃)下血樣靜置1 h，利用低溫高速離心機(jī)，在4 ℃下對血液以4 000 r/min 離心8 min。利用酶聯(lián)免疫法-ELISA檢測血清骨鈣含量(osteocalcin，OC)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)水平；利用生化分析儀檢測血清中鈣(Ca)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、磷(P)水平。

1.3.3激素、血脂、抗氧化指標(biāo)檢測： 本研究大鼠經(jīng)12周實(shí)驗(yàn)干預(yù)后，在24 h內(nèi)，通過腹腔取血采集約20 mL的血樣，并保存于EDTA 抗凝采血管中，按

表1 分組方案表Table 1 Grouping scheme

次序進(jìn)行編號，利用低溫高速離心機(jī)，在4 ℃下對血液以4 000 r/min 離心8 min。采用酶聯(lián)免疫法-ELISA酶法檢測血清雌二醇(Serum estradiol，E2)、檢測丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-PX)、過氧化氫酶(catalase，CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的水平。利用全自動血液分析儀、紫外分光度儀檢測血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三脂(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol， HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol LDL-C)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究利用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計分析。通過描述性分析、多因素方差分析檢驗(yàn)運(yùn)動因素和攝入銀杏葉提取物因素對大鼠各項指標(biāo)的影響。檢測中，當(dāng)交互作用具有統(tǒng)計學(xué)意義，則進(jìn)行Tukey method檢驗(yàn)。本文設(shè)置顯著水平為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 大鼠體重變化結(jié)果

大鼠體重變化結(jié)果見表2。

表2 大鼠體重變化(g，n=80)Table 2 Changes in body weight (g，n=80)

注：假手術(shù)組(S組)、模型組(M組)、運(yùn)動組(R組)、銀杏組(G組)、銀杏運(yùn)動組(GR組)；與S組比較，aP<0.05；與M組比較，bP<0.05。

表2顯示：①在購回進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)后，大鼠體重組間差異并無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05；②手術(shù)后6周，進(jìn)行干預(yù)前，去卵巢高脂喂食的M組、R組、G組、GR組大鼠體重顯著高于S組大鼠；說明肥胖大鼠模型構(gòu)建成功；③在干預(yù)后3、6、9、12周M組大鼠體重顯著高于S組，P<0.05，R組、G組、GR組大鼠體重有逐漸上升趨勢，但是在3、6、9、12周均顯著低于M組，P<0.05。④當(dāng)干預(yù)進(jìn)行至第9周、第12周R組與GR組大鼠體重高于S組但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。

2.2 大鼠骨密度和雌二醇測量結(jié)果

大鼠骨密度和雌二醇測量結(jié)果見表3。

表3 各組骨密度和血清雌二醇水平測試結(jié)果(n=80)Table 3 Comparison of BMD and E2 among groups(n=80)

注：與S組比較，aP<0.05；與M組比較，bP<0.05。

表3顯示：①M(fèi)組大鼠BMD、血清E2水平顯著低于S組大鼠，P<0.05。②R組、G組GR組大鼠BMD、血清E2水平顯著高于M組(P<0.05)，雖低于S組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0. 05，GR組BMD、血清E2水平高于R組、G組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。

2.3 大鼠骨質(zhì)代謝測量結(jié)果

大鼠骨質(zhì)代謝測量結(jié)果見表4。

表4 OC、ALP、DPD /Cre、Ca、P結(jié)果(n=80)Table 4 Measuring result of OC, ALP, DPD / Cre, Ca, P(n=80)

注：與S組比較，aP<0.05；與M組比較，bP<0.05。

表4顯示：①M(fèi)組大鼠血清OC、ALP、尿液DPD/Cre、Ca/Cre、P/Cre水平顯著高于S組、R組、G組和GR組，P<0.05。S組大鼠血清OC、ALP、尿液DPD/Cre、Ca/Cre、P/Cre水平與R組、G組、GR組差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。②大鼠血清Ca、P水平方面，M組、S組、R組、G組、GR組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。

2.4 氧化指標(biāo)測量結(jié)果

氧化指標(biāo)測量結(jié)果見表5。

表5 大鼠血清CAT、GSH-PX、MDA、SOD測量結(jié)果(n=80)Table 5 Measuring result of CAT、GSH-PX、MDA、SOD(n=80)

注：與S組比較，aP<0.05；與M組比較，bP<0.05；與R組比較，cP<0.05；與G組比較，dP<0.05。

表5顯示：①M(fèi)組大鼠MDA水平顯著高于S組、R組、G組和GR組，P<0.05；S組大鼠MDA水平顯著低于與R組、G組、GR組，P<0.05，R組、G組、GR組組間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。②M組大鼠CAT、GSH-PX水平顯著低于S組、R組、G組和GR組，P<0.05；S組大鼠CAT、GSH-PX水平顯著高于與R組、G組、GR組，P<0.05，GR組大鼠CAT、GSH-PX水平顯著高于與R組、G組，P<0.05， R組、G組組間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。③M組大鼠SOD水平顯著低于S組、R組、G組和GR組，P<0.05；S組、R組、G組和GR組組間差異則無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。

2.5 大鼠血脂測量結(jié)果

大鼠血脂測量結(jié)果見表6。

表6顯示：①M(fèi)組大鼠血液TG、TC水平顯著高于S組、R組、G組和GR組，P<0.05；S組大鼠血液TG、TC水平顯著低于與R組、G組，P<0.05，但與GR組比較差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。

表6 血脂測量結(jié)果Table 6 Measuring result of blood lipid(mmol/L)

注：與S組比較，aP<0.05；與M組比較，bP<0.05。

②M組大鼠血液LDL-C水平顯著高于S組、R組、G組和GR組，P<0.05；S組大鼠血液LDL-C水平與R組、G組、GR組比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。

3 討論

流行病學(xué)研究顯示MS在女性絕經(jīng)后發(fā)病率升高，其中絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松和中老年肥胖是其中重要表征[2]。骨質(zhì)疏松(OP)是一種多原因引發(fā)的骨量丟失、骨結(jié)構(gòu)退化導(dǎo)致骨脆性增加的全身性骨代謝疾病[6]。骨質(zhì)疏松主要分為原發(fā)性骨質(zhì)疏松和繼發(fā)性骨質(zhì)疏松，原發(fā)性骨質(zhì)疏松占大多數(shù)，原發(fā)性骨質(zhì)疏松又分為老年性骨質(zhì)疏松、絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松、特發(fā)性(少年)骨質(zhì)疏松。其中絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松較為常見，其原因主要是絕經(jīng)后卵巢功能退化、機(jī)體雌激素水平降低，骨代謝升高、骨量流失加劇。同樣由于雌激素水平下降，導(dǎo)致脂代謝速率降低，血脂、內(nèi)臟脂肪、皮下脂肪堆積，所以中老年女性肥胖和高血脂較為常見[14]。本研究利用未經(jīng)產(chǎn)的雌性SD大鼠進(jìn)行雙側(cè)卵巢摘除和高脂喂食建立絕經(jīng)骨質(zhì)疏松并發(fā)肥胖模型，通過跑步運(yùn)動聯(lián)合銀杏葉提取物攝入進(jìn)行12周干預(yù)，研究該方案對去卵巢骨質(zhì)疏松并發(fā)肥胖大鼠骨密度、骨代謝、脂代謝、抗氧化相關(guān)指標(biāo)的影響。

3.1 不同干預(yù)方案對大鼠體重和脂代謝的影響

本研究中在進(jìn)行干預(yù)前去卵巢手術(shù)聯(lián)合高脂喂食的M組、R組、G組、GR組大鼠體重顯著高于S組大鼠，M組、R組、G組、GR組大鼠體重與先前有關(guān)肥胖大鼠模型的研究中大鼠數(shù)據(jù)比較后發(fā)現(xiàn)肥胖大鼠模型構(gòu)建成功。但過去的研究中一般高脂喂食大鼠的模型建立[15]，需要8～12周，但本研究6周模型建立成功，這可能與本研究使用去卵巢大鼠有關(guān)，大鼠去卵巢后，雌激素水平下降，骨量流失增加，機(jī)體出于代償機(jī)制，刺激體重增加。在此機(jī)制作用下，結(jié)合高脂喂食，導(dǎo)致肥胖大鼠模型形成較快。本研究發(fā)現(xiàn)在干預(yù)過程中R組、G組、GR組大鼠體重雖然仍呈上升趨勢，但其上升速度顯著低于M組，所以可以認(rèn)為跑步干預(yù)、攝入GBE干預(yù)、跑步+GBE干預(yù)能夠降低肥胖的發(fā)生，在干預(yù)的第12周R組與GR組大鼠體重高于S組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明跑步運(yùn)動是體重變化的主要影響因素。

3.2 不同干預(yù)方案對大鼠骨密度、骨代謝的影響

骨質(zhì)疏松癥的成因復(fù)雜，其中成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞間動態(tài)平衡遭受破壞是被公認(rèn)的重要成因，當(dāng)成骨細(xì)胞分化作用減弱，同時破骨細(xì)胞分化作用增強(qiáng)時，骨吸收超過骨生成，就會導(dǎo)致骨質(zhì)疏松發(fā)生。骨的轉(zhuǎn)換過程能夠通過測定間接標(biāo)志物，反映成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的活性。血清中 OC 水平可作為評估骨轉(zhuǎn)換率及骨形成的特異性標(biāo)志物，OC 則會參與成骨細(xì)胞分化及基質(zhì)的礦化全過程。此外本研究還選定尿液DPD、CA、P等生化指標(biāo)，代表了骨組織中無機(jī)物的變化狀態(tài)，通過以上指標(biāo)全面反映骨代謝情況。本研究發(fā)現(xiàn)：經(jīng)過12周干預(yù)S組、R組、G組和GR組血清OC、ALP、尿液DPD/Cre、Ca/Cre、P/Cre水平均明顯低于M組大鼠，而R組、G組、GR組與S組在以上指標(biāo)方面差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，M組OC、ALP水平高于其他組則說明，M組大鼠骨轉(zhuǎn)換率較高，DPD/Cre、Ca/Cre、P/Cre水平高于其他組說明，骨吸收率較高，M組大鼠破骨作用增強(qiáng)。而進(jìn)行干預(yù)的R組、G組和GR組骨代謝指標(biāo)雖略高于S組但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，說明經(jīng)過跑步干預(yù)或者攝入GBE能夠調(diào)節(jié)去卵巢肥胖大鼠的骨代謝平衡，降低骨轉(zhuǎn)換率，發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松的作用。

骨密度是骨骼強(qiáng)度的一個重要指標(biāo)，也是用來判斷骨質(zhì)疏松、評價骨質(zhì)健康狀況重要指標(biāo)。去卵巢后18周，M組大鼠BMD、血清E2水平顯著低于S組大鼠，再結(jié)合大鼠體重變化可判斷本研究去卵巢骨質(zhì)疏松肥胖大鼠模型構(gòu)建成功。R組、G組GR組大鼠BMD、血清E2水平顯著高于M組，說明GBE攝入對于骨密度具有改善作用，此結(jié)果與Mokuda等[16]的研究結(jié)果相似。Pan等[17]也觀察到 GBE攝入能夠加速骨形成促進(jìn)骨折愈合。GBE能夠改善骨密度的機(jī)制可能是GBE能促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞凋亡，使RANKL誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞的G0-G1期阻滯縮短，從而抑制破骨細(xì)胞分化、阻礙骨吸收作用。GR組骨密度高于G組和R組，并接近顯著水平。這現(xiàn)象說明跑步配合GBE攝入能夠效果疊加，跑步配合GBE對于骨密度的改善更為顯著，先前在Mokuda等[16]的研究中采用運(yùn)動加膳食添加劑方案取得較好效果，本研究與該研究結(jié)果類似。本研究中跑步運(yùn)動配合銀杏葉提取物攝入對骨密度具有明顯改善作用，在跑步運(yùn)動配合銀杏葉提取物攝入中長期干預(yù)下，絕經(jīng)骨質(zhì)疏松肥胖模型大鼠骨密度能夠接近正常大鼠骨密度。

3.3 不同干預(yù)方案對大鼠抗氧化指標(biāo)的影響

氧化應(yīng)激(oxidative stress，OS)是指機(jī)體受到各種有害外界刺激情況下，體內(nèi)氧化與抗氧化的動態(tài)平衡被打破，體內(nèi)高分子活性物質(zhì)過多，超過細(xì)胞氧化物的清除能力，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞炎性浸潤，蛋白酶分泌增加，產(chǎn)生大量氧化中間產(chǎn)物，從而導(dǎo)致組織損傷。氧化應(yīng)激被認(rèn)為是導(dǎo)致機(jī)體衰老和疾病的重要因素[8]。機(jī)體內(nèi)存在的酶能夠防御清除自由基如：SOD、CAT等。SOD、CAT、GSH-Px是抗氧化的重要檢測指標(biāo)，而 MDA為脂質(zhì)過氧化最終產(chǎn)物。MDA、SOD、CAT、GSH-Px 是大多數(shù)研究采用的反應(yīng)氧化應(yīng)激水平和抗氧化能力的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示R組、G組和GR組MDA水平顯著低于M組，而CAT、GSH-PX、SOD水平則顯著高于M組，說明通過去卵巢肥胖骨質(zhì)疏松大鼠利用跑步運(yùn)動配合攝入GBE方案、單純攝入GBE方案、跑步方案進(jìn)行中長期干預(yù)治療能夠增加機(jī)體抗氧化能力。過去許多學(xué)者進(jìn)行運(yùn)動抗氧化方面研究，已經(jīng)證實(shí)中低強(qiáng)度有氧運(yùn)動能夠提升機(jī)體抗氧化能力[18]。通過長期規(guī)律的運(yùn)動，能夠提升SOD、CAT、GSH-Px活性從而增加機(jī)體抗氧化能力，已經(jīng)被大量研究證實(shí)[19]。程林認(rèn)為，中低強(qiáng)度運(yùn)動能夠保持機(jī)體氧化應(yīng)激，從而保持了SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶的活性[20]。大量研究均證實(shí)生物類黃酮和多酚被認(rèn)為可以有效清除體內(nèi)的自由基，GBE主要成分即為黃酮類化合物，此外還含有銀杏內(nèi)酯、酚類。也有研究指出GBE能直接清除超氧陰離子及氧自由基，提升SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶的活性降低血清活性氧含量和黃嘌呤氧化酶活性[11]。與通過跑步運(yùn)動和攝入GBE增強(qiáng)抗氧化能力的機(jī)制不同，兩種方法聯(lián)合使用，抗氧化效果進(jìn)一步提高。

3.4 不同干預(yù)方案對大鼠體重和脂代謝的影響

慢性代謝綜合征中高血脂癥為常見表征，高血脂是通常由于機(jī)體攝取脂肪過量或脂代謝障礙等所誘發(fā)的血漿中脂類物質(zhì)濃度過高或持續(xù)升高的一種異常生理生化表現(xiàn)。大量流行病學(xué)研究證實(shí)，血液總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平與冠心病發(fā)病率顯著正相關(guān)，HDL-C水平與腦卒中、冠心病、動脈粥樣硬化疾病的發(fā)病率呈高度負(fù)相關(guān)。前文對于大鼠體重變化進(jìn)行了探討，體重變化雖能夠一定程度反應(yīng)脂代謝的情況，但目前對于脂代謝的常用指標(biāo)為TC、TG、HDL-C、LDL-C，本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過12周干預(yù)M組大鼠血液TG、TC、LDL-C水平顯著高于S組、R組、G組、GR組，S組大鼠血液TG、TC、LDL-C水平顯著低于R組、G組，該現(xiàn)象表明跑步運(yùn)動和攝入GBE均可降低血脂，達(dá)到改善脂代謝的目的。Hweta等[21]研究顯示中低強(qiáng)度跑步運(yùn)動能夠顯著降低總膽固醇、甘油三脂水平。Miguel等[22]研究顯示18周有氧跑步運(yùn)動能夠顯著降低LDL-C水平，提高HDL-C水平。本研究的跑步運(yùn)動速度為0.7 km/h，屬于中低強(qiáng)度運(yùn)動，正是運(yùn)動控制體重和降低血脂的最佳強(qiáng)度。跑步運(yùn)動對于降低體重和血脂具有明顯作用，這已經(jīng)被大量研究證實(shí)，本研究結(jié)果也再次證實(shí)跑步對于血脂的調(diào)節(jié)作用。本研究中攝入銀杏葉提取物組TG、TC、LDL-C水平顯著低于M組，這表明GBE具有調(diào)節(jié)改善血脂的作用。先前文獻(xiàn)報道，GBE能夠降低高血脂大鼠血清中總膽固醇水平的作用。Chobanian等[23]認(rèn)為GBE能夠調(diào)節(jié)血脂是通過清除氧自由基和抗脂質(zhì)過氧化作用機(jī)制實(shí)現(xiàn)的降脂。本研究結(jié)果顯示GBE能夠降低大鼠CAT、MDA，提升SOD、GSH-PX，說明GBE具有清除氧自由基和抗脂質(zhì)過氧化的作用。本研究顯示跑步+GBE攝入的方案，比單純跑步或攝入GBE具有明顯的調(diào)節(jié)血脂的效果，這說明跑步結(jié)合GBE攝入，能夠產(chǎn)生疊加效應(yīng)，是更高效的調(diào)節(jié)血脂方案。目前本研究主要集中于GBE提取物研究只涉及其中的一個環(huán)節(jié)， 對于GBE調(diào)血脂的機(jī)制研究還比較少，值得進(jìn)一步的研究。

4 結(jié)論

去卵巢肥胖骨質(zhì)疏松大鼠利用跑步運(yùn)動配合GBE攝入方案或單純攝入GBE方案進(jìn)行中長期干預(yù)治療能夠增加骨密度和雌激素水平，降低骨吸收和骨轉(zhuǎn)換率、降低體重和血脂水平、增加抗氧化能力。