陳俊杰

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 廣東 廣州 510000）

脂質(zhì)體包封率是評價脂質(zhì)體的重要指標(biāo),中國藥典2010版脂質(zhì)體制劑的指導(dǎo)原則指出脂質(zhì)體包封率不得小于80%。測定脂質(zhì)體包封率的方法有很多,一般為首先分離游離藥物,再測定被包封藥物或游離藥物,從而計算出包封率。分離脂質(zhì)體與游離藥物可采用微柱離心法、超速離心法、透析法、凝膠柱層析法、超濾法、魚精蛋白沉淀法等[1]。各種方法各有優(yōu)劣，但葡聚糖微型凝膠柱先后被 Fry[2]、New[3]和 ElMaghraby[4]采用，這種方法不僅洗脫速度快(一般為幾分至十幾分鐘),而且大大減少葡聚糖凝膠的用量,微柱僅需葡聚糖凝膠約0. 5 g,而常規(guī)柱用量為5～8 g。

1.儀器與材料

SpectraMax i3x 多功能酶標(biāo)儀,SartoriusCP225D型電子分析天平，Sephadex G 50葡聚糖凝膠,大豆磷卵磷脂（阿拉?。?膽固醇(阿拉丁),鹽酸川芎嗪(成都瑞芬生物科技有限公司),維生素E（阿拉?。?，十八胺（阿拉丁）,甲醇(分析純，廣州試劑廠)其他試劑(分析純,市售)。

2.方法

2.1 分離脂質(zhì)體與鹽酸川芎嗪的建立

2.1.1 供試品制備空白脂質(zhì)體的制備：精密稱取大豆卵磷脂100mg、膽固醇14.28mg、十八胺10mg、維生素E10mg于100ml圓底燒瓶，加入5ml無水乙醇超聲溶解，于45℃水浴中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)30min，形成均勻薄膜；向圓底燒瓶中加入5ml純化水常壓旋轉(zhuǎn)水化1h后置于冰水浴中超聲，并過0.2μm纖維濾膜整理，即得空白脂質(zhì)體。

鹽酸川芎嗪溶液的制備：精密稱取鹽酸川芎嗪20mg置于10ml容量瓶，加純化水定容，即得。

2.1 2G-50葡聚糖凝膠微柱的制備去一次性1ml注射器，棄去活塞和針頭，以適量脫脂棉填入管底，置13mm*100mm試管中，以3000r/min離心3min脫水，凝膠體積縮減，形成與管壁分離的凝膠柱，重復(fù)裝填，離心，至0.90～1.00ml刻度即可。

2.1.3 操作步驟精密量取0.1ml空白脂質(zhì)體與鹽酸川芎嗪溶液于葡聚糖凝膠微柱柱頂各三份，以3000r/min離心3min使樣品進入凝膠柱中，再分別于柱頂加入0.1ml純化水，以2000r/min離心3min，重復(fù)加水、離心10次，收集每次的洗脫液以甲醇定容至1ml，取0.5ml至于96孔酶標(biāo)板中，以甲醇：水為9：1為空白對照于290nm處測定吸光度，并繪制吸光度洗脫曲線（圖1）。

圖1

3.結(jié)果與討論

從圖1看出以2000r/min離心3min，經(jīng)7次洗脫才把脂質(zhì)體完全洗脫下來，但鹽酸川芎嗪也接近洗脫下來，空白脂質(zhì)體與鹽酸川芎嗪的分離度不足；以3000r/min離心3min3-4次足以把空白脂質(zhì)體完全洗脫，且第7次后鹽酸川芎嗪才被洗脫出，兩個樣品的分離度比較好；4000r/min離心3min的洗脫曲線則顯示出空白脂質(zhì)體一開始就被洗脫出來，但考慮到微柱裝在玻璃試管中離心，離心轉(zhuǎn)速不宜過大以免玻璃試管碎裂，最終選擇使用葡聚糖凝膠微柱以3000r/min離心3min為分離鹽酸川芎嗪脂質(zhì)體與游離鹽酸川芎嗪的實驗方法。本方法既能利用葡聚糖凝膠柱的洗脫性能，又可減少葡聚糖的用量，增加洗脫效率。，