耿 巖 封 靜 曾妃發(fā) 陸光生 任寶軍 羅振濤

（1南方醫(yī)科大學(xué)順德醫(yī)院＜佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院＞胃腸外科 廣東 佛山 528308)

（2徐聞縣第二人民醫(yī)院普外科 廣東 湛江 524100）

近年來(lái)，腹腔內(nèi)臟器的惡性腫瘤頻發(fā)。手術(shù)治療聯(lián)合輔助放、化療或內(nèi)分泌治療是當(dāng)前主要治療方案。但一些患者治療后不久即出現(xiàn)腹腔內(nèi)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。腹腔熱灌注化療(hyperthermic intraperitoneal chemotherapy，HIPEC)是新興的腹腔惡性腫瘤的輔助治療手段。目前臨床上常用的HIPEC藥物有順鉑、卡鉑、5-Fu等，但存在腎、耳、神經(jīng)、胃腸道等不良反應(yīng)顯著及耐藥等問(wèn)題。近來(lái)三氧化二砷（As2O3）在血液疾病及實(shí)體瘤治療取得了滿(mǎn)意療效，并用于腹腔灌注化療，但因其為劇毒藥物，安全性有待研究。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在探討As2O3在腹腔熱灌注治療中的安全有效性。

1.材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取SPF級(jí)健康成年SD大鼠，由南方醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)前均在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立

將凍存的Walker-256腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇后加入含10%新生小牛血清的RMPI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng),將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Walker-256腫瘤細(xì)胞用含0.25%tyrosine和0.02%EDTA的磷酸緩沖液收獲,臺(tái)盼藍(lán)染色進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),活細(xì)胞數(shù)＞95%,制成細(xì)胞濃度為1×105個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。注射器吸取1ml癌細(xì)胞懸液穿刺接種于SD大鼠腹腔內(nèi)，培養(yǎng)1周后，制成荷瘤大鼠。1周后B超檢查腹腔內(nèi)癌腫情況及是否產(chǎn)生癌性腹水。

1.3 動(dòng)物分組

將60只荷瘤大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只：對(duì)照組，As2O3濃度為4.0μmol/L、5.6μmol/L、7.8μmol/L、10.9μmol/L、15.4μmol/L五組。

1.4 三氧化二砷溶液配置

As2O3溶液,即亞砷酸注射液(哈爾濱伊達(dá)藥業(yè)公司產(chǎn)品,批號(hào)20001102)。將As2O3加入RPMll640培養(yǎng)液，配制成4.0、5.6、7.8、10.9、15.4μmol/L五個(gè)濃度備用，-20℃保存。

1.5 腹腔轉(zhuǎn)移癌術(shù)后大鼠模型建立

將喂養(yǎng)1周的荷瘤大鼠統(tǒng)一于全麻下行剖腹探查，檢查腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移癌灶的生長(zhǎng)及分布情況，再將不同濃度As2O3溶液加溫至43℃后用注射器分別抽取約20ml行單次腹腔熱灌注治療，時(shí)間為10min，隨后吸除處理液，沖洗凈腹腔后關(guān)腹。對(duì)照組熱灌注同溫度同體積的生理鹽水。對(duì)術(shù)后大鼠進(jìn)行7天重點(diǎn)監(jiān)測(cè)。觀(guān)察術(shù)后大鼠生長(zhǎng)情況及傷口變化并予以積極對(duì)癥處理。

1.6 數(shù)據(jù)采集

觀(guān)察術(shù)后反應(yīng)如：急性胃腸炎癥狀（惡心、嘔吐、腹瀉，糞便呈血性或米湯樣），神經(jīng)精神癥狀、休克等不良反應(yīng)情況,記錄死亡情況。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 不良反應(yīng)發(fā)生情況

術(shù)后7天內(nèi)大鼠不良反應(yīng)發(fā)生情況如下（表1），10.9和15.4μmol/L濃度組與4.0、5.6、7.8μmol/L濃度組相比不良反應(yīng)發(fā)生率顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。15.4μmol/L濃度組較10.9μmol/L濃度組不良反應(yīng)發(fā)生率亦顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。

表1 不良反應(yīng)記錄表[n(%)]

2.2 死亡情況

各組大鼠死亡情況如下（表2），15.4μmol/L濃度組大鼠共死亡9例，死亡率較其它組顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。

表 2 死亡結(jié)果記錄表

3.討論

腹膜存在“血漿—腹膜屏障”，常規(guī)靜脈給藥難以達(dá)到有效的腹腔治療藥物濃度。大部分藥物進(jìn)入其他重要器官產(chǎn)生副作用[1]。隨著腹腔腫瘤治療研究的深入，在腹腔化療的基礎(chǔ)上結(jié)合溫?zé)岑煼ㄌ岢隽薍IPEC。保證化療藥物在腹腔內(nèi)持續(xù)高濃度聚集，并直接且高效的作用于腹膜癌結(jié)節(jié)及腹腔內(nèi)脫落的癌細(xì)胞[2]，效果得到醫(yī)學(xué)界的廣泛認(rèn)可。但化療藥物的選擇卻是個(gè)難題，有研究顯示As2O3對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用強(qiáng)于常用的HIPEC藥物，而不良反應(yīng)弱[3]。

As2O3是砒霜的主要成份，近年來(lái)As2O3在血液系統(tǒng)尤其是急性早幼粒細(xì)胞性白血病的治療取得了滿(mǎn)意療效，并且對(duì)胃癌、肝癌、結(jié)腸癌等亦具有良好的抗癌效果。不少體外研究表明As2O3對(duì)治療實(shí)體腫瘤效果與劑量正相關(guān)。提高藥物治療濃度可以顯著提高對(duì)腫瘤的殺傷作用，但同時(shí)亦會(huì)產(chǎn)生毒副作用。例如心臟毒效應(yīng)、肝臟毒性、體液潴留、消化道癥狀、皮疹等，雖然停藥可恢復(fù)，但仍嚴(yán)重影響患者緩解率[4-6]。此外，部分患者會(huì)出現(xiàn)高白細(xì)胞血癥、彌漫性血管內(nèi)凝血、室性心動(dòng)過(guò)速、心源性猝死等重度不良反應(yīng)[7-8]。

目前針對(duì)As2O3經(jīng)HIPEC方式給藥，對(duì)全身或局部組織的毒副作用及As2O3熱灌注的最大安全劑量國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)明確報(bào)道。本研究分別用4.0、5.6、7.8、10.9、15.4μmol/L五個(gè)濃度As2O3腹腔熱灌注治療，觀(guān)察了大鼠的毒副反應(yīng)及死亡情況，發(fā)現(xiàn)As2O3濃度在7.8μmol/L時(shí)未有明顯的不良反應(yīng)，As2O3濃度在10.9μmol/L時(shí)不良反應(yīng)顯著增高，提示最大安全劑量可能在7.8～10.9μmol/L之間，但由于研究樣本量太少，不足以得出確切結(jié)論，仍需大樣本進(jìn)一步佐證，藥物濃度也需進(jìn)一步細(xì)化。