靳紅娟，葉 鋒，劉麗婭，陳雅璐，張 悅，陳澤輝，李欣宇，谷文喜，鐘 旗，姚 剛 ，王 延

（1. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052；2. 新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆烏魯木齊 830000）

多浪羊是新疆的一個優(yōu)良肉脂兼用型地方綿羊品種，又稱麥蓋提羊，由新疆南疆地區(qū)維吾爾族人民長期選育而成，是新疆重點保護并大力推廣的優(yōu)良地方種肉羊品種[1]，具有性清溫順、體格大、生長發(fā)育快、產(chǎn)肉率高、毛質(zhì)較好、繁殖力強、遺傳性穩(wěn)定等優(yōu)點，目前主要以圈舍飼養(yǎng)或戈壁灘放牧的方式養(yǎng)殖[2]。

目前，由于牲畜流通加速，而疫病防疫、檢疫、凈化等措施跟不上，造成新疆各地區(qū)布魯氏菌病疫情較為嚴(yán)重[3-4]。盡管現(xiàn)有動物布魯氏菌病疫苗有一些不足之處，但疫苗免疫對布魯氏菌病的防控還是發(fā)揮了重大作用。本試驗通過探索多浪羊?qū)Σ剪斒暇钜呙纾∕5）能否產(chǎn)生良好的免疫反應(yīng)以及免疫后的抗體消長規(guī)律，為多浪羊布魯氏菌病免疫以及免疫后自然感染和免疫的區(qū)分提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品來源 新疆南疆地區(qū)某行政村未免疫布魯氏菌疫苗的多浪羊100只，全部采血；免疫后30、90、180 d，各隨機采集30只羊全血，分離血清，4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試劑 布魯氏菌活疫苗（M5）：購自新疆天康生物技術(shù)股份有限公司；羊血清稀釋液（0.5%石碳酸、10% NaCl）：自行配制；布魯氏菌虎紅凝集抗原、布魯氏菌試管凝集抗原：購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；布魯氏菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清：購自黑龍江省生物制品一廠。

1.1.3 器材 潔凈玻璃板、微量移液器、滅菌移液器槍頭、計時器、玻璃試管、試管架、溫箱（37℃）。

1.2 方法

1.2.1 免疫 按照布魯氏菌活疫苗（M5）使用說明書進(jìn)行。

1.2.2 檢測方法 采用RBT、SAT方法，嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》（GB/T 18646—2018）進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 免疫前血清學(xué)檢測

對100只多浪羊免疫前血清進(jìn)行布魯氏菌檢測，用RBT初篩出1份陽性血清，后用SAT確診為陰性，表明100份多浪羊免疫前血清全為陰性。

2.2 免疫后抗體檢測

2.2.1 RBT檢測 對免疫后隨機采集的血清樣品，應(yīng)用RBT進(jìn)行抗體檢測，發(fā)現(xiàn)免疫30 d后，80.00%的樣品檢測到免疫抗體，90 d后只有13.33%還能檢測到免疫抗體，180 d后所有樣品均為陰性（表1）。

表1 多浪羊免疫布魯氏菌活疫苗（M5）后的RBT抗體檢測結(jié)果

2.2.2 SAT檢測 對免疫后隨機采集的血清樣品，應(yīng)用SAT進(jìn)行抗體檢測，發(fā)現(xiàn)免疫30 d后，73.33%的樣品檢測到免疫抗體，且抗體滴度基本保持在1:200，90 d后只有13.33%還能檢測到免疫抗體，且大多數(shù)多浪羊抗體滴度開始下降或消失，180 d后所有樣品均為陰性（表2、表3）。

表2 多浪羊免疫布魯氏菌活疫苗（M5）后的SAT抗體檢測結(jié)果

表3 多浪羊免疫布魯氏菌活疫苗（M5）后的SAT抗體滴度

3 分析與討論

試驗結(jié)果表明，布魯氏菌活疫苗（M5）皮下注射免疫后，多浪羊免疫前后的血清抗體出現(xiàn)了明顯變化。免疫30 d后，大多數(shù)多浪羊產(chǎn)生了免疫抗體，且抗體滴度基本保持在1:200，這說明布魯氏菌活疫苗（M5）可以作為多浪羊布魯氏菌病免疫的首選疫苗。但90 d后多浪羊免疫抗體水平已大幅下降，大多數(shù)多浪羊體內(nèi)抗體滴度明顯下降甚至消失，180 d后已無抗體存在，由此初步認(rèn)為多浪羊的布魯氏菌活疫苗（M5）免疫抗體持續(xù)期為180 d。

布魯氏菌活疫苗（M5）免疫180 d后，可以對布魯氏菌病可疑羊群使用RBT初篩、SAT確診的方法，進(jìn)行免疫羊群中感染羊的檢測，這樣可以解決感染與免疫無法有效區(qū)分的問題。

布魯氏菌是細(xì)胞內(nèi)寄生菌。宿主感染后會引起細(xì)胞免疫和體液免疫。細(xì)胞免疫是清除細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌最有效的防御反應(yīng)[5]。布魯氏菌病的免疫保護主要體現(xiàn)在細(xì)胞免疫水平，免疫抗體水平的檢測只是對疫苗是否免疫成功的一個反應(yīng)指標(biāo)，因此抗體水平與畜群機體保護力不呈正相關(guān)。

本試驗用布魯氏菌活疫苗（M5）免疫多浪羊30 d后，經(jīng)RBT檢測，發(fā)現(xiàn)抗體轉(zhuǎn)陽率為80.00%。據(jù)李建玲等[6]、何彥春等[7]報道，布魯氏菌活疫苗（M5）免疫30 d后，經(jīng)RBT檢測抗體轉(zhuǎn)陽率為100%，與本試驗結(jié)果不一致。這可能與羊品種和地域不同有關(guān)，需要進(jìn)一步驗證。本試驗沒有進(jìn)行攻毒保護性試驗，血清抗體效價與實際免疫效果是否一致，有待于進(jìn)一步研究。