郭金鳳 王春霞 孟茜 徐燦

宮頸癌屬于比較常見(jiàn)的一種惡性腫瘤疾病，對(duì)婦女生命安全會(huì)造成嚴(yán)重威脅，需加強(qiáng)重視。從相關(guān)研究報(bào)道中看出，近幾年我國(guó)宮頸癌及其癌前病變發(fā)生率有所升高，且呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)，其中高危型子宮頸人乳頭瘤病毒（HPV）感染且持續(xù)反復(fù)發(fā)作，當(dāng)屬造成婦女宮頸癌與子宮頸上皮內(nèi)瘤樣變的主要因素[1]?；诖?，針對(duì)健康體檢婦女積極做好HPV感染篩查十分關(guān)鍵，一旦檢出HPV感染陽(yáng)性者，應(yīng)進(jìn)一步明確診斷，積極處理，避免病情惡化，進(jìn)展為子宮頸癌[2]。宮頸癌初篩在婦科健康管理工作中成為重點(diǎn)，盡早發(fā)現(xiàn)與治療癌前病變，對(duì)于避免宮頸癌發(fā)生十分關(guān)鍵[3]。為了進(jìn)一步探討健康體檢婦女子宮頸人乳頭瘤病毒感染情況，以便為臨床診治提供依據(jù)，濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就2015年1月—2017年12月健康體檢婦女檢出的80例HPV感染患者進(jìn)行了回顧性分析，將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年1月—2017年12月健康體檢婦女1 000多例，共計(jì)檢出子宮頸人乳頭瘤病毒感染80例，將這80例作為研究對(duì)象，入組對(duì)象有完整資料，年齡18～60歲，愿意配合研究，且均有性生活史1年以上，近期3個(gè)月無(wú)宮頸細(xì)胞學(xué)檢查與陰道鏡檢查，也無(wú)全宮切除術(shù)史或?qū)m頸錐切史，近期3個(gè)月未應(yīng)用性激素，同時(shí)排除妊娠期或哺乳期、不愿意配合研究、近期應(yīng)用性激素及影響相關(guān)結(jié)果的檢查患者。80例患者中年齡最小18歲、最大60歲，均值（38.1±2.2）歲；未婚19例、已婚61例。

1.2 方法

所有對(duì)象均接受宮頸細(xì)胞學(xué)檢查，嚴(yán)格按照HPV21分型檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作執(zhí)行，具體如下：

1.2.1 樣本采集 收集女性宮頸脫落細(xì)胞，宮頸刷伸入宮頸口，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈，慢慢取出宮頸刷，放入有細(xì)胞保存液的樣本管，刷頭留于樣本管，取樣后將蓋子蓋上。

1.2.2 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備 從保存在-20℃試劑盒中取出PCR 預(yù)混液（Power SYBR Green PCR MasterMix），置于4℃避光緩慢解凍，顛倒混合均勻，經(jīng)離心處理。把Taq酶加入PCR 預(yù)混液中，潤(rùn)洗2次，確保Taq酶盡量多的進(jìn)入PCR 預(yù)混液。充分震蕩混勻，經(jīng)離心處理后備用。

1.2.3 提取宮頸脫落細(xì)胞DNA 按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行宮頸脫落細(xì)胞DNA提取。提取的DNA純度（A260/280）應(yīng)達(dá)到1.7～2.0，且DNA的濃度≥3 ng/μL。

1.2.4 PCR擴(kuò)增 將雜交檢測(cè)試劑溫度平衡至室溫，雜交液預(yù)熱45℃，觀察NBT/BCIP當(dāng)中有無(wú)存在紫色或者藍(lán)色沉淀，若出現(xiàn)沉淀需更換并準(zhǔn)備新鮮的NBT/BCIP溶液；同時(shí)觀察溶液B當(dāng)中是否存在沉淀，若存在沉淀則加熱至45 ℃將沉淀溶解后平衡溫度至室溫，擴(kuò)增儀器升溫至45 ℃；反應(yīng)室內(nèi)充滿蒸餾水，置入金屬多孔板并排除板上面水分，排空氣體并檢查多孔板和反應(yīng)室是否保持聯(lián)通；雜交膜置于塑料膜對(duì)應(yīng)孔，PCR擴(kuò)增操作按儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.5 雜交 將PCR產(chǎn)物預(yù)熱后，立即進(jìn)行冰水浴2 min，確保PCR產(chǎn)物保持單鏈結(jié)構(gòu)。將雜交液加入到雜交孔中，進(jìn)行預(yù)熱處理至45℃，再泵出，保證孔內(nèi)無(wú)氣泡；雜交后應(yīng)用45℃的雜交液沖洗塑料膜3次，保證將未雜交的部分標(biāo)本排出。清洗過(guò)程保證將多余的酶標(biāo)液以及顯色液清洗干凈，以避免檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究應(yīng)用SPSS 22.0處理數(shù)據(jù)，采取百分比（%）表示計(jì)數(shù)資料，實(shí)施χ2檢驗(yàn)， P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)不同年齡段婦女HPV檢出情況比較分析

從年齡段HPV感染檢出率來(lái)看，80例患者中25～34歲最多，其次為35～44歲、＞44歲、＜25歲，且25～34歲檢出率明顯高于＜25歲，數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)不同HPV感染分型陽(yáng)性率結(jié)果分析

從HPV感染分型陽(yáng)性率結(jié)果分析來(lái)看，HR型有48例（以HR16、33、52、58型為主）、LR型有22例（以LR6、11、42型為主）、其他10例，數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表1 比較分析不同年齡段婦女HPV檢出率情況

表2 本組不同HPV感染分型陽(yáng)性率結(jié)果情況

表3 不同年齡段HPV感染分型結(jié)果對(duì)比分析

2.3 不同年齡段HPV感染分型結(jié)果比較分析

從不同年齡段HPV感染分型檢出結(jié)果來(lái)看，不同年齡段檢出分型結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＞0.05），數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

3 討論

宮頸癌作為婦科最為常見(jiàn)的一種惡性腫瘤疾病，其發(fā)病率在婦科惡性腫瘤疾病中僅次于乳腺癌，高居第二位[4]。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)顯示，全球每年新發(fā)宮頸癌病例接近50萬(wàn)，而死亡例數(shù)則高達(dá)27萬(wàn)[5]。我國(guó)作為人口大國(guó)，每年因?qū)m頸癌死亡的病例在全球占了10%，而且呈現(xiàn)逐年升高趨勢(shì)[6]，需加強(qiáng)重視。隨著相關(guān)研究增多，在一些研究中證實(shí)宮頸癌主要的高危因素之一為子宮頸人乳頭瘤病毒感染，大約有90%以上宮頸癌患者出現(xiàn)HPV感染情況[7]。HPV類型較多，目前已知的亞型高達(dá)120種，而且16、18、31等亞型在50%以上宮頸癌患者中能檢出，成為宮頸癌發(fā)病最為主要的亞型因子[8-12]。此外，不同的地區(qū)，HPV感染類型也可能不同[13-15]，這就需要具體地區(qū)具體對(duì)待。

為了進(jìn)一步探討健康體檢婦女子宮頸人乳頭瘤病毒感染的情況，以便為臨床提供依據(jù)[16-18]，我院就2015—2017年間檢出的80例子宮頸人乳頭瘤病毒感染患者實(shí)施了回顧性分析。在本次研究中所有入選對(duì)象最終明確診斷，從年齡段HPV感染檢出率來(lái)看，80例患者中25～34歲最多，其次為35～44歲、＞44歲、＜25歲，且25-34歲檢出率明顯高于＜25歲；從HPV感染分型陽(yáng)性率結(jié)果分析來(lái)看，HR型有48例（以HR16、33、52、58型為主）、LR型有22例（以LR6、11、42型為主）、其他10例；從不同年齡段HPV感染分型檢出結(jié)果來(lái)看，不同年齡段檢出分型結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＞0.05）。盡管宮頸癌組織中99.7%可能檢出高危型HPV，但并非所有HPV亞型都可能造成宮頸癌發(fā)生，而6型與11型通常被認(rèn)為是誘發(fā)生殖器尖銳濕疣主要危險(xiǎn)因素，傳染性高，但極少會(huì)誘發(fā)癌變。結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)及臨床實(shí)踐，一般情況下HPV高危亞型16、33、58、52、31、35等可能和宮頸癌密切相關(guān)，在本次研究中也有驗(yàn)證。此外，在本次研究中看出，HPV感染有一個(gè)高發(fā)年齡段，在年齡段之外的發(fā)病率不高，但依舊不容忽視[19-21]。25-34歲在本次研究中屬于高發(fā)年齡段之首，其次為35～44歲，為此應(yīng)做好育齡期女性的健康體檢，積極做好HPV感染檢查，盡早檢出HPV感染相關(guān)疾病，針對(duì)性治療。

綜上所述，健康體檢婦女子宮頸人乳頭瘤病毒感染較多，且年齡25～34歲中檢出率較高，常見(jiàn)類型為高危型HPV-16、33、52、58型，為此應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)30歲左右婦女特異性高危HPV DNA檢測(cè)，及時(shí)篩查出HPV感染病例，并積極處理，才能更好地預(yù)防子宮頸癌發(fā)生。