申 彬,楊澤華

(山西醫(yī)科大學第一醫(yī)院檢驗科,太原 030001;*通訊作者,E-mail:zehuay026@163.com)

丙氨酸氨基轉移酶(ALT)在人體肝臟中含量最多、活性最高,輕微的肝細胞受損,ALT活性可增高1倍,是肝功能受損最靈敏的指標之一,各種肝臟疾病均可引起ALT的升高,臨床上主要用于肝臟疾病的診斷。目前ALT的檢測是在自動生化分析儀上,時常面臨著同一份標本在同一實驗室內不同檢測系統(tǒng)間進行檢測時出現檢驗結果不一致的現狀,不同的臨床化學實驗室的檢驗差異就更大[1],而且酶學檢測對反應條件具有依賴性,使不同的檢測方法間的結果可比性差[2],從而使檢驗結果具有不確定性。ISO/15189(醫(yī)學實驗室-質量和能力的專用要求)[3]對檢驗結果的溯源性和可比性提出了明確要求,強調方法學比較試驗(比對試驗)是實現準確度溯源和病人標本檢驗結果可比性的重要途徑。國際臨床化學與實驗醫(yī)學聯(lián)盟(IFCC)于2002年曾發(fā)表7個系列性文件,針對包括ALT在內的參考測定程序,提出了參考測量系統(tǒng),并希望所有試劑廠商及實驗室向其靠攏,以實現檢測方法的一致性[4]。本實驗依據美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)EP9-2A文件和IFCC提出的ALT參考方法,以參考方法作為比較方法,Beckman DxC800作為實驗方法,對測定結果進行比對和偏倚分析,并判斷其臨床可接受性。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 SHIMADZU UV-2450紫外分光光度計、SHIMADZU-TCC比色杯恒溫電子控制裝置、恒溫水浴箱、SHIMADZU電子天平、pH計、電子溫度計、Finnpipette移液器和容量瓶、各種高精密度玻璃器皿;Beckman DxC 800生化分析儀。

1.1.2 試劑 參考方法按照國際臨床化學與檢驗醫(yī)學聯(lián)合會(IFCC)推薦的丙氨酸氨基轉移酶參考測量程序配制試劑[5]。還原型-β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸二鈉鹽(NADH)、乳酸脫氫酶(LDH)均購自Sigma公司,氯化鈉(NaCl)、疊氮鈉(NaN3)、氫氧化鈉(NaOH)、鹽酸(HCl)購自北京化工;三羥甲基氨基甲烷(Tris)、L-丙氨酸、α-酮戊二酸二鈉鹽、牛血清白蛋白、丙酮酸鈉購自上海生工。Beckman DxC 800生化分析儀采用貝克曼庫爾特公司配套ALT(無磷酸吡哆醛)診斷試劑、校準品及質量控制品。

1.1.3 標本來源 收集本院患者新鮮血清共40份,編號為1-40,血清ALT濃度按照NCCLS EP9-2A文件[6]中方法比對的實驗數據分布建議收集,標本無脂血、溶血、黃疸。

1.2 方法

1.2.1 參考方法的建立 按照IFCC推薦的參考測量程序建立ALT的參考方法[7](為不加磷酸吡哆醛方法)。

1.2.2 方法的選擇 以參考方法作為比較方法(X),Beckman DxC 800檢測系統(tǒng)作為實驗方法(Y)。

1.2.3 方法學比較 每天測定8份新鮮患者血清,隨機編號1,2,3,4,5,6,7,8,每份血清分別用比較方法(X)和實驗方法(Y)測定,每種方法重復測定2次,第1次測定順序為1-8,第2次測定順序為8-1,連續(xù)測定5 d,共得到40組數據。

1.3 數據的統(tǒng)計與處理

1.3.2 相關性和回歸分析 EP9-2A提出,r>0.975或r2>0.95說明測定范圍合適,回歸方程的截距和斜率可靠。

1.3.3 偏倚評估和可比性評價 將ALT給定的醫(yī)學決定水平濃度帶入回歸方程,計算系統(tǒng)誤差(SE)和相對偏差(SE%),SE%≤1/2CLIA’88允許總誤差(TEa)屬臨床可接受水平。

2 結果

2.1 方法內重復值的離群點檢驗

2.2 方法間離群點檢驗

2.3 回歸分析及r2檢查

以X和Y進行相關回歸分析,得到回歸方程Y=1.005X+0.310 9,r2=0.999 8>0.95,表明X分布范圍合適,回歸方程的斜率和截距可靠。

圖1 ALT雙份值均值的散點圖Figure 1 Scatter plots of the mean value with double of ALT

2.4 兩個系統(tǒng)的偏倚評估和可接受性評價

將不同濃度的醫(yī)學決定水平(Xc)帶入回歸方程,計算偏倚和相對偏倚,可見所有濃度的相對偏倚均為臨床可接受,結果見表1。

圖2 ALT雙份值均值的偏倚圖Figure 2 Bias plots of the mean value with double of ALT

表1ALT在醫(yī)學決定水平處(Xc)的可接受性評價

Table1EvaluationofALTacceptabilityatthemedicallydeterminedlevel(Xc)

Xc(U/L)Y估計值(U/L)SE%(%)1/2CLIA’88(%)2020.42.086060.61.08300301.80.68

3 討論

圖1散點圖中,在標度上的差別可以用來決定非線性關系,在全部測定范圍內,檢查比較方法(X)和實驗方法(Y)的數據圖是否有線性關系,可得測定ALT的結果在兩方法間呈良好的直線相關,可以進行下一步檢驗。圖2的偏倚圖中,在標度上的差別可以用來決定非線性關系,在全部測定范圍內,比較方法的均值和兩方法的均值之差分布在X=0中線附近。比較方法(X)的測定范圍可以用相關系數r做估計,如果r≥0.975(或r2≥0.95)則可以認為比較方法(X)分布范圍合適,以上得到數據r2=0.999 8>0.95,表明比較方法(X)的分布范圍合適,回歸方程的斜率和截距可靠[8]。ALT在3個醫(yī)學決定水平Xc處的估計值、允許誤差見表1,可以看出估計值在允許范圍內均符合要求。本研究采用的允許誤差判斷標準為1/2CLIA’88,是中國衛(wèi)生部臨床檢驗中心推薦并使用的標準[9]。由于CLIA’88應用范圍比較廣泛,是室間質量評價的標準之一,其體現的是可接受方法誤差的總誤差(隨機誤差+系 統(tǒng)誤差)的最低水平,而且EP9-2A文件提供的方法只是從引入系統(tǒng)誤差大小上考慮,并沒有將隨機誤差考慮在內,所以本實驗將CLIA’88允許誤差的1/2作為方法比對檢測系統(tǒng)的結果系統(tǒng)誤差的允許限值,以使其結果更有說服力[10]。結論得出,ALT在Beckman DxC 800檢測系統(tǒng)的測定結果在比較范圍內與參考方法(X)具有可比性。臨床可接受性能的評價未超過1/2CLIA’88規(guī)定允許誤差,說明可比性符合臨床要求。在不同的實驗室之間,或在同一實驗室不同儀器之間所存在的差別,可以通過與參考方法進行方法學比對研究,因為參考方法具有溯源性,這樣才能保證檢測結果的準確性與可靠性,從而為臨床提供可靠的檢測結果,滿足臨床診斷的需要。