李 春 趙東興 張建春 李 芹

(云南省紅河熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所 云南河口661300)

香蕉根結(jié)線蟲(chóng)?。∕eloidogyne incognita）是由根結(jié)線蟲(chóng)屬（Meloidogynespp.）的線蟲(chóng)引起的，是危害香蕉的重要病害之一，各香蕉種植區(qū)均有發(fā)生，發(fā)病率一般為20%～30%，嚴(yán)重的達(dá)60%以上。香蕉被線蟲(chóng)危害后植株表現(xiàn)為葉黃、矮小，早衰，抽蕾困難，產(chǎn)量減少，有些蕉園由于根線蟲(chóng)的影響，有一半以上的香蕉樹(shù)不能結(jié)出有商品價(jià)值的果實(shí)［1-5］。

目前，對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的防治研究主要涉及化學(xué)防治［6-9］、生物防治［10-11］和抗病品種選育［12］等方面，而生產(chǎn)上多以化學(xué)防治為主，化學(xué)防治香蕉根結(jié)線蟲(chóng)雖能取得較好效果，但需使用大量化學(xué)農(nóng)藥，且殺線劑多為高毒、高殘留藥劑，在殺死土壤中植物寄生線蟲(chóng)的同時(shí)也殺死了有益生物，嚴(yán)重破壞生態(tài)平衡，對(duì)環(huán)境和人體造成很大的危害。植物源殺線蟲(chóng)劑具有分解快、殘留低、污染少、毒性小等特點(diǎn)，因此，尋找有效的植物或中草藥提取物來(lái)防治香蕉根結(jié)線蟲(chóng)，在根結(jié)線蟲(chóng)綜合防治中，具有廣闊發(fā)展前景。

本研究選取艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草等12 種中草藥，利用丙酮和水進(jìn)行提取，研究了這些中藥材提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺作用，以期找出一種對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)有較強(qiáng)毒殺活性的植物，為香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的防治提供新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中草藥材料

供試的12 種中草藥購(gòu)于中藥市場(chǎng)，其名稱、部位及產(chǎn)地見(jiàn)表1。

表1 12種供試中草藥名稱、部位及產(chǎn)地

1.1.2 儀器與試劑

⑴儀器：顯微鏡（Leica DM5000B），植物搗碎機(jī)（FK-A），200、300、500目標(biāo)準(zhǔn)分樣篩。

⑵試劑：分析純丙酮、蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 供試線蟲(chóng)的獲取

試驗(yàn)用香蕉根采自于云南省紅河熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所的香蕉種植基地，將采集的香蕉根洗凈，收集帶根結(jié)病根，將病根剪成0.5～1.0 cm 大小，置于植物粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)濾，收集500目篩子中的線蟲(chóng)卵，配成線蟲(chóng)300 個(gè)/mL 的根結(jié)線蟲(chóng)卵懸浮液。

1.2.2 中草藥提取液的制備

將供試中草藥置于烘箱內(nèi)在60℃下烘干，粉碎至40 目，貯于黑色塑料袋中，備用。稱取各藥材15 g 與200 mL 具塞三角瓶中，加入150 mL 丙酮和水浸泡過(guò)夜，于震蕩機(jī)上震蕩提取2 h，過(guò)濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮只近干，放置在4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 二齡線蟲(chóng)的培養(yǎng)

將采集的香蕉根洗凈，收集帶根結(jié)病根，將病根剪成0.5～1.0 cm 大小，置于植物粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)濾，收集500目篩子中的卵，放于26℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6 d，得到大量的二齡幼蟲(chóng)（J2）。

1.2.4 中草藥提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺作用

稱取1.2 制備的中草藥提取物0.5 g，用5 mL溶劑溶解后用蒸餾水定容至100 mL，得5 mg/mL 溶液。分別量取2 mL 稀釋液加入直徑3.5 cm 的培養(yǎng)皿中，隨后加入60 條“1.2.3”培養(yǎng)的二齡線蟲(chóng)，每處理重復(fù)3 次，并以5%丙酮水溶液和蒸餾水液為對(duì)照，放置于26℃培養(yǎng)箱中，分別于24、48、72 h 后于顯微鏡下觀察線蟲(chóng)死亡數(shù)量，按Abbott公式計(jì)算校正死亡率。線蟲(chóng)死亡計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)參考文艷華等［13］的方法，即線蟲(chóng)呈僵直不動(dòng)為死蟲(chóng)，線蟲(chóng)呈彎曲蠕動(dòng)狀態(tài)為活蟲(chóng)，各中藥材對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性強(qiáng)弱參照文獻(xiàn)［14］的方法進(jìn)行分級(jí)。

線蟲(chóng)死亡率＝線蟲(chóng)死亡數(shù)/供試線蟲(chóng)數(shù)×100

校正死亡率＝（處理組線蟲(chóng)死亡率-對(duì)照組線蟲(chóng)死亡率）/（1-對(duì)照組線蟲(chóng)死亡率）×100

2 結(jié)果與分析

2.1 12種中草藥丙酮提取物對(duì)線蟲(chóng)的毒殺效果

12 種中草藥丙酮提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺效果見(jiàn)表2。

表2 丙酮提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺效果

從表2中的數(shù)據(jù)可看出，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細(xì)辛和紫莖澤蘭的丙酮提取物在24 h 內(nèi)對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)有較強(qiáng)的毒殺活性，線蟲(chóng)校正死亡率分別為70.33%、78.96%、86.67%、81.68%、76.84%和79.44%，其殺線蟲(chóng)活性強(qiáng)度均為“+++”以上，顯著高于其他藥材的毒殺活性；穿心蓮、川芎、馬齒筧、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲(chóng)活性中等，處理24 h 校正死亡率在35.09%～53.86%；黃芪提取物的殺線蟲(chóng)活性最弱，處理24 h校正死亡率為29.82%。

隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，各中草藥丙酮提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性均有所增加。處理48 h 艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細(xì)辛和紫莖澤蘭丙酮提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性增加，線蟲(chóng)的校正死亡率分別為87.32%、90.34%、100%、90.91%、92.06%和91.13%，殺線蟲(chóng)活性強(qiáng)度均為“++++”；穿心蓮、川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲(chóng)活性中等，處理48 h 校正死亡率在38.85%～69.38%。72 h 后，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細(xì)辛和紫莖澤蘭丙酮提取物的處理線蟲(chóng)校正死亡率達(dá)到94.98%以上，殺線蟲(chóng)活性強(qiáng)度均為“++++”；川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲(chóng)活性中等，處理72 h 線蟲(chóng)校正死亡率在47.09%～64.04%；處理72 h，穿心蓮丙酮提取物的殺線蟲(chóng)活性較強(qiáng)，線蟲(chóng)校正死亡率為82.08%，活性強(qiáng)度為“++++”。

2.2 12種中草藥水提取物對(duì)線蟲(chóng)的毒殺效果

12 種中草藥水提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺效果如表3所示。

表3數(shù)據(jù)顯示，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細(xì)辛和紫莖澤蘭水提取物在24 h 內(nèi)對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)有較強(qiáng)的毒殺活性，線蟲(chóng)校正死亡率分 別 為 60.18%、 56.42%、 71.94%、 72.62%、64.56%和52.98%，其殺線蟲(chóng)活性強(qiáng)度均為“+++”；穿心蓮、川芎、銀杏葉、葉下珠、馬齒筧、黃芪、細(xì)辛提取物的殺線蟲(chóng)活性較弱，處理24 h 校正死亡率均低于30%。

表3 水提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺效果

隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，各中藥材水提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性均有所增加。處理48 h 艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細(xì)辛和紫莖澤蘭水提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性增加，線蟲(chóng)的校正死亡率分別為75.91%、68.13%、86.56%、82.98%、79.53 和71.91%，殺線蟲(chóng)活性強(qiáng)度均為“+++”以上；穿心蓮水提取物的殺線蟲(chóng)活性中等，處理48 h 校正死亡率分別為54.72%；川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲(chóng)活性依然較弱，處理48 h 校正死亡率在26.41%～40.51%。

處理72 h 艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細(xì)辛和紫莖澤蘭水提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性進(jìn)一步增加，線蟲(chóng)的校正死亡率分別為

86.36%、 80.16%、 95.43%、 89.68%、 86.87%、82.18%和91.23%，殺線蟲(chóng)活性強(qiáng)度為“++++”；穿心蓮水提取物的殺線蟲(chóng)活性為中等活性，活性強(qiáng)度達(dá)到“+++”以上，處理72 h 校正死亡率為62.14%；川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠、細(xì)辛提取物的殺線蟲(chóng)活性依然較弱，處理72 h 校正死亡率在32.62%～47.05%。

3 討論與結(jié)論

與化學(xué)農(nóng)藥相比，低毒、低殘留、可降解的植物源殺線劑越來(lái)越受到人們的重視。據(jù)報(bào)道［15-18］，苦豆子、紫莖澤蘭、牛心樸子葉、細(xì)辛等植物對(duì)南方根結(jié)線蟲(chóng)有較強(qiáng)的毒殺活性，本研究的12 種中草藥中艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細(xì)辛和紫莖澤蘭的丙酮和水提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性較強(qiáng)，強(qiáng)度均為“+++”以上，而穿心蓮、川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠的毒殺活性較弱，且隨著處理時(shí)間增長(zhǎng)，12 種中草藥的丙酮、水提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺作用均呈增強(qiáng)趨勢(shì)。處理24 h 后，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細(xì)辛和紫莖澤蘭的丙酮和水提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺強(qiáng)度均為“+++”以上；48h 后，6 種中草藥丙酮提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性上升到強(qiáng)活性，即“++++”，而只有苦豆子、牛心樸子草的水提物的毒殺活性上升到強(qiáng)活性；處理72 h后，這6種中草藥水提物的毒殺活性均上升到強(qiáng)活性。

另外，同一種中草藥丙酮提取物對(duì)香蕉根結(jié)線蟲(chóng)的毒殺活性大于水提取物的毒殺活性，這可能是提取溶劑極性不同，對(duì)中草藥的提取效果不同，丙酮極性較弱，或許能從中草藥中提取出對(duì)線蟲(chóng)有較強(qiáng)活性的物質(zhì)，這有待于進(jìn)行進(jìn)一步的研究證實(shí)。