張春霞

(青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，青海 湟源 812100)

本賽項(xiàng)由學(xué)校、行業(yè)、企業(yè)共同設(shè)立。通過采取全國統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行技能競賽，有效促進(jìn)全國高職院校畜牧獸醫(yī)類專業(yè)之間的交流，引領(lǐng)專業(yè)建設(shè)與課程改革；能進(jìn)一步深化學(xué)校與企業(yè)之間的合作交流，為專業(yè)建設(shè)和課程改革增添了新的思路，同時(shí)通過本賽項(xiàng)的資源轉(zhuǎn)化，可以向社會(huì)展示畜牧獸醫(yī)類專業(yè)的師生風(fēng)采和建設(shè)成果，提高專業(yè)的教學(xué)水平，提升人才培養(yǎng)質(zhì)量[1,2]。

1 比賽對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)

雞新城疫抗體水平測(cè)定技能大賽賽項(xiàng)是以教育部頒布的國家職業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物疫病防治員》（高級(jí)）為基礎(chǔ)，以國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16550-2008[3]《雞新城疫診斷技術(shù)》為依據(jù)，嚴(yán)格按照大賽組委會(huì)賽項(xiàng)規(guī)定[4]，進(jìn)行結(jié)果判定和評(píng)分。

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器的準(zhǔn)備

以2018年全國職業(yè)院校技能大賽賽項(xiàng)規(guī)程為例。實(shí)驗(yàn)器材的準(zhǔn)備占實(shí)驗(yàn)總成績的8%。主要要求參賽選手按照操作規(guī)程進(jìn)行器材準(zhǔn)備，要求器材選擇正確、擺放有序，物品標(biāo)識(shí)合理，桌面整潔等。由賽組委會(huì)提供的項(xiàng)目競賽用儀器、設(shè)備與材料共計(jì)34項(xiàng)。但在實(shí)際操作過程中并不是所有的全部選用，選擇儀器設(shè)備要以“使用合理的前提下夠用”為原則。在儀器與材料準(zhǔn)備時(shí)要檢查清點(diǎn)，并要做好清晰合理的標(biāo)識(shí)。使用的燒杯、離心管、離心管蓋和血凝板都要進(jìn)行標(biāo)識(shí)。實(shí)驗(yàn)器材的擺放要嚴(yán)格遵守分區(qū)擺放的原則，明確污染區(qū)和潔凈區(qū)各自物品的數(shù)量和用途。擺放完畢盡可能的不要去來回挪動(dòng)器材，盡可能的做好各區(qū)域之間的互不干擾。該賽項(xiàng)中主要用到的儀器有不同規(guī)格的精準(zhǔn)微量移液器及相應(yīng)的配套材料、離心機(jī)、托盤天平、微型震蕩器，用到的實(shí)驗(yàn)材料及動(dòng)物有非免疫公雞、禽用采血器、96孔微型反應(yīng)板、燒杯等。對(duì)儀器的操作和使用要掌握其工作的原理，尤其要做好規(guī)范操作和合理使用。

1.2 1%雞紅細(xì)胞懸液配制

1%雞紅細(xì)胞懸液的配置情況直接影響到實(shí)驗(yàn)的進(jìn)度和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。而配置過程中采血是否成功是最為關(guān)鍵的。在配置1%雞紅細(xì)胞懸液時(shí)，首先采血前要做好相關(guān)準(zhǔn)備工作，采血器的正確選擇、雞的正確保定、3.8%枸櫞酸鈉的量、采血時(shí)的手法、采血的量、采血部位的處理以及后期對(duì)使用器材的正確處理等都要嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)定。其次，要控制好倍比稀釋液（生理鹽水）的量，以及添加稀釋液后的配平，第一次離心時(shí)轉(zhuǎn)速和時(shí)間的選則、離心完成后是否完全吸取白細(xì)胞層和血小板層。最后，在離心管中紅細(xì)胞吸取的位置、吸取的量，以及吸取后洗滌的次數(shù)等都按照參賽規(guī)程的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作。對(duì)參賽規(guī)定和國標(biāo)要求不夠明確的，多次的進(jìn)行嘗試性試驗(yàn)，并每次對(duì)比各種操作方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取最佳的操作方法，保證各項(xiàng)操作盡可能規(guī)范，提高配置的紅細(xì)胞濃度的準(zhǔn)確性。

1.3 血凝（HA）實(shí)驗(yàn)

取血凝反應(yīng)板，先對(duì)其進(jìn)行標(biāo)注，尤其標(biāo)明該反應(yīng)板為血凝實(shí)驗(yàn)操作用，標(biāo)明第10、11、12孔位置，以防加樣時(shí)混淆。加樣時(shí)要確保液體完全加入到v型板的底部，不能加到壁上甚至是濺出到孔外，加樣過程中應(yīng)盡可能的懸空加樣，不能出現(xiàn)碰壁的情況，倍比稀釋時(shí)要確保每一孔的吹吸次數(shù)是一樣的，加紅細(xì)胞時(shí)一定要邊搖邊加，盡量保證每一孔當(dāng)中加入的紅細(xì)胞的濃度是一樣的，加樣時(shí)應(yīng)該從后往前加，減少相鄰孔之間的交叉污染?？乖瓚乙旱牡渭右惨獜暮笸凹樱尤肭耙惨靹?，減少實(shí)驗(yàn)誤差。反應(yīng)板震蕩的時(shí)間、感作時(shí)間和室溫的要求嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果判定時(shí)在生理鹽水對(duì)照孔呈現(xiàn)明顯的紐扣狀沉到孔底時(shí)判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.4 配制四單位病毒

四單位病毒（4HAU）的配置要根據(jù)血凝實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和待檢血清的份數(shù)來進(jìn)行計(jì)算。4HAU的配備是否準(zhǔn)確會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在平時(shí)準(zhǔn)備或訓(xùn)練階段一定要做回滴實(shí)驗(yàn)[5]來進(jìn)行校正配置的4HAU濃度是否準(zhǔn)確。生理鹽水和抗原的總配置量按照評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)不能超過10～20 ml。稀釋的倍數(shù)要反復(fù)計(jì)算正確，在加入抗原時(shí)一定要反復(fù)吹洗多次。

1.5 血凝抑制（HI）實(shí)驗(yàn)

首先要對(duì)反應(yīng)板進(jìn)行標(biāo)記，每個(gè)反應(yīng)板的第10、11和12孔、陰陽性對(duì)照組、待檢血清都要進(jìn)行仔細(xì)的標(biāo)記。加入的待檢血清的編號(hào)一定要跟反應(yīng)板標(biāo)記的編號(hào)一一對(duì)應(yīng)。每個(gè)待檢血清加入前都要充分搖勻，加入四單位抗原和紅細(xì)胞懸液時(shí)也要充分混勻，要從后往前邊搖邊懸空加樣，保證每一孔加進(jìn)去的液體的濃度和數(shù)量是一致的。在倍比稀釋的過程當(dāng)中不但要保證每孔吹吸的次數(shù)是一樣的還要保證倍比稀釋不產(chǎn)生氣泡。操作時(shí)間和結(jié)果的判定同樣要嚴(yán)格依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16550-2008[1]《雞新城疫診斷技術(shù)》的要求，在生理鹽水對(duì)照孔和陰陽性對(duì)照成立的前提下進(jìn)行結(jié)果的判定。

1.6 抗體滴度報(bào)告

報(bào)告單主要填寫血凝實(shí)驗(yàn)的血凝價(jià)，4單位抗原的稀釋度和每個(gè)待檢血清的血凝抑制價(jià)等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果出來后要馬上舉手示意評(píng)委。在填寫抗體的滴度時(shí)一定要用log2來進(jìn)行規(guī)范表示。記錄要填寫清楚，不亂涂亂改。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后儀器和器皿要復(fù)位，采血器、殘留的紅細(xì)胞泥離心管等都要放入到固廢缸，要保證實(shí)驗(yàn)場地的整潔。

2 結(jié)果判定是比賽關(guān)鍵點(diǎn)

結(jié)果判定和抗體滴度報(bào)告占34分，抗體滴度結(jié)果的判定一定是在標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清對(duì)照成立的前提下，在對(duì)照孔紅細(xì)胞呈明顯鈕扣狀沉淀到孔底時(shí)判定結(jié)果，以能完全抑制紅細(xì)胞凝集的血清的最大稀釋度作為該血清的血凝抑制價(jià)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中結(jié)果的讀取都一定要遵循“完全”的原則。