苗文靜，張 欣，張艷麗，趙 瑞，楊詠梅，張 義△

(1.日照市婦幼保健院檢驗(yàn)科,山東日照 276800；2.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東濟(jì)南 250012；3.山東省立第三醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東濟(jì)南 250012)

胃癌是全球最常見的惡性消化道腫瘤之一，發(fā)病率和病死率較高，嚴(yán)重威脅著人們的生命健康。我國也是胃癌的高發(fā)國家，發(fā)病率位列我國惡性腫瘤的第2位，并且發(fā)現(xiàn)時已多處于中晚期，患者預(yù)后較差，病死率高于全球平均水平，是我國腫瘤患者死亡的第三大原因[1]?，F(xiàn)普遍觀點(diǎn)認(rèn)為，胃癌如果能夠早期發(fā)現(xiàn)，有望改善患者的預(yù)后，提高生存率[2]。Cripto-1能夠維持人和小鼠胚胎干細(xì)胞的多能性和自我更新能力，最初認(rèn)為是一個干細(xì)胞標(biāo)記物[3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，Cripto-1在多種腫瘤組織中表達(dá)，并且在癌前病變中其表達(dá)就會升高[4-7]。為此，本研究擬通過對胃癌患者血清Cripto-1水平進(jìn)行檢測，并與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原(CEA)、糖鏈抗原724(CA724)進(jìn)行比較，探討其在胃癌早期診斷和療效判斷中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018年1-6月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院收治的胃癌患者79例，均經(jīng)組織病理學(xué)確診，其中男49例，女30例，中位年齡61.0(49.0～75.0)歲，術(shù)前未經(jīng)任何放、化療及免疫治療；慢性萎縮性胃炎患者42例，經(jīng)胃鏡檢查確診，其中男27例，女15例，中位年齡59.5(47.8～72.0)歲；健康體檢者30例為健康對照組，經(jīng)B超、肝腎功檢查正常，其中男18例，女12例，中位年齡61.5(47.5～80.3)歲。

1.2儀器與試劑 Cripto-1 ELISA 試劑盒購自美國R&D公司，在美國熱電Multiskan FC型酶標(biāo)儀上測定；CEA和CA724采用羅氏E 601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及原裝配套試劑檢測。

1.3方法 采集待測者空腹靜脈血3 mL，排除脂血、溶血標(biāo)本，1 h內(nèi)4 ℃ 1 500 g離心10 min，收集血清，于-80 ℃保存。血清Cripto-1采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測，CEA和CA724采用電化學(xué)免疫發(fā)光法測定，嚴(yán)格按說明書操作進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各組血清Cripto-1、CEA、CA724水平經(jīng)Kolmogorov-Smirnov分析呈偏態(tài)分布，用中位數(shù)(四分位數(shù))[M(Q25～Q75)]表示，3組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)；血清Cripto-1手術(shù)前后比較采用配對樣本的Wilcoxon符號秩檢驗(yàn)，用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。受試者工作特征曲線(ROC曲線)繪制采用MedCalc 9.3.9.0統(tǒng)計(jì)軟件，曲線下面積(AUC)比較采用Z檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各組血清Cripto-1、CEA和CA724水平比較 胃癌組、萎縮性胃炎組和健康對照組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；血清Cripto-1、CEA和CA724水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中胃癌組血清Cripto-1水平高于萎縮性胃炎組和健康對照組(均P<0.05)；萎縮性胃炎組血清Cripto-1水平高于健康對照組(P<0.05)。胃癌組血清CEA和CA724水平高于萎縮性胃炎組和健康對照組(均P<0.05)，而萎縮性胃炎組和健康對照組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2Cripto-1與CEA和CA724對胃癌的診斷價值比較 ROC曲線顯示，Cripto-1診斷胃癌的AUC為0.818(95%CI：0.747～0.876)，其明顯高于CEA[0.642(95%CI：0.560～0.719)]和CA724[0.661(95%CI：0.579～0.736)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.419，P=0.001；Z=3.099，P=0.002)；而CEA和CA724診斷胃癌的AUC比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=0.355，P=0.723)。見圖1。Cripto-1取最佳臨界值時，其診斷胃癌的靈敏度、特異度、陽性似然比和陰性似然比均高于CEA和CA724，見表2。

表1 各組血清Cripto-1、CEA和CA724水平比較[M(Q25～Q75)]

續(xù)表1 各組血清Cripto-1、CEA和CA724水平比較[M(Q25～Q75)]

注：-表示未做兩兩比較

圖1 Cripto-1、CEA和CA724診斷胃癌的ROC曲線比較

表2 3項(xiàng)指標(biāo)檢測診斷胃癌的診斷效果比較

2.3Cripto-1在胃癌療效監(jiān)測中的作用 收集其中30例胃癌患者術(shù)后7 d血清，對Cripto-1進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)22例(73.3%)患者術(shù)后血清Cripto-1水平發(fā)生下降，8例(26.7%)患者出現(xiàn)升高。胃癌患者手術(shù)后血清Cripto-1水平為2.69(1.53～4.80)μg/L，明顯低于手術(shù)前的5.46(1.24～14.93)μg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。見圖2。

圖2 胃癌患者手術(shù)前后Cripto-1水平比較

3 討 論

Cripto-1最初是從人類NTERA-2畸胎癌cDNA文庫中分離和克隆的，是表皮生長因子(EGF)-CFC家族的結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白成員之一，在早期胚胎發(fā)育不可或缺[8]。Cripto-1定位于人染色體3p21.3，編碼188個氨基酸，含有特征性EGF樣結(jié)構(gòu)域[9]。有研究顯示[10-11]，Cripto-1可以特異度結(jié)合與膜相關(guān)的硫酸乙酰肝素蛋白多糖的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1，并激活酪氨酸激酶c-Src，觸發(fā)絲裂原活化蛋白激酶和Akt信號通路，然后促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和浸潤。 同時，Cripto-1還通過與激活素和生長因子β(TGF-β)配體和受體形成復(fù)合物，抑制激活素和TGF-β信號傳導(dǎo)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞存活和增殖[12-13]。另外，Cripto-1還參與腫瘤細(xì)胞的上皮-間皮轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移[14]。2018年XU等[15]采用ELISA方法對312例非小細(xì)胞肺癌患者血清中Cripto-1水平進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌患者血清中Cripto-1水平明顯高于健康對照者，并且和患者的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和生存期密切相關(guān)；COX比例回歸模型分析顯示，血清Cripto-1水平是非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因素，提示Cripto-1有望作為一種非侵入性指標(biāo)用于腫瘤診斷和預(yù)后判斷。

胃癌的發(fā)生發(fā)展是一個多步驟、多因素共同作用的過程。ZHANG等[16]采用免疫組織化學(xué)方法對胃相關(guān)疾病患者組織中Cripto-1的表達(dá)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)胃癌患者、慢性萎縮性胃炎患者、腸上皮化生患者以及異型增生患者組織中Cripto-1的表達(dá)顯著高于正常的胃黏膜組織，提示Cripto-1參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。本研究采用無創(chuàng)性的ELISA方法對胃癌患者血清Cripto-1進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示胃癌組血清Cripto-1水平高于萎縮性胃炎組和健康對照組，萎縮性胃炎組血清Cripto-1水平高于健康對照組；與此同時， CEA和CA724雖在胃癌組表達(dá)升高，而在萎縮性胃炎組和健康對照組無顯著差異，提示血清Cripto-1較傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物在早期預(yù)測胃癌發(fā)生上更具有潛在的應(yīng)用價值。本研究進(jìn)一步采用ROC曲線分析其對胃癌的診斷價值，發(fā)現(xiàn)Cripto-1診斷胃癌的診斷效能要明顯優(yōu)于CEA和CA724；當(dāng)Cripto-1取最佳臨界值時，其診斷胃癌的靈敏度、特異度、陽性似然比和陰性似然分別為83.54%、72.22%、3.01和0.23，均高于CEA和CA724。同時本研究還對30例胃癌患者術(shù)后血清Cripto-1進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)73.3%患者術(shù)后血清Cripto-1水平下降，并且手術(shù)后血清Cripto-1水平明顯下降，提示其還可作為胃癌患者的一項(xiàng)療效判斷指標(biāo)。目前關(guān)于Cripto-1在胃癌發(fā)生中的機(jī)制研究還較少，有研究顯示，Cripto-1在胃癌組織中與p-STAT3的表達(dá)相關(guān)，提示其可以通過STAT3信號通路的激活，促進(jìn)下游癌基因的表達(dá)，促進(jìn)胃癌的發(fā)生[16]。同時，本研究的樣本例數(shù)還較少，下一步擬加大樣本量，進(jìn)行多中心研究，建立其參考區(qū)間，進(jìn)一步明確血清Cripto-1在胃癌中的臨床應(yīng)用價值。另外，有關(guān)血清中其他指標(biāo)是否對血清Cripto-1的檢測造成干擾也有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

目前，胃癌的早期診斷和療效判定仍未達(dá)臨床的需求，是臨床一直關(guān)注的焦點(diǎn)和難題。CEA和CA724作為臨床應(yīng)用較為廣泛的腫瘤標(biāo)志物，其在胃癌診斷和療效判定中的效果還不甚理想。Cripto-1是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種標(biāo)志物分子，本研究用于胃癌患者的檢測，發(fā)現(xiàn)其診斷的靈敏度和特異度均高于傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物，并且治療后水平迅速下降，提示其在胃癌早期診斷和療效判斷中具有潛在的應(yīng)用價值。