梁雪飛 萬(wàn)江帆

(廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生計(jì)生委生殖中心生殖科，南寧市 530021，電子郵箱：lxf9299@163.com)

多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是一種生殖內(nèi)分泌紊亂性疾病，以卵巢多囊樣改變、持續(xù)性無(wú)排卵、高雄激素血癥為主要臨床表現(xiàn)。目前，遺傳因素、環(huán)境因素、精神和心理因素、藥物因素均被認(rèn)為是其致病因素[1]。我國(guó)漢族婦女的發(fā)病率為5%～8%[2]。肥胖型PCOS在育齡期婦女中的發(fā)病率可高達(dá)10%[3]，且由于其存在胰島素抵抗、高胰島素血癥，導(dǎo)致其治療難度要遠(yuǎn)高于非肥胖型。PCOS有家族遺傳聚集傾向[4]，已有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在正常人脂聯(lián)素序列中有許多的等位基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)位點(diǎn)，其所在的染色體3q27區(qū)域存在與2型糖尿病[5-6]、代謝綜合征[7]、肥胖[8]和PCOS[9]相關(guān)的易感位點(diǎn)。有研究結(jié)果顯示，脂聯(lián)素基因rs1501299的SNP位點(diǎn)與PCOS相關(guān)[10]。在我國(guó)，脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)的研究主要集中在漢族人群[11-12]，而針對(duì)少數(shù)民族人群的研究幾乎未見(jiàn)報(bào)道。壯族是我國(guó)人口最多的少數(shù)民族，目前尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)告壯族和漢族PCOS患者脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)是否存在差異。本研究以壯族和漢族PCOS患者為研究對(duì)象，檢測(cè)其脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)不同基因型分布情況，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇于2012年10月至2016年12月到我院試管嬰兒門診就診的PCOS患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)自我報(bào)告或其直系家屬報(bào)告三代以內(nèi)均為壯族血緣或漢族血緣；(2)PCOS的診斷符合 2003 年鹿特丹標(biāo)準(zhǔn)[13]，滿足以下3項(xiàng)中的兩項(xiàng)即可診斷：① 稀發(fā)排卵或無(wú)排卵；② 高雄激素血癥的臨床表現(xiàn)和(或)高雄激素血癥；③ 卵巢多囊性改變，包括一側(cè)或雙側(cè)卵巢中直徑 2～9 mm的卵泡≥12 個(gè)，和(或)卵巢體積≥10 ml。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他致雄激素水平升高的病因如先天性腎上腺皮質(zhì)增生、Cushing綜合征、分泌雄激素的腫瘤等；(2)合并其他引起排卵障礙的疾病，如高泌乳素血癥、卵巢早衰和垂體或下丘腦性閉經(jīng)、甲狀腺功能異常等。共納入439例患者，根據(jù)民族分為壯族組198例及漢族組241例。兩組年齡及卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH)、黃體生成素(luteinizing hormone，LH)、雌激素、泌乳素及睪酮水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。本研究納入的研究對(duì)象均知情同意且簽署知情同意書；本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

表1 兩組一般情況資料對(duì)比(x±s)

1.2 性激素的測(cè)定 抽取所有患者清晨空腹靜脈血5 ml，12 000 r/min離心10 min，分離血清，測(cè)定FSH、LH、雌激素、泌乳素及睪酮，以上指標(biāo)均由專人采用貝克曼DXI800型化學(xué)免疫發(fā)光分析儀進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行質(zhì)控。

1.3 基因多態(tài)性檢測(cè) 采集所有患者外周靜脈血5 ml，置于含有乙二胺四乙酸抗凝劑的真空采血管中，混勻，4℃送至廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室。紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞后，使用細(xì)胞核裂解液裂解細(xì)胞核，應(yīng)用異丙醇沉淀法提取全基因組DNA，置于-80℃保存，用于基因分析。采用中高通量SNPscan技術(shù)進(jìn)行基因分型，檢測(cè)工作主要由上海天昊生物科技有限公司完成。在所有樣品中隨機(jī)抽取5%的樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果一致率為100%。采用SHEsis在線軟件[11]計(jì)算該位點(diǎn)在兩組中的等位基因分布是否符合哈溫平衡定律。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以(x±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

漢族組脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)等位基因G、T頻率分別為73.74%、26.26%，壯族組分別為76.14%、23.86%，兩組患者的基因分布均符合哈溫平衡(χ2=0.240，P=0.620；χ2=3.510，P=0.060)。壯族組與漢族組患者脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)基因型分布比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)基因型分布情況[n(%)]

3 討 論

PCOS于1935年被首次報(bào)道，但至今其發(fā)病機(jī)制仍未能闡明[14]。過(guò)去PCOS被認(rèn)為具有家族遺傳性，因此大部分學(xué)者針對(duì)基因開(kāi)展研究以尋找其病因，如胰島素受體相關(guān)基因(rs2252673、rs17253937、rs3786681等)[15]、肥胖相關(guān)基因(MC4R rs17782313、FTO rs9939609等)[16]、脂聯(lián)素基因(rs1501299、rs17300539等)[17]等，但國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究結(jié)果不盡相同，且至今仍未發(fā)現(xiàn)任何一個(gè)直接導(dǎo)致PCOS的候選基因。

脂聯(lián)素基因由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子組成，rs1501299位點(diǎn)位于第2內(nèi)含子上[18]，其基因多態(tài)性并不影響蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄及翻譯過(guò)程中氨基酸序列順序，因此可能并不影響脂聯(lián)素蛋白構(gòu)象及功能，也可能不會(huì)參與PCOS的發(fā)病。Ranjzad等[19]也發(fā)現(xiàn)在伊朗人群中，rs1501299位點(diǎn)的基因型與PCOS的發(fā)生并無(wú)相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，壯族與漢族PCOS患者的脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)基因型分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)的多態(tài)性可能不受民族的影響。Norman等[20]發(fā)現(xiàn)PCOS患者的一級(jí)直系家屬發(fā)病率明顯高于普通人群，但不遵循孟德?tīng)栠z傳規(guī)律，其遺傳規(guī)律較為復(fù)雜，提示PCOS更可能是遺傳因素與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。影響PCOS發(fā)病的可能因素為：(1)環(huán)境因素。環(huán)境內(nèi)分泌干擾物如雙酚A通過(guò)干擾雌激素或抗雌激素合成擾亂內(nèi)分泌系統(tǒng)的正常運(yùn)轉(zhuǎn)[21]。(2)心理因素。長(zhǎng)期焦慮、抑郁、悲傷等負(fù)性情緒及長(zhǎng)期緊張使得機(jī)體處于長(zhǎng)期慢性應(yīng)激狀態(tài)，這些不良心理情緒均會(huì)增加腎上腺皮質(zhì)激素分泌量，進(jìn)而導(dǎo)致胰高血糖素血癥或胰島素抵抗發(fā)生，導(dǎo)致PCOS的發(fā)生[22]。(3)精神因素。婦女精神緊張、壓抑等精神問(wèn)題可對(duì)下丘腦-垂體-卵巢軸產(chǎn)生直接抑制作用，擾亂下丘腦-垂體-卵巢軸的正常節(jié)律及卵巢功能。(4)藥物因素也可以誘導(dǎo)PCOS發(fā)生[23]。

綜上所述，PCOS患者的脂聯(lián)素基因rs1501299位點(diǎn)的多態(tài)性分布可能不受民族影響，PCOS的發(fā)生應(yīng)是多種因素共同作用結(jié)果，但仍需要更大樣本量、更為嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)研究來(lái)進(jìn)一步證實(shí)。