強(qiáng)永在 屈曉梅 王陽(yáng)

[摘要] 目的 提取、分離純化川木香中倍半萜組分，并將其制成固體分散體，以提高其體外溶出速度。 方法 建立測(cè)定川木香倍半萜組分含量測(cè)定的超高效液相色譜法，色譜條件為Acquity超高效液相色譜儀，色譜柱為Waters BEH-C18色譜柱（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm）;流動(dòng)相為乙腈-水（50∶50）;流速0.4 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)225 nm。采用超聲輔助提取川木香倍半萜成分，硅膠柱色譜對(duì)其進(jìn)行分離、純化，然后分別以聚乙二醇、泊洛沙姆為載體材料制備固體分散體，并采用差示掃描量熱法對(duì)其進(jìn)行表征。 結(jié)果 不同載體制備的固體分散體均能明顯加快木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的溶出，以泊洛沙姆188（P188）為載體制備的固體分散體溶出最快，且以川木香倍半萜組分/P188質(zhì)量比1∶6為最佳。 結(jié)論 川木香倍半萜組分制成固體分散體可以明顯提高藥物的溶解度及溶出速度。

[關(guān)鍵詞] 川木香;倍半萜;超高效液相色譜法;固體分散體;泊洛沙姆188;溶出度

[中圖分類(lèi)號(hào)] R284? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）01（a）-0028-05

川木香系為菊科植物川木香Vladimiria souliei （Franch） Ling或灰毛川木香Vladimiria souliei（Franch） Ling var. cinerea Ling的干燥根，具有行氣止痛的作用，可用于胸肋、脘腹脹痛、腸鳴腹瀉、里急后重等癥[1]，為藏醫(yī)常用藥物[2]。川木香主要含有倍半萜類(lèi)、三萜類(lèi)、木脂素類(lèi)等化學(xué)成分[3-4];其活性成分主要為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯，具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[5-8]、抗胃潰瘍[9]等作用。川木香倍半萜組分（Vladimiriae souliei sesquiterpenoids composition，VSSC）水溶性差，口服給藥后藥物溶出速度慢，從而導(dǎo)致其生物利用度較低。

固體分散技術(shù)（solid dispersion，SD）是指將藥物以微粒、微晶或分子狀態(tài)均勻分散于固態(tài)載體材料中的技術(shù)。采用親水性載體材料制備固體分散體是提高難溶性藥物溶出度和生物利用度的常用方法之一[8-10]。本研究將VSSC與PEG 6000、泊洛沙姆188（P188）分別制成固體分散體，以木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的溶出度為指標(biāo)，考察其體外溶出速度，以期為制備理想的VSSC制劑奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

超高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）;DSC1差示掃描量熱儀（瑞士Mettler-Toledo公司）;RC8MD智能藥物溶出儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 試藥

對(duì)照品：木香烴內(nèi)酯（批號(hào)：20160311，HPLC>98%）、去氫木香內(nèi)酯（批號(hào)：20160426，HPLC>98%）均購(gòu)自南京澤朗醫(yī)藥技術(shù)公司;聚乙二醇6000（PEG 6000，無(wú)錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司，批號(hào)：20170301）;泊洛沙姆188（P188，德國(guó)BASF公司，批號(hào)：WPEE587E）;色譜級(jí)乙腈（美國(guó)Sigma公司），水為超純水。

川木香藥材購(gòu)于河北安國(guó)藥材市場(chǎng)，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院?jiǎn)炭±p教授鑒定為菊科植物川木香Vladimiria souliei（Franch） Ling或灰毛川木香Vladimiria souliei （Franch） Ling var. cinerea Ling的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 川木香倍半萜成分的測(cè)定

2.1.1 色譜條件? Acquity超高效液相色譜儀配DAD檢測(cè)器，Waters BEH-C18色譜柱（2.1 mm × 50 mm，1.7 μm）;流動(dòng)相為乙腈-水（50∶50）;流速0.4 mL/min;進(jìn)樣量2 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)225 nm。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備? 分別精密稱(chēng)取4.88 mg木香烴內(nèi)酯、4.40 mg去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品，置于10 mL量瓶中，甲醇溶解并定容，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯儲(chǔ)備液各0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mL，用流動(dòng)相定容于5 mL量瓶中，過(guò)0.22 μm濾膜后進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積縱坐標(biāo)（Y），以對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸。木香烴內(nèi)酯回歸方程為：Y = 4837.25X-3685.01（r = 0.9999），去氫木香內(nèi)酯回歸方程為Y = 5385.22X-3215.26（r = 0.9999），去氫木香烴內(nèi)酯在4.88～97.6 μg/mL、木香烴內(nèi)酯在4.40～88.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn)? 按擬定色譜條件，分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性溶液各2 μL注入超高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果陰性溶液的色譜圖中，無(wú)色譜峰，說(shuō)明輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.1.4 精密度試驗(yàn)? 分別精密稱(chēng)取VSSC-P188（1∶6）及VSSC-PEG 6000（1∶6）固體分散體各5 mg，置50 mL量瓶中，甲醇溶解并定容，按“2.1.1”項(xiàng)下進(jìn)樣2 μL，連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果VSSC-P188固體分散體中，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD值分別為0.35%、0.43%;VSSC-PEG 6000固體分散體中，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD值分別為0.32%、0.39%，表明儀器精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)? 取VSSC-P188（1∶6）及VSSC-PEG 6000（1∶6）固體分散體樣品適量，制備供試品溶液，分別于0、0.5、1、2、4、6、8、12 h取樣測(cè)定，結(jié)果VSSC-P188固體分散體中，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD值分別為0.68%、0.79%;VSSC-PEG 6000固體分散體中，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD值分別為0.59%、0.67%，表明制備的供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.6 回收率試驗(yàn)? 精密稱(chēng)取VSSC-P188（1∶6）固體分散體各約50 mg，共9份，置50 mL量瓶中，分別加入木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯儲(chǔ)備液適量，甲醇定容，制成高、中、低質(zhì)量濃度的供試品溶液（相當(dāng)于固體分散體中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量80%、100%和120%）。按“2.1.1”項(xiàng)下進(jìn)樣2 μL，測(cè)定該兩種成分的峰面積，計(jì)算回收率。木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的平均回收率分別為99.22%和98.16%，RSD分別為1.27%和1.64%，表明該方法回收率良好，不受載體材料的影響。見(jiàn)表1。

2.2 川木香倍半萜組分的制備

稱(chēng)取300 g川木香藥材，粉碎，過(guò)60目篩，加入30倍量（mL/g）乙醇，超聲提取2次，每次30 min，合并提取液，減壓濃縮結(jié)合真空干燥，得46.2 g川木香粗提物。

取硅膠（100～200目）適量，置于燒杯中，加入一定量的洗脫劑，充分?jǐn)嚢韬鬂穹ㄑb柱。川木香粗提物采用濕法上樣，石油醚-乙酸乙酯（30∶1→0∶1）梯度洗脫。薄層色譜法檢測(cè)流分中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯，合并與對(duì)照品溶液相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)的洗脫流分，減壓蒸干，得15.7 g固體提取物，經(jīng)測(cè)定該固體物中有5.3 g木香烴內(nèi)酯（33.76%，質(zhì)量比），6.1 g去氫木香內(nèi)酯（38.85%，質(zhì)量比），有效成分含量超過(guò)50%，符合《藥品注冊(cè)管理辦法》中有效部位的規(guī)定。因此，可將其視為川木香有效部位。

2.3 溶劑-熔融法制備VSSC固體分散體

取干燥蒸發(fā)皿，置于80℃恒溫水浴上，分別加入處方量的PEG 6000和P188，待熔融后逐滴加入預(yù)先備好的無(wú)水乙醇溶解的VSSC（1.0 g），繼續(xù)攪拌至無(wú)乙醇味，隨后將蒸發(fā)皿轉(zhuǎn)移至冰水浴，攪拌至完全固化，即得VSSC固體分散體，粉碎過(guò)60目篩，備用。

2.4 物理混合物的制備

將各載體材料與VSSC按比例（1∶6）混合，反復(fù)過(guò)80目篩，以確保混合均勻，即得物理混合物。

2.5溶出度測(cè)定

參照2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》[1]（四部）通則0931第2法。取各方法制備的固體分散體適量進(jìn)行溶出度實(shí)驗(yàn)，以脫氣蒸餾水作為溶出介質(zhì)（900 mL），溫度設(shè)定為（37.0±0.5）℃，槳法，轉(zhuǎn)速為100 r/min，分別于10、15、20、30、40、50 min取樣2 mL，同時(shí)補(bǔ)充等體積同溫蒸餾水。溶出液用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的累積溶出度。

2.6 載體材料的考察

分別以PEG 6000、P188為載體材料（藥物∶載體材料=1∶6），按“2.3”項(xiàng)下制備VSSC固體分散體，按“2.5”項(xiàng)下考察其體外溶出度。見(jiàn)圖2。與原料藥相比，制成固體分散體后，木香烴內(nèi)酯及去氫木香內(nèi)酯的溶出速度提高明顯，20 min溶出度均超過(guò)50%，且P188為載體制備的固體分散體溶出速度高于PEG 6000，故選擇P188為載體材料制備VSSC固體分散體。

2.7 藥物-載體材料比例的考察

按“2.3”項(xiàng)下制備不同VSSC-P188質(zhì)量比（1∶3、1∶6、1∶9）的固體分散體，按“2.5”項(xiàng)下考察其體外溶出度。見(jiàn)圖3。隨著載體材料用量的增加，2種主要成分，即木香烴內(nèi)酯及去氫木香內(nèi)酯的溶出速率均明顯加快，當(dāng)VSSC-P188質(zhì)量比為1∶6和1∶9時(shí)，2種主要成分20 min的累積溶出量接近。載體材料比例低，既可以提高載藥量，又經(jīng)濟(jì)節(jié)約適于工業(yè)生產(chǎn)。因此，選擇VSSC-P188質(zhì)量比為1∶6制備固體分散體。

2.8 溶解度的測(cè)定

取15個(gè)具塞錐形瓶，均加入30 mL蒸餾水，分為5組，置于20℃恒溫培養(yǎng)搖床中。每組中分別加入過(guò)量的VSSC、VSSC-P188固體分散體（1∶6）、VSSC-P188物理混合物（1∶6）、VSSC-PEG 6000固體分散體（1∶6）與VSSC-PEG 6000物理混合物（1∶6），振蕩3 d，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算20℃時(shí)各樣品的溶解度。與VSSC、VSSC-物理混合物相比，制成固體分散體后，VSSC中各成分的溶解度顯著增加。見(jiàn)表2。

2.9 差示掃描量熱法

取鋁制坩堝，分別放入3～5 mg的VSSC、P188、VSSC-P188（1∶6）固體分散體、VSSC-P188混合物（1∶6），空坩堝作為參比;升溫范圍25～250℃，升溫速度20℃/min。VSSC原料藥在63℃附近有吸熱峰;P188在約55℃有吸熱峰（圖4），與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致。VSSC-P188物理混合物的DSC曲線中，存在2個(gè)吸熱峰，分別為P188和VSSC;觀察VSSC-P188固體分散體的差示掃描量熱曲線，發(fā)現(xiàn)只有55℃處有單一吸熱峰，表明制備得到的固體分散體中無(wú)VSSC結(jié)晶。

A：P188;B：VSSC-P188固體分散體;C：VSSC;D：VSSC-188混合物;P118：泊洛沙姆188;VSSC：川木香倍半萜組分

圖4? ?各樣品的DSC

3 討論

超高效液相色譜系統(tǒng)色譜柱采用的填料粒徑為1.7 μm，根據(jù)Van Deemter理論，其比傳統(tǒng)的高效液相色譜具有更高的分離度、分離速度與靈敏度，目前多用于藥物質(zhì)量控制[12-16]、血藥濃度監(jiān)測(cè)[17-18]、環(huán)境監(jiān)測(cè)[19]、與質(zhì)譜聯(lián)合應(yīng)用[20-23]等。本研究采用超高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定川木香倍半萜成分中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯，經(jīng)優(yōu)化后，選用乙腈-水（50∶50）作為流動(dòng)相，可獲得良好的分離度。

P188屬于非離子型表面活性劑，本身具有一定的增溶能力，其在水中形成臨界膠束的濃度約為0.2%。制備的VSSC固體分散體中，主要成分木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯在水中的溶解度、溶出速率均顯著增加;P188的增溶作用并非其主要原因，溶出試驗(yàn)體系中P188的最高濃度僅為0.03%，遠(yuǎn)低于臨界膠束濃度，故認(rèn)為提高溶解度和溶出度的原因在于形成了固體分散體。同時(shí)，制成固體分散體后，2種主要成分的釋放同步性增加，有助于藥物的同步吸收。本研究為川木香新制劑的開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2018-03-27? 本文編輯：王? ?蕾）