鄧雅婧

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 福州 350002）

磷作為動(dòng)物所需的常量礦物質(zhì)元素之一，不僅在動(dòng)物骨骼系統(tǒng)的發(fā)育及維持中起作用，而且還是許多器官的有機(jī)組成成分，在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的生化反應(yīng)中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用[1]。不同磷含量水平的飼料，對(duì)禽、畜、魚類等動(dòng)物的生長和磷代謝有著不同影響[2]。隨著動(dòng)物喂養(yǎng)的科學(xué)化、專業(yè)化發(fā)展，為確保飼料中所提供的總磷滿足動(dòng)物不同階段生長需求，飼料生產(chǎn)商僅針對(duì)同一品種動(dòng)物，就需配置具有不同總磷含量的飼料產(chǎn)品，由此帶來了大量的檢測(cè)工作量。

國標(biāo)對(duì)于飼料中總磷的檢測(cè)，采用的是鉬黃顯色的分光光度法[3]，通過干法或濕法將樣品進(jìn)行消解后，加入釩鉬酸銨顯色劑，采用分光光度法進(jìn)行比色測(cè)定。雖然該方法重復(fù)性好，但是釩鉬酸銨顯色劑使用量大，并且其中含有大量的硝酸，會(huì)給環(huán)境造成較大的污染。同時(shí)，樣品的批量測(cè)定時(shí)，容易因?yàn)楸壬珪r(shí)間過長而使檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生偏差，且大批量的樣品測(cè)定，也對(duì)檢驗(yàn)人員的操作技能提出了較高要求。

全自動(dòng)間斷化學(xué)分析是將比色分析法自動(dòng)化的一種分析測(cè)試手段。其可模擬手工比色，根據(jù)程序設(shè)定精確移取樣品和試劑進(jìn)行連續(xù)測(cè)量，嚴(yán)格把控樣品顯色時(shí)間并實(shí)現(xiàn)自動(dòng)清洗，適用于大批量的分析，能有效減少人工操作量。與傳統(tǒng)的分光光度計(jì)相比，精確度更高，試劑成本更低，檢測(cè)速度更快，實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)過程中的無人值守。目前，已應(yīng)用于硝酸鹽和氨氮等物質(zhì)的含量測(cè)定[4-5]。

近年來，產(chǎn)品檢驗(yàn)需求量不斷增加，檢驗(yàn)準(zhǔn)確性要求提高，加之環(huán)保部門對(duì)實(shí)驗(yàn)室污染排放管控日趨嚴(yán)格，檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)人工成本上升，因此，本文以應(yīng)用間斷化學(xué)分析儀建立快速測(cè)定飼料中總磷含量的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

間斷化學(xué)分析儀，Cleverchen 380，德國Dechem-Tech.Gmbh公司；

電子分析天平（d=0.0001g），賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.2 材料與試劑

檢測(cè)用動(dòng)物飼料為市場(chǎng)隨機(jī)抽查樣本；

磷標(biāo)準(zhǔn)溶液A：1000 mg/L，國家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心；

磷酸二氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99.5%)；

鹽酸為優(yōu)級(jí)純，其余試劑均為分析純；

釩鉬酸銨試劑：A液（25 g鉬酸銨，溶于400 mL水中），B液（1.25 g偏釩酸銨溶于300 mL沸水中，冷卻后加250 mL硝酸），將A液緩緩傾入B液中，不斷攪勻，并用水稀釋至1 L，貯于棕色瓶中；

磷標(biāo)準(zhǔn)溶液B：5000 mg/L，稱取在(105±1)℃烘干至恒重的磷酸二氫鉀標(biāo)準(zhǔn)品21.9713 g，溶于400 mL水中，加8 mL硫酸，定容至1 L；

磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液：移取8.00 mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液A，定容至100 mL。

1.3 磷測(cè)定方法

1.3.1 樣品處理

稱取飼料樣品約5 g于坩堝中，置于電爐上炭化后，放入高溫爐，550 ℃灼燒至樣品灰化完全。取出，加入10 mL鹽酸（1+1）溶液，煮沸后，將溶液過濾至100 mL容量瓶中，冷卻后定容，混勻，待測(cè)。

1.3.2 在間斷化學(xué)分析儀中設(shè)定好程序及通用參數(shù)

濾光片：420 nm；

樣液及試劑加入量：樣液100μL；試劑R1（釩鉬酸銨溶液）100μL；試劑R2（三級(jí)水）300μL；

反應(yīng)時(shí)間：試劑R1和樣液混勻36 s后加入試劑R2；最后反應(yīng)300 s后測(cè)定吸光度；

標(biāo)準(zhǔn)溶液自動(dòng)稀釋模式：設(shè)置稀釋比例為1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16；

樣品溶液自動(dòng)稀釋模式：設(shè)置儀器自動(dòng)于顯色前,將試樣分解液按1∶10進(jìn)行稀釋

2 結(jié)果與分析

2.1 試樣分解液取樣體積的確定

因試樣分解液濃度較高，直接移取100 μL進(jìn)行顯色測(cè)定，其吸光度超過了將超出間斷化學(xué)分析的測(cè)量范圍，因此必須進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尅?/p>

方式1：移取10 μL，對(duì)同一試樣分解液進(jìn)行6次顯色測(cè)定；

方式2：將試樣分解液按1∶10進(jìn)行稀釋，移取稀釋后的試樣分解液100 μL進(jìn)行6次顯色測(cè)定；

上述2種方式測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 不同試樣分解液移取方式測(cè)定結(jié)果的對(duì)比 單位：mg/L

通過結(jié)果比較，移取10μL進(jìn)行顯色測(cè)定時(shí)，其檢測(cè)結(jié)果偏差大；對(duì)試樣進(jìn)行前稀釋后再顯色，其稀釋后的試樣分解液濃度可達(dá)到檢測(cè)范圍，且檢測(cè)結(jié)果偏差小。故選擇設(shè)置儀器自動(dòng)于顯色前，將試樣分解液按1∶10進(jìn)行稀釋，移取稀釋后的樣液100 μL進(jìn)行顯色測(cè)定的方法進(jìn)行試驗(yàn)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

在樣品管內(nèi)加入80.0 μg/mL 的磷標(biāo)液，按2.1節(jié)中儀器設(shè)置自動(dòng)稀釋模式，使用2.1節(jié)中所述的最佳試驗(yàn)條件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖1。

圖1 磷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

結(jié)果表明，磷含量吸光度（Y）對(duì)磷濃度（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，磷濃度在0～80 μg/mL之間呈良好的一次線性關(guān)系?；貧w方程y=0.0116x-0.0039，相關(guān)系數(shù)r2=0.9991

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

按2.1節(jié)中最佳試驗(yàn)條件對(duì)同一樣品進(jìn)行6次重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果如表2。

2.4 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱2.4中的樣品18份，分為3組，分別加入2.00、5.00、10.00 mL磷標(biāo)準(zhǔn)溶液B，按2.1節(jié)中最佳試驗(yàn)條件方法處理后，測(cè)定其磷含量，結(jié)果見表3。

結(jié)果表明，加標(biāo)10.00～50.00 mg后的飼料樣品依本法測(cè)定后其加標(biāo)回收率為97.3%～103.0%。

2.5 樣品中磷含量的測(cè)定

按2.1節(jié)中所述的方法，對(duì)市售5種飼料樣品磷含量進(jìn)行測(cè)定，并與按GB/T 6437-2002方法所得到的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果見表4。數(shù)據(jù)表明2種檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)偏差＜5%。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表4 樣品中磷含量的測(cè)定及與國標(biāo)法的對(duì)比

3 結(jié)論

本文建立的應(yīng)用間斷化學(xué)分析儀測(cè)定飼料中磷含量的檢測(cè)方法，具有便捷、快速、批量的特點(diǎn)，并且簡(jiǎn)化了操作步驟。通過間斷化學(xué)分析儀自動(dòng)進(jìn)樣、分析飼料中磷含量，以機(jī)械臂代替人工操作，在節(jié)約試劑、降低污染的同時(shí)，節(jié)省了分析測(cè)試的人力成本，提高了檢驗(yàn)的效率，同時(shí)實(shí)驗(yàn)重復(fù)性、回收率等指標(biāo)均有滿意的結(jié)果。將本法測(cè)試結(jié)果與GB/T 6437-2002方法結(jié)果進(jìn)行比較，2種方法檢測(cè)結(jié)果偏差小?？梢?，本方法能在保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的同時(shí)，有效減少試劑、人力成本，對(duì)實(shí)驗(yàn)室樣品的批量檢測(cè)有重要意義。