楊春柳，史紹林

(黑龍江省森林與環(huán)境科學(xué)研究院，黑龍江 齊齊哈爾 161005)

植物組織培養(yǎng)中發(fā)生污染的現(xiàn)象是普遍存在的問題， 創(chuàng)造無菌環(huán)境對減少組培瓶苗污染率來說尤為重要。在做好其他控制措施的同時添加適當(dāng)?shù)囊志鷦┛梢苑乐刮廴綶1]，在自由人槭‘秋焰’(Acer×freemanii)快速繁殖中，控制污染是組培工廠化育苗可持續(xù)生產(chǎn)的必要條件，因此，嘗試添加新興殺菌劑 “益培靈”觀察其抑菌效果，為合理控制成本，規(guī)?；敝程峁├碚摶A(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

組培室內(nèi)以自由人槭‘秋焰’不定芽苗無菌苗為材料。

1.2 供試殺菌劑

“益培靈”為植物組織培養(yǎng)專用防污染殺菌劑，具有易溶解于水且 120 ℃加熱2 h活性不下降的特性，購自上海稼豐園藝用品有限公司。

1.3 試驗設(shè)計

基本培養(yǎng)基為改良MS培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基內(nèi)添加①不添加任何殺菌劑；②青霉素10 mg·L-1、 20 mg·L-1；③“益培靈”10 mg·L-1、20 mg·L-1，每個處理50瓶，試驗重復(fù)3次。比較添加物及其不同濃度對污染真菌和細(xì)菌的抑制作用和對不定芽生長的影響。

1.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與分析

表1 不同添加物對污染率的影響

在制作培養(yǎng)基的過程中，添加抑制物質(zhì)控制污染的發(fā)生，結(jié)果見表1。由表1知接種7 d已經(jīng)有直觀的變化，污染均在4%以內(nèi)，但“益培靈”20 mg·L-1的濃度下污染率能控制在3%以下。通過方差分析(見表2)發(fā)現(xiàn)接種7 d差異顯著(sig<0.05)。

表2 接種7 d污染率方差分析表

表3 接種7 d污染率Duncan法多重比較

從表3多重比較表可知，對照和其他處理之間差異顯著，其他處理中“益培靈”20 mg·L-1與另外三個處理差異顯著。即在培養(yǎng)7 d時，添加殺菌劑對培養(yǎng)基有一定的效果，因此我們接著進(jìn)行觀察接種21 d(3周)的污染情況。

表4 接種21 d污染率方差分析表

接種21 d后通過直觀調(diào)查可知，對照污染率在7%左右，使用控制污染物后，污染率有了不同程度的下降。在“益培靈”20 mg·L-1的濃度下污染率能控制在4.7%。通過方差分析(見表4)可知接種21 d各處理之間差異顯著( sig<0.05)。

表5 接種21 d污染率Duncan法多重比較

從表5多重比較表可知，各處理之間差異顯著，青霉素控制的污染有一定的下降，但下降程度極其有限，主要的原因是青霉素對真菌無效。只殺死了瓶中細(xì)菌。本試驗中也發(fā)現(xiàn)在較高濃度的青霉素時不定芽的生長會受到一定的抑制。表現(xiàn)為莖尖彎曲，畸形等現(xiàn)象，新型抑菌劑“益培靈”的抑菌效果較為明顯，“益培靈”20 mg·L-1效果最佳，對不定芽沒有傷害。

3 結(jié)論與討論

自由人槭‘秋焰’是適合北方大部分地區(qū)的園林綠化樹種，具有適應(yīng)性廣、抗逆性強(qiáng)、樹形優(yōu)美，葉形清秀，葉色鮮紅艷麗等特點，是觀賞價值高的彩葉樹種[2-4]。近年來自由人槭組培工廠化育苗技術(shù)的研究越來越迫切。在組織培養(yǎng)工廠化育苗中，控制成本是影響工廠化能否繼續(xù)擴(kuò)大再生產(chǎn)、甚至存活的根本。污染控制又是關(guān)鍵。污染會影響組培工廠化甚至整個組培進(jìn)程，污染率越大，成本越大，有研究表明，隨著污染率的增加，成本將大大增加，當(dāng)污染率達(dá)到30%時，成本增加106%[5]。只有控制好污染，才能進(jìn)行正常的組培工廠化育苗生產(chǎn)。為了彌補(bǔ)物理方法的不足，常常在培養(yǎng)基里添加抗生素等物質(zhì)來防治污染發(fā)生。在萬年青莖段培養(yǎng)中，在培養(yǎng)基中加氯霉素，使其污染率從原來的81.55%降低到15.62%[6]。黃小榮等發(fā)現(xiàn)在香水白掌的組織培養(yǎng)中添加青霉素可抑制細(xì)菌污染[7]。但是也有很多研究表明加入抗生素會影響外植體的生長，甚至抑制生長[8]。另外相反的研究是在有些培養(yǎng)中，細(xì)菌或霉菌污染存在的情況下，某些組織塊會刺激的更加強(qiáng)大，微生物的存在已經(jīng)導(dǎo)致了令人意想不到的效果[9]。

“益培靈”為植物組織培養(yǎng)專用防污染殺菌劑，具有易溶解于水，120 ℃加熱2 h活性不下降的特性。我們通過試驗發(fā)現(xiàn)，在其他控制污染基礎(chǔ)上，添加“益培靈”后污染率下降，添加20 mg·L-1效果最好，培養(yǎng)21 d后污染率在4.5%。