朱昆，汪旭，代恩勇，孟慶妍，李忻※

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院，長(zhǎng)春 130021；2.長(zhǎng)春市中心醫(yī)院制劑室，長(zhǎng)春 130024；3.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，長(zhǎng)春 130033）

清麻防風(fēng)合劑為院內(nèi)制劑，處方由牡丹皮、苦杏仁、干姜、浮萍、白鮮皮、黃芪、丹參、白術(shù)、陳皮、防風(fēng)等中藥材加工制備而成，性狀為深褐色的液體，味苦，略酸，具有宣肺散寒、辛溫解表的功效，臨床主要用于寒冷型蕁麻疹的治療。牡丹皮為該方劑中的君藥，丹皮酚為牡丹皮的主要有效成分，具有抗氧化、抗菌抗炎、解熱陣痛、抗腫瘤及增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能等多種藥理作用[1-3]。

本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)清麻防風(fēng)合劑中丹皮酚的含量進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)建立丹皮酚含量測(cè)定的方法，為控制該產(chǎn)品質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010AHT 高效液相色譜儀（日本島津公司）；KQ3200E型超聲波處理器（昆山超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

清麻防風(fēng)合劑（批號(hào)：20170091、20170092、20170093，長(zhǎng)春市中心醫(yī)院制劑室）；丹皮酚（110708-201407，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；乙腈為色譜純，其它所用試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4-6]

色譜柱：WondaSil C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：乙腈-水（40∶60）；檢測(cè)波長(zhǎng)：274 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取適量的丹皮酚對(duì)照品，用95%乙醇配制成2μg/mL 的丹皮酚乙醇溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密量取本品（100 ℃水浴加熱30 min，冷卻至室溫后，將其搖勻，開(kāi)袋后量?。? mL，置于25 mL 具塞容量瓶之中，加入95%乙醇定容至25 mL，搖勻混合溶液，濾過(guò)，即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方中藥材比例，取除牡丹皮外的其它藥材按工藝流程制備成不含牡丹皮的陰性成品，按照“2.3”項(xiàng)下方法制成不含丹皮酚的陰性樣品溶液。

2.5 專屬性實(shí)驗(yàn)

采用“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別取對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液以及供試品溶液，對(duì)照品進(jìn)樣10L，供試品溶液進(jìn)樣20L，得相關(guān)HPLC 色譜圖。研究結(jié)果表明，丹皮酚出峰時(shí)間約17.75 min，陰性樣品溶液未見(jiàn)明顯雜質(zhì)峰干擾，可見(jiàn)，清麻防風(fēng)合劑組方中的其它成分在該檢測(cè)條件下對(duì)丹皮酚含量測(cè)定未產(chǎn)生影響，專屬性較強(qiáng)。見(jiàn)圖1～3。

圖1 丹皮酚對(duì)照品液相色譜圖Figure 1 High Performance Liquid Chromatography of Paeonol Reference Material

圖2 樣品液相色譜圖Figure 2 High Performance Liquid Chromatography of Sample

圖3 陰性樣品液相色譜圖Figure 3 High Performance Liquid Chromatography of Negative Sample

2.6 線性范圍考察

2.7 精密度考察

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批供試品（批號(hào)：20170091），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定丹皮酚色譜峰面積。得RSD 為0.63%（n=6），表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取清麻防風(fēng)合劑6 份（批號(hào)：20170091），按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積。結(jié)果，6 份樣品的平均含量為0.005 176 mg/mL，RSD 為0.47%，表明該方法測(cè)量結(jié)果的偏差小，重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取6 份已知含量樣品（批號(hào)：20170091，丹皮酚含量為0.005 176 mg/mL）適量，分別加入一定量丹皮酚對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定樣品中丹皮酚含量。結(jié)果，平均回收率為99.28%，RSD 為0.77%。

2.11 清麻防風(fēng)合劑中丹皮酚含量測(cè)定

按照“2.3”項(xiàng)下方法，取3 個(gè)批次的清麻防風(fēng)合劑樣品，制備3 批供試品溶液。按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別對(duì)3 個(gè)批次的供試品溶液丹皮酚含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 清麻防風(fēng)合劑中丹皮酚的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本研究在流動(dòng)相選擇過(guò)程中，曾試用乙腈-0.5%磷酸二氫鉀溶液（30∶70）、甲醇-水（45∶55）和乙腈-水（1∶1）為流動(dòng)相[4-6]，但制劑中丹皮酚色譜峰分度較差，最終確定乙腈-水（40∶60）為本研究流動(dòng)相，由液相圖譜可見(jiàn)，丹皮酚的分離度良好，可作為清麻防風(fēng)合劑含量測(cè)定的流動(dòng)相。

綜上，采用HPLC 法測(cè)定清麻防風(fēng)合劑中丹皮酚含量，可以有效控制該制劑的質(zhì)量，方法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性良好、穩(wěn)定可靠。