張熾明， 王卓， 李穩(wěn)磊， 喻嬋， 林忠偉△, 陳瀅宇

廣東藥科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 1心血管內(nèi)科, 3中醫(yī)科(廣東廣州 510080)； 2中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科(廣東廣州 510080)

高血壓和糖尿病是動脈硬化的主要危險(xiǎn)因素，動脈硬化的本質(zhì)是血管重塑，涉及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的變化。Fibulin-3作為ECM的一員，參與ECM結(jié)構(gòu)的合成與穩(wěn)定，對于研究血管重塑的發(fā)生發(fā)展具有重要意義[1]。目前，肱-踝脈搏波傳導(dǎo)速度(branchial-ankle Pulse Wave Velocity，baPWV)作為檢測大中動脈僵硬度的指標(biāo)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床[2]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性高血壓(essential hypertension,EH)患者血清Fibulin-3水平下降，并與baPWV呈負(fù)相關(guān)[3]，故設(shè)想EH合并2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)患者早期存在動脈硬化加劇的可能，探討此類患者Fibulin-3水平變化與baPWV的關(guān)系，同時(shí)檢測血液中表示炎癥指標(biāo)的超敏C反應(yīng)蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)和血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)的水平，探討Fibulin-3水平變化與hs-CRP和 AngⅡ的關(guān)系，為早期動脈硬化的發(fā)生提供新的治療靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年3月至2018年3月于我院心內(nèi)科住院的EH+T2DM患者55例(病例組)，其中男30例，女25例，年齡(63.65±7.432)歲；EH患者62例(對照組)，其中男37例，女25例，年齡(60.56±6.080)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡45～75歲；(2)明確診斷為EH，病程在5年以內(nèi)，未服用降壓藥或停藥1周及以上；(3)明確診斷為T2DM。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)急慢性感染、2周內(nèi)經(jīng)歷創(chuàng)傷或手術(shù)；(2)合并肝腎功能不全；(3)患惡性腫瘤、血液系統(tǒng)性疾病、甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減退、風(fēng)濕免疫性疾病者。EH診斷標(biāo)準(zhǔn)參見《2010年中國高血壓防治指南》；T2DM診斷標(biāo)準(zhǔn)參見《2013版中國2型糖尿病防治指南》。另外隨機(jī)納入體檢正常的健康者35例(正常組),其中男23例，女12例，年齡(61.57±7.524)歲。本研究取得所有納入對象的知情同意，并通過廣東藥科大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會審核。

1.2 檢測方法

1.2.1 baPWV檢測 被檢查者檢查前禁咖啡、濃茶，靜息平臥15 min后采用歐姆龍脈搏波速度自動測定儀測定baPWV。

1.2.2 血標(biāo)本Fibulin-3、hs-CRP、AngⅡ檢測 所有研究對象空腹采集靜脈血，3 000 r/min離心5 min后取上清液并凍存于-80℃?zhèn)溆?，成批檢測；采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測Fibulin-3(試劑盒購自上海江萊生物有限公司，貨號JL45946)，乳膠免疫比濁法檢測hs-CRP(試劑盒購自積水醫(yī)療科技有限公司，貨號201612007)，放射免疫(RIA)法測定AngⅡ(試劑盒購自北京北方生物技術(shù)研究所有限公司，貨號20170320)，所有操作均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；我院檢驗(yàn)科、放射免疫科協(xié)助完成hs-CRP和AngⅡ的檢測。

2 結(jié)果

2.1 各組患者一般資料比較 各組間性別、年齡、吸煙史、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、血脂[總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-C)、載脂蛋白AI(apo AI)、載脂蛋白B(apo B)]、血尿酸、血肌酐水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，各組間糖化血紅蛋白(HbA1C)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2 各組Fibulin-3、hs-CRP、AngⅡ、baPWV比較 Fibulin-3水平在3組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，病例組低于對照組(P<0.05)，對照組低于正常組(P<0.05)；hs-CRP、AngⅡ和baPWV水平在3組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，病例組高于對照組(P<0.05)，對照組高于正常組(P<0.05)，見表2。

2.3 Fibulin-3與baPWV、hs-CRP、AngⅡ的相關(guān)性分析 通過雙變量Pearson 相關(guān)性分析得出Fibulin-3與 baPWV、hs-CRP、AngⅡ均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。見表3。

項(xiàng)目病例組(n=55)對照組(n=62)正常組(n=35)P值性別(例)>0.05 男303723 女252512年齡(歲)63.65±7.4360.56±6.0861.57±7.52>0.05吸煙史(例)122216>0.05BMI(kg/m2)24.94±2.5124.84±3.0023.53±2.75>0.05TC(mmol/L)4.72±0.754.66±0.904.54±1.00>0.05TG(mmol/L)1.97±1.471.72±0.741.62±0.86>0.05HDL-C(mmol/L)1.15±0.231.19±0.281.18±0.23>0.05LDL-C(mmol/L)2.85±0.602.83±0.832.81±0.96>0.05VLDL-C(mmol/L)0.82±0.580.68±0.410.71±0.33>0.05apoB(g/L)0.91±0.211.01±0.260.94±0.28>0.05apoAI(g/L)1.34±0.201.39±0.241.40±0.21>0.05HbA1C(%)7.73±1.87?△5.76±0.446.02±1.66<0.05血尿酸(μmol/L)367.19±96.37392.84±96.75380.94±94.58>0.05血肌酐(μmol/L)74.72±18.4374.31±17.0472.88±15.08>0.05

*與正常組比較P<0.05； △與對照組比較P<0.05

項(xiàng)目病例組(n=55)對照組(n=62)正常組(n=35)P值Fibulin-3(ng/mL)40.92±21.84?△52.61±27.24?68.00±29.62<0.05hs-CRP(mg/L)5.96±2.93?△2.63±1.92?1.22±0.71<0.05AngⅡ(ng/L)55.28±4.97?△50.29±5.59?47.39±3.05<0.05baPWV(cm/s)1 870.33±371.16?△1 706.11±361.68?1 535.34±253.83<0.05

*與正常組比較P<0.05； △與對照組比較P<0.05

表3 Fibulin-3與baPWV、hs-CRP、AngⅡ相關(guān)性分析

3 討論

高血壓和糖尿病合并存在對心血管的危害有協(xié)同效應(yīng)，兩者并存心血管危害的凈效應(yīng)是普通人群的4～8倍[4]。有文獻(xiàn)報(bào)道，高血壓并發(fā)癥的患病率和病死率主要與動脈壁的損害有關(guān)，動脈壁的結(jié)構(gòu)和功能的改變甚至在高血壓的早期就已經(jīng)發(fā)生[5]。高血壓和糖尿病并存時(shí)，通過對動脈壁內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的損害顯著加速動脈硬化的進(jìn)程[6]。本研究納入對象病程均不超5年，以研究EH合并T2DM患者早期動脈損害情況及相關(guān)機(jī)制。

作為一種相關(guān)性好、操作簡便的檢測大中動脈僵硬度的方法，baPWV已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床[2]。baPWV值越大，動脈的順應(yīng)性越高，反之，動脈順應(yīng)性越低。本研究發(fā)現(xiàn)baPWV水平在病例組和對照組均高于正常組，病例組增高最為顯著，提示EH、T2DM均能加快baPWV，促進(jìn)動脈硬化的發(fā)展，EH合并T2DM患者動脈硬化的程度則更加嚴(yán)重，與陳芳等[6]的研究結(jié)果一致。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)Fibulin-3水平在病例組和對照組均低于正常組，病例組減低最為顯著，并且Fibulin-3與baPWV呈負(fù)相關(guān)。本課題組前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)血清Fibulin-3水平在EH患者中顯著低于正常人[3]。本次研究結(jié)果再次說明Fibulin-3水平變化與動脈僵硬程度密切相關(guān)，動脈硬化越嚴(yán)重，血清Fibulin-3水平下降越明顯。然而，F(xiàn)ibulin-3參與動脈硬化形成的過程并不明確。大量研究表明炎癥在動脈硬化形成的過程中起重要作用，可能是多種致動脈硬化因素致病機(jī)制的共同環(huán)節(jié)[7]。同時(shí)，不少研究發(fā)現(xiàn)炎癥因子hs-CRP、AngⅡ與baPWV存在相關(guān)性[8-9]。因此，我們推測Fibulin-3參與動脈硬化形成的過程與炎癥反應(yīng)相關(guān)。本研究進(jìn)一步檢測患者血清hs-CRP、AngⅡ水平，發(fā)現(xiàn)hs-CRP、AngⅡ在病例組和對照組均高于正常組，病例組增高最為顯著，另Fibulin-3均與hs-CRP、AngⅡ呈負(fù)相關(guān)，提示Fibulin-3參與動脈硬化形成的過程與hs-CRP、AngⅡ密切相關(guān)，動脈炎癥反應(yīng)越嚴(yán)重，F(xiàn)ibulin-3水平下降越明顯。

動脈硬化是血管重構(gòu)的其中一種表現(xiàn)，而血管重塑主要涉及細(xì)胞增殖，細(xì)胞死亡，細(xì)胞遷移，細(xì)胞外基質(zhì)的生成以及降解等4個(gè)過程[10]。據(jù)報(bào)道高水平hs-CRP使血管內(nèi)皮細(xì)胞增生和遷移，進(jìn)而促進(jìn)血管內(nèi)膜增厚，導(dǎo)致動脈硬化形成，進(jìn)而使血管彈性減退[11]。Ang Ⅱ參與炎癥反應(yīng)、細(xì)胞生長、細(xì)胞外基質(zhì)沉積以及凝血等過程，在調(diào)節(jié)血管壁結(jié)構(gòu)和功能的過程中發(fā)揮重要作用[12]。Fibulin-3是一組主要參與ECM結(jié)構(gòu)合成與穩(wěn)定的蛋白[1]。結(jié)合上述分析可以推測EH合并T2DM患者的血清Fibulin-3與hs-CRP、AngⅡ通過影響血管細(xì)胞的增生、遷移以及ECM變化共同參與血管重構(gòu)，表現(xiàn)為動脈硬化逐漸加重。然而，本研究為橫斷面研究，其中的具體發(fā)生機(jī)制仍需在分子層面進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，EH合并T2DM可加速動脈硬化的發(fā)展。Fibulin-3參與EH合并 T2DM患者血管重構(gòu)的過程，并與炎癥指標(biāo)hs-CRP、AngⅡ相關(guān)，F(xiàn)ibulin-3水平下降可能作為早期動脈硬化的敏感信號，對Fibulin-3進(jìn)行早期干預(yù)可能成為抗動脈硬化治療的新靶點(diǎn)。