王瀚

（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院，浙江 杭州 310006）

0 引言

非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）是全球范圍內(nèi)威脅人體肝臟的主要疾病之一，在歐美等發(fā)達國家，NASH是慢性肝病發(fā)病的首要病因[1]。NASH在病理變化中肝細胞脂肪變性和肝小葉內(nèi)炎癥浸潤發(fā)生情況很普遍，其中白介素-1（IL-1）在這一過程中發(fā)揮了很重要的作用[2]。重組白介素-1受體拮抗劑（Interleukin-1 Receptors Antagonist，IL-1RA）是人體內(nèi)產(chǎn)生的一種IL-1的拮抗劑，在NASH的發(fā)生發(fā)展變化中起到抑制IL-1誘導(dǎo)炎癥細胞引發(fā)炎癥的作用，但是由于機體自身產(chǎn)生的IL-1RA是有限的，目前這種治療不能得以廣泛開展[3]。本研究旨在探討rhIL-1RA對MCD飲食誘導(dǎo)NASH小鼠炎癥的作用及其作用機制，現(xiàn)將研究報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF級雄性3周齡C57BL/6J小鼠90只（購于上海西普爾-必凱實驗動物有限公司），體重15-20 g。隨機數(shù)字法將實驗動物分為3組，每組30只，標(biāo)記為正常對照組、模型組、干預(yù)組。先給予普通SPF級飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周；MCS飼料喂養(yǎng)正常對照組小鼠，MCD飼料喂養(yǎng)模型組、干預(yù)組小鼠，每日常規(guī)給予飲水，連續(xù)喂養(yǎng)4周后處死。

1.2 材料與試劑

人重組白介素-1受體拮抗劑（購于上海伍洋生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司）；引物（購于上海生工生物工程股份有限公司）；油紅O染色液（購于珠海Baso）。

1.3 實驗儀器

7180全自動生化分析（日本日立公司）；Tissuelyser全自動樣品快速研磨儀（上海凈信科技）；冷凍離心機（美國Beckman公司）；全自動酶標(biāo)儀（美國Bio-Rad公司）。

2 實驗方法

2.1 動物模型制備及干預(yù)

MCS飼料喂養(yǎng)正常對照組小鼠，MCD飼料喂養(yǎng)模型組、干預(yù)組小鼠，所有小鼠每日常規(guī)給予正常飲水，連續(xù)喂養(yǎng)4周后處死。模型組小鼠每日予1 mL生理鹽水腹腔注射，干預(yù)組小鼠每日人重組白介素-1受體拮抗劑20 mg/kg腹腔注射。

2.2 取材及觀察指標(biāo)

小鼠在各組所對應(yīng)的飼料條件下飼養(yǎng)4周后，禁食12 h，稱重，眼球取血，切除肝臟稱重。取左葉肝臟用4%多聚甲醛溶液固定組織，制作石蠟切片行HE染色，在鏡下觀察其組織病理變化。小鼠全血室溫靜置30 min，離心，取上清液，采用自動化生化分析儀測定血清 ALT、AST、HDL、LDL、TChol、TG。

2.3 統(tǒng)計學(xué)分析

3 實驗結(jié)果

3.1 實驗前后三組小鼠體重、肝重變化情況

試驗前，三組小鼠體重比較，其之間的差異不明顯（P＞0.05）；實驗后，模型組、干預(yù)組與正常組相比體重、肝重減少（P＜0.05）；干預(yù)組小鼠與模型組相比體重、肝重?zé)o明顯差異（P＞0.05），見表1。

表1 實驗前后三組小鼠體重、肝重變化情況（±s）

表1 實驗前后三組小鼠體重、肝重變化情況（±s）

組別 體重 實驗后肝重-實驗前 實驗后 -正常組 20.05±0.85 25.98±1.24 0.96±0.12模型組 19.78±0.79 15.23±0.65 0.42±0.06干預(yù)組 19.96±0.81 16.75±0.71 0.46±0.08

3.2 實驗后三組小鼠肝功能、血脂情況比較

模型組與干預(yù)組較正常組的ALT和AST高，其差異明顯（P＜0.05）；且干預(yù)組小鼠的ALT較模型組小鼠降低，其差異明顯（P＜0.05）；MCD飲食下的小鼠的HDL、LDL、TC、TG指標(biāo)要低于對照組，差異明顯（P＜0.05），見表2。

表2 實驗后三組小鼠肝功能、血脂情況比較（±s）

表2 實驗后三組小鼠肝功能、血脂情況比較（±s）

組別 ALT（U/L） AST（U/L） HDL（mmol/L） LDL（mmol/L） TC（mmol/L） TG（mmol/L）正常組 23.15±3.65 153.44±27.33 2.49±0.16 0.71±0.06 3.49±0.32 1.63±0.20模型組 187.46±36.99 276.38±48.27 1.13±0.09 0.33±0.04 1.79±0.18 1.11±0.15干預(yù)組 109.54±21.69 265.09±40.82 1.21±0.10 0.32±0.03 1.88±0.19 1.15±0.18

3.3 實驗后三組小鼠HE染色組織比較

實驗后模型組小鼠的脂肪樣變性、炎癥反應(yīng)均較對照組和干預(yù)組嚴(yán)重，其細胞內(nèi)有較大較多的脂肪滴，表現(xiàn)出嚴(yán)重的脂肪樣變性，細胞體積明顯增大，胞漿紅染增多；而正常組肝細胞內(nèi)無明顯空泡、脂肪滴，結(jié)構(gòu)清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)較完整，細胞無明顯增大，胞漿染色均一；干預(yù)組細胞形態(tài)介于上述兩者之間。

4 結(jié)果與討論

許多研究都發(fā)現(xiàn)，NASH的發(fā)病與人體機體的免疫功能紊亂有很大的關(guān)系，肝臟內(nèi)的巨噬細胞可以分泌很多炎性因子，可以造成NASH患者肝組織不斷發(fā)生炎癥反應(yīng)、進行肝細胞重塑，最終進入到肝硬化、肝功能衰竭的地步[4-5]。有少數(shù)研究發(fā)現(xiàn)，阻斷一些炎性因子的作用途徑可大大改善NASH患者的預(yù)后和體征，但是由于抑制的細胞炎性因子往往是單一的，其效果經(jīng)常不能達到最佳。因此找到抑制效果最佳的細胞因子抑制劑是目前研究該疾病治療的重點，在此基礎(chǔ)上再去尋找多靶點的藥物往往可以達到事半功倍的效果[6-8]。

大多數(shù)對NASH患者炎癥因子的研究在TNF-α、IL-6上面，較少有研究提到IL-1對NASH發(fā)展發(fā)生過程中的重要性。本研究探討了rhIL-1RA對MCD飲食誘導(dǎo)NASH小鼠炎癥的作用及其作用機制。通過MCD飲食建立的NASH小鼠模型在使用rhIL-1RA后其各項指標(biāo)均有不同程度的改善，在病理學(xué)上可以看到明顯的好轉(zhuǎn)，可以認為rhIL-1RA是一種有效的抗NASH藥物。