馬心慧，孫海昕，杜金贊，付 瑜，劉晨陽(yáng)

抑郁癥是一種常見以少言寡語(yǔ)、情緒低落、持續(xù)性疲乏、思維緩慢等為主要癥狀的精神疾病。研究發(fā)現(xiàn)，我軍抑郁癥問(wèn)題是一個(gè)亟待關(guān)注的重要心理衛(wèi)生問(wèn)題，已受到軍隊(duì)心理學(xué)與思想政治工作者的廣泛重視。本研究通過(guò)對(duì)OPRM1基因位點(diǎn)多態(tài)性與抑郁癥患者的關(guān)聯(lián)性研究，旨在揭示抑郁癥的致病基因，實(shí)現(xiàn)基因診斷，從而為軍隊(duì)選拔重要領(lǐng)域或崗位人才時(shí)規(guī)避易患人群提供科學(xué)的指導(dǎo)方法，也為增強(qiáng)部隊(duì)?wèi)?zhàn)斗力提供堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 (1) 病例組：選取2016-01至2017-01在黑龍江省哈爾濱市第一專科醫(yī)院門診及住院的患者，共369例，均為男性漢族，年齡18～49歲，按照年齡分為兩組：Ⅰ組為18～33歲，Ⅱ組為34～49歲；入選標(biāo)準(zhǔn)：符合美國(guó)精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第4版(DSM.IV)診斷標(biāo)準(zhǔn)，PANSS評(píng)分>60分；無(wú)煙草、乙醇及其他精神活性物質(zhì)濫用史；中國(guó)北方地區(qū)漢族自然人群；患者及家屬知情并同意；研究個(gè)體之間無(wú)血緣關(guān)系。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有心膽肝腎等軀體疾病、內(nèi)分泌及免疫系統(tǒng)疾病、營(yíng)養(yǎng)不良及其他精神疾患；有過(guò)敏及激素治療史，接受過(guò)免疫制藥治療；不同意參加本研究者。(2)對(duì)照組：選取同期某部隊(duì)醫(yī)院體檢中心部隊(duì)健康官兵738例，均為男性漢族，年齡與病例組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 按漢密爾頓抑郁量表(HAMD)17對(duì)抑郁癥狀嚴(yán)重程度做評(píng)估[1]。對(duì)合格的入選病例組人員征得患者及家屬同意后，完成HAMD-17量表和基本信息調(diào)查表。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)和聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物(PCR-SSP)分析技術(shù)檢測(cè)OPRM1基因上的2個(gè)位點(diǎn)。采集患者靜脈血5 ml于EDTA抗凝管充分混勻，分裝。PCR擴(kuò)增采用12 μl反應(yīng)體系，含50～200 ng基因組DNA，2×PCR緩沖液，15 mmol/L MgCl20.5 μl，5 μmol/L引物各0.5 μl，0.5 UTaq酶0.5 μl(北京天根醫(yī)藥公司)。取20 μl PCR產(chǎn)物，建立總體積為20 μl的酶切反應(yīng)體系，加入相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶(NEB，北京)，37 ℃溫育過(guò)夜，4 ℃水浴15 min終止反應(yīng)。酶切產(chǎn)物用2.0%瓊脂糖凝膠(含溴化乙錠)電泳分離，經(jīng)凝膠成像儀系統(tǒng)(Bio-RadgelDoc2000，美國(guó))處理后進(jìn)行基因型判讀，記錄并保存結(jié)果。OPRM1基因兩個(gè)位點(diǎn)引物參照文獻(xiàn)[2]。所有位點(diǎn)的引物、PCR反應(yīng)、產(chǎn)物長(zhǎng)度、退火溫度和內(nèi)切酶(表1)。

表1 OPRM1基因擴(kuò)增位點(diǎn)的引物序列、退火溫度及酶切片段

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用DNAMAN軟件包對(duì)測(cè)序峰圖進(jìn)行序列判讀及比對(duì)，采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)、基因、基因型頻率及關(guān)聯(lián)性檢驗(yàn)，Haploview軟件進(jìn)行單倍型重構(gòu)及單倍型關(guān)聯(lián)分析。ReviewManage4.2(OxfordEngland)軟件進(jìn)行Meta分析。病例組和對(duì)照組間基因型和等位基因頻率的計(jì)算采用直接計(jì)數(shù)法，組間基因型頻率及等位基因頻率的差異性比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

OPRM1基因rs1799971C/T與rs648893G/A位點(diǎn)多態(tài)性在對(duì)照組中的分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，且兩組人群的年齡均匹配。OPRM1基因啟動(dòng)子區(qū)rs1799971C/T與rs648893G/A位點(diǎn)多態(tài)性的基因型與等位基因頻率分布見表2。OPRM1基因啟動(dòng)子區(qū)rs1799971C/T與rs648893G/A位點(diǎn)在各自內(nèi)切酶消化前后得到的片段見圖1、2。

連鎖不平衡程度統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，未發(fā)現(xiàn)病例組和對(duì)照組的兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)之間呈明顯連鎖不平衡現(xiàn)象。單體型關(guān)聯(lián)分析顯示，所有單體型在兩組之間分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

OPRM1基因rs1799971位點(diǎn)基因型和等位基因頻率在34～49歲病例組及對(duì)照組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(OR=0.309,95%CI:0.218～0.439,P<0.01)。而rs648893位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在兩個(gè)年齡組中病例組的基因型和等位基因頻率與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

圖1 中國(guó)北方男性rs799971C/T未經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化所得片段

表2 中國(guó)北方兩組OPRM1基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型和基因頻率年齡分布 (n；%)

注：①Ⅰ組：年齡為18～33歲；②Ⅱ組：年齡為34～49歲

圖2 中國(guó)北方男性rs648893G/A經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化后所得消化片段

消化之前：1,3,5和7道為180bp碎片。消化后：第2道180bp代表純合子AA基因型(突變型)；第4和第8道155bp代表純合子GG基因型(野生型)；6道180bp和155bp代表AG基因型(雜合子)

3 討 論

抑郁癥具有較高的患病率、復(fù)發(fā)率、死亡率、致殘率，是危害人類身心健康的常見精神類疾病。有研究表明，抑郁癥平均發(fā)病年齡為25歲，多數(shù)發(fā)病于15～19歲和25～29歲年齡段[3]，而且有10%～15%的抑郁癥患者死于自殺。國(guó)內(nèi)外研究表明，軍人大多處于這個(gè)年齡階段，也是抑郁癥的高危人群[4，5]。有學(xué)者對(duì)近20年來(lái)我國(guó)軍人心理健康特點(diǎn)進(jìn)行了回顧性研究，發(fā)現(xiàn)我國(guó)軍人的心理健康水平偏低，抑郁是主要的心理問(wèn)題之一[4]。作戰(zhàn)部隊(duì)基層官兵的抑郁自評(píng)量表(SDS)陽(yáng)性率60.66%，焦慮自評(píng)量表(SAS)陽(yáng)性率19.79%，而且軍人中抑郁的比例有上升趨勢(shì)。

OPRM1位于基因組第6號(hào)染色體上，是人類編碼阿片受體的基因，目前，國(guó)內(nèi)外OPRM1基因與精神神經(jīng)類疾病的關(guān)聯(lián)性研究報(bào)道不多[6]。本研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)OPRM1基因rs648893G/A基因多態(tài)性與抑郁癥存在關(guān)聯(lián)。分析其原因可能是基因多態(tài)性有明顯的種族和地域差異，這種差異有可能導(dǎo)致同一種突變?cè)诓煌娜巳寒a(chǎn)生不同的表型效應(yīng)，導(dǎo)致各個(gè)研究結(jié)果的不一致。近年來(lái)，大量的研究證實(shí)了遺傳學(xué)在抑郁癥的致病因素中發(fā)揮一定的作用，與抑郁癥有關(guān)的免疫系統(tǒng)的遺傳學(xué)已發(fā)現(xiàn)，某些細(xì)胞因子的多態(tài)性如編碼IL-1、TNF-α的基因可能使個(gè)體更易發(fā)展成抑郁癥[7]。

關(guān)于OPRM1基因與抑郁癥關(guān)聯(lián)性的報(bào)道尚屬首次。筆者未能發(fā)現(xiàn)本研究rs648893G/A多態(tài)性與抑郁癥的易感性相關(guān)：抑郁癥可能是一種多因素疾病，OPRM1基因多態(tài)性可能只發(fā)揮相對(duì)較小的作用；可能還有其他基因變異參與了抑郁癥的病理生理過(guò)程。筆者曾發(fā)現(xiàn)，TNF-α基因-857C/T位點(diǎn)與重性抑郁障礙癥存在關(guān)聯(lián)恰恰證明了這一點(diǎn)。后期筆者將按照不同軍種、年齡、軍齡、職別、文化程度等對(duì)軍人分組進(jìn)行研究，再通過(guò)體內(nèi)和體外研究將基因多態(tài)性與mRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)聯(lián)系起來(lái)，以揭示OPRM1基因變異對(duì)表達(dá)水平產(chǎn)生的影響。

由此可見，從多角度研究闡明抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，尋找潛在致抑郁靶點(diǎn)，最終實(shí)現(xiàn)基因診斷和基因治療將具有重大的理論價(jià)值和現(xiàn)實(shí)的指導(dǎo)意義。尤其是研究成果如能在部隊(duì)體檢中推廣，這對(duì)重要軍事領(lǐng)域及崗位的人才的選拔非常重要，可以實(shí)現(xiàn)規(guī)避易患人群。本研究成果將有助于研發(fā)更有效、更特異的抗抑郁藥物，如能實(shí)現(xiàn)基因治療，將能降低部隊(duì)官兵抑郁癥的發(fā)生或提高患病后的治療效果，從而減少自然減員，提高部隊(duì)作戰(zhàn)能力。

總之，本研究證實(shí)OPRM1基因第一外顯子區(qū)rs1799971C/T位點(diǎn)等位基因的多態(tài)性與中國(guó)北方漢族抑郁癥患者的發(fā)病呈正相關(guān)，該突變可能會(huì)增加抑郁癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。