王瀚萱，鄭 巍，董家瀟，陳海生，郭良君*，金永生

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)解放軍第九八臨床學(xué)院,浙江湖州 313000；2.解放軍第九八醫(yī)院藥械科,浙江湖州 313000;3.海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室，上海 200433；4.海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院有機(jī)化學(xué)教研室，上海 200433)

南五味子是木蘭科植物華中五味子SchisandrasphenantheraRehd.et Wils.的干燥成熟果實(shí)[1]，主產(chǎn)于山西、陜西、湖北、湖南、四川、貴州、云南等地[2]。南五味子性味酸、甘、溫，歸肺、心、腎經(jīng)，作為傳統(tǒng)中藥材，具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心的功效[1]。南五味子的低極性化學(xué)成分主要為倍半萜類化合物(包括烯烴及含氧衍生物，如醇、酮、醚)，同時(shí)還含有部分三萜類及少量脂肪酸等化合物[3-13]，具有鎮(zhèn)咳、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)、抗纖溶酶原激活的作用[14]。文獻(xiàn)報(bào)道南五味子的低極性成分多采用水蒸氣蒸餾法、超臨界CO2提取法提取[5,6]。本研究采用GC-MS法分析湖南產(chǎn)的南五味子石油醚提取部位的化學(xué)成分，鑒定了47個(gè)化合物，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材 料

Thermo Trace GC Ultra氣相色譜儀、Thermo DSQ Ⅱ質(zhì)譜儀、TR-35MS石英毛細(xì)管柱和Xcalibur工作站(美國賽默飛世爾公司)。提取所用試劑均為化學(xué)純，購自上海泰坦科技有限公司。南五味子干燥果實(shí)購自湖州心良藥業(yè)有限公司，產(chǎn)地湖南，經(jīng)海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室張漢明教授鑒定為南五味子SchisandrasphenantheraRehd.et Wils.的干燥成熟果實(shí)。其他試劑均為分析純，水為重蒸水，載氣為高純度氦氣。

2 方法和結(jié)果

2.1 低極性化學(xué)成分的提取 30 kg南五味子果實(shí)粉碎后用240 L 95%乙醇熱提取3次。過濾除去濾渣并收集提取液，提取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至沒有乙醇味道的浸膏(15 L)，然后補(bǔ)充5 L水稀釋，再用石油醚(60～90 ℃)萃取稀釋后的浸膏5次，每次2 L，收集石油醚萃取液(共10 L)。石油醚萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮成浸膏(25 g)。取1 g浸膏，置20 ml 量瓶中，加入80%甲醇，超聲、加熱使其完全溶解，放置、冷卻。再加入80%甲醇定容，搖勻、放置。再吸取 1 ml定容后的浸膏液，0.45 μm微孔濾膜過濾后待測(cè)。

2.2 色譜條件和質(zhì)譜條件 TR-35MS石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，程序升溫，起始溫度40 ℃，保持 2 min后以10 ℃/min的速度升至300 ℃并保持5 min。汽化溫度250 ℃，進(jìn)樣量1 μl，分流比10∶1。載氣為高純度氦氣，流速1.0 ml/min。電噴霧離子源(ESI)；離子源溫度250 ℃；電子能量：70 eV；掃描范圍：50～650m/z。

2.3 測(cè)定和分析 按2.2項(xiàng)下條件分析南五味子石油醚提取物，30 min后得到南五味子低極性化學(xué)成分的總離子流圖，見圖1。共檢測(cè)出96個(gè)峰，通過檢索NIST08光譜數(shù)據(jù)庫，按60%以上匹配率[正匹配值(SI)和反匹配值(RSI)均>600，最大值1000]，并結(jié)合質(zhì)譜裂解規(guī)律確定其化學(xué)成分。采用峰面積歸一法通過Xcalibur化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，測(cè)得各個(gè)化學(xué)成分在石油醚提取部位中的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。本研究共鑒定出47個(gè)化合物，其中13個(gè)化合物是首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)(結(jié)果見表1)。南五味子的低極性化學(xué)成分中含量最高的是倍半萜類化合物，占82.35%(無環(huán)倍半萜1個(gè)，占0.37%；單環(huán)倍半萜4個(gè)，占2.19%；雙環(huán)倍半萜14個(gè)，占33.67%；三環(huán)倍半萜13個(gè)，占46.12%)。其次是脂肪酸及其酯類化合物，占5.8%。含量最高的兩個(gè)化學(xué)成分是喇叭烯氧化物(Ⅱ)(占22.71%)和別香橙烯氧化物(Ⅱ)(占11.98%)，見圖2。

圖1 南五味子低極性化學(xué)成分的總離子流譜圖Figure 1 Total ion chromatogram of low polarity components of Schisandrae Sphenantherae Fructus

3 討 論

本研究首次用乙醇提取后石油醚萃取法獲得了南五味子的低極性化學(xué)成分，并對(duì)其進(jìn)行了GC-MS分析，所得結(jié)果與采用水蒸氣蒸餾法、超臨界CO2提取法、索式提取法獲得的南五味子揮發(fā)油的分析結(jié)果相比，主要成分都是倍半萜，但倍半萜的成分及含量與各文獻(xiàn)報(bào)道的均有差異[3-9]。文獻(xiàn)報(bào)道的揮發(fā)油中含量高的檀香烯[8，10]在本法獲得的低極性化學(xué)成分中含量很低，化合物石竹烯、雪松烯未在本研究結(jié)果中出現(xiàn)。文獻(xiàn)[7]報(bào)道南五味子莖藤中石竹烯含量高，而南五味子果實(shí)中未測(cè)出。另外，本研究獲得了脂肪酸及其酯類化合物9個(gè)，含量約占5.8%，而其他提取方法獲得的南五味子果實(shí)的揮發(fā)油中少有脂肪酸及其酯類化合物，可見乙醇提取后再用石油醚萃取獲得了更復(fù)雜的化學(xué)成分及更加豐富的脂溶性成分。此外，還可能與藥材的用量、產(chǎn)地、采收時(shí)間及其干燥、儲(chǔ)藏方法有關(guān)，有必要進(jìn)一步對(duì)比分析。本研究用醇提再萃取的方法更接近于中藥材日常使用時(shí)“水煎、藥酒泡”的提取方法，因此獲得的化學(xué)成分更貼近中藥用藥時(shí)的成分。

與之前報(bào)道的同法測(cè)定北五味子果實(shí)低極性化學(xué)成分[15]相比，南、北五味子中倍半萜的含量都很高(>80%)，重合的萜類化合物有檀香醇、杜松醇等11個(gè)；含量較高的化合物中都有別香橙烯氧化物(Ⅱ)。區(qū)別較大的是石油醚萃取法獲得的北五味子低極性化學(xué)成分中脂肪族化合物含量更高(10%)，數(shù)量更多(30個(gè))。

表1 南五味子低極性化學(xué)成分分析結(jié)果Table 1 Analysis results of low polarity components of Schisandrae Sphenantherae Fructus

a：首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)

圖2 喇叭烯氧化物(Ⅱ)和別香橙烯氧化物(Ⅱ)的質(zhì)譜圖Table 2 The mass spectra of ledene oxide-(Ⅱ) and alloaromadendrene oxide-(Ⅱ)A：喇叭烯氧化物(Ⅱ)；B：別香橙烯氧化物(Ⅱ)

化合物喇叭烯氧化物(Ⅱ)、別香橙烯氧化物(Ⅱ)的藥理研究顯示， 其具有抗菌作用[16]， 含有這兩種化學(xué)成分的揮發(fā)油具有抗氧化作用[17]，這也提示了開發(fā)五味子作為抗氧化性藥物的可行性。但喇叭烯氧化物(Ⅱ)、別香橙烯氧化物(Ⅱ)是否是南五味子中最有效的抗氧化性成分還有待進(jìn)一步的研究。本研究中有13種成分是首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)(見表1)，補(bǔ)充了南五味子的化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫，為進(jìn)一步開發(fā)提供了一定的參考。