徐海煜 魚 軍 葛 鵬

常見腫瘤標(biāo)記物為AFP、CEA、CA19-9和CA125。臨床上腫瘤標(biāo)記物被用于發(fā)現(xiàn)腫瘤患者、篩選腫瘤高危人群、判斷腫瘤發(fā)展程度、鑒別腫瘤的良惡性和對(duì)術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的檢測(cè)[1]。既往研究表明各腫瘤標(biāo)記物單獨(dú)檢測(cè)效果遠(yuǎn)不及聯(lián)合檢測(cè)敏感度高，特異性強(qiáng)，且存在難以消除的局限性[2-4]。本研究通過(guò)回顧分析542例肝臟和膽道系統(tǒng)惡性腫瘤患者資料，在考慮到患者年齡、性別和有無(wú)乙肝病史的情況下，探討發(fā)現(xiàn)四種腫瘤標(biāo)記物(AFP、CEA、CA19-9和CA-125)單獨(dú)和結(jié)合檢測(cè)惡性腫瘤的差距，從而為臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2014年3月至2016年3月入我院接受肝臟良性腫瘤(肝細(xì)胞腺瘤、肝管細(xì)胞腺瘤)，原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌，肝內(nèi)結(jié)石，化膿性膽管炎，膽總管結(jié)石治療的患者和接受常規(guī)體檢者共542例，非小細(xì)胞癌(鱗狀細(xì)胞癌198例、腺癌107例、未分化的大細(xì)胞癌121例)和小細(xì)胞癌116例，根據(jù)臨床診斷病情的良惡性共分為三組：①良性腫瘤組(肝臟良性腫瘤，膽道系統(tǒng)良性腫瘤)患者182例，男性92例，女性90例，性別比1.02/1，其中15例有乙肝病史；②原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌組患者251例，男性142例，女性109例，性別比1.30/1，其中45例有乙肝病史；③正常組組患者109例，其中男性55例，女性54例，僅12例有乙肝病史。本研究獲我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或近親屬對(duì)研究方案簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)[5]：①不限男女，年齡18～90歲；②有肝臟和膽道系統(tǒng)疾病病癥者；③手術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有肝癌或膽道系統(tǒng)癌細(xì)胞。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者狀況極差，無(wú)法接受手術(shù)治療者；②患有肝硬化、糖尿病、胰腺炎等。

1.3 研究方法

對(duì)所有患者(空腹?fàn)顟B(tài))抽血，血液樣本抗凝劑，低溫冷藏。通過(guò)樣品濃度和對(duì)應(yīng)的軟件配置所需的標(biāo)本濃度。抗原抗體特異性識(shí)別原理檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物(AFP、CEA、CA19-9和CA-125)，通過(guò)將各標(biāo)本血樣和放光物質(zhì)標(biāo)記的生物抗體控溫培育[6-8]，反應(yīng)充分后除去標(biāo)記抗體，用特定的生物測(cè)光儀測(cè)結(jié)合物的發(fā)光值，記錄數(shù)據(jù)。具體操作如下：將各血液樣本從冷藏箱取出后置于室溫10 min后加入9倍的蒸餾水稀釋待用。待測(cè)樣本，標(biāo)準(zhǔn)樣品分別置于不同的微型反應(yīng)器中，分別加入標(biāo)記不同腫瘤標(biāo)記物(AFP、CEA、CA19-9和CA-125)的發(fā)光性生物抗體40 μl，混合均勻。37 ℃恒溫箱反應(yīng)1 h。洗液：除去微型反應(yīng)器的多余液體，分別加入200 μl洗液除去未反應(yīng)完全的發(fā)光性生物抗體，靜止1 min；重復(fù)操作3次，使多余抗體洗凈。測(cè)定：將發(fā)光底物液置于測(cè)光儀測(cè)量發(fā)光底物發(fā)光值RLU，將數(shù)據(jù)傳入連接測(cè)光儀控制計(jì)算機(jī)中。

判斷標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤標(biāo)記物AFP、CEA、CA19-9和CA-125的臨界值分別為25 U/ml、4.8 U/ml、38 U/ml、34 U/ml，若測(cè)量值大于臨界值，結(jié)果顯示為陽(yáng)性；多腫瘤標(biāo)記物結(jié)合檢測(cè)時(shí)，以正常者的RLU值判斷是否為陽(yáng)性率，若高于，則呈陽(yáng)性。

1.4 儀器及試劑

儀器：生物芯片檢測(cè)儀、電熱恒溫水溫箱、光化學(xué)分析儀等；試劑：羅氏2010型電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及測(cè)定AFP、CEA、CA-125及CA19-9化學(xué)發(fā)光免疫試劑盒。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 腫瘤標(biāo)記物AFP、CEA、CA19-9和CA-125檢測(cè)結(jié)果

良性腫瘤組和原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌組AFP、CEA、CA19-9和CA-125檢測(cè)值均明顯高于正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 良惡性腫瘤組及正常組中腫瘤標(biāo)記物AFP、CEA、CA19-9和CA-125檢測(cè)結(jié)果

2.2 腫瘤指標(biāo)的診斷價(jià)值

在AFP、CEA、CA19-9和CA-125聯(lián)合檢測(cè)中，原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌組敏感度達(dá)64.5%，良性腫瘤組敏感度為61.1%，正常組的敏感度為40.9%，見表2。

表2 腫瘤指標(biāo)的診斷結(jié)果的敏感度和特異性/%

2.3 乙肝病史對(duì)腫瘤指標(biāo)的影響

65例有乙肝患者的AFP值為(400.0±100.1)U/ml，無(wú)乙肝患者的AFP值為(324.6±154.9)U/ml，前者顯著更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.008)；而CEA、CA19-9和CA-125檢測(cè)值未見明顯差異(P>0.05)，見表3。

表3 乙肝與各腫瘤標(biāo)記物指標(biāo)的關(guān)系

3 討論

腫瘤標(biāo)記物是腫瘤細(xì)胞侵染宿主細(xì)胞后分泌的1種物質(zhì)，多為抗原，酶，激素等，一般來(lái)說(shuō)，宿主細(xì)胞出現(xiàn)過(guò)激反應(yīng)而分泌的物質(zhì)也屬于標(biāo)記物，這一類物質(zhì)是腫瘤細(xì)胞良惡性病變或轉(zhuǎn)變過(guò)程細(xì)胞特征、腫瘤擴(kuò)散速率和發(fā)展的反映[9-11]。據(jù)世界衛(wèi)生組織在《全球癌癥報(bào)告》的報(bào)道顯示，原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌在中國(guó)新增病例已居世界第一，治療此類癌癥刻不容緩[12]。由于致癌因子的累積作用，原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌發(fā)病年齡一般在40歲后，因此如何提前檢測(cè)和診斷肝癌是治療最好方法之一[13]。影像學(xué)技術(shù)定位肝癌患者早期發(fā)現(xiàn)率極低，即使中晚期發(fā)現(xiàn)肝癌，治療也會(huì)對(duì)患者及其家人造成身心上的巨大壓力。腫瘤標(biāo)記物成為早期發(fā)現(xiàn)和診斷消化系統(tǒng)癌性疾病首選，本研究探討的腫瘤標(biāo)記物聯(lián)合檢測(cè)針對(duì)于肝臟腫瘤的診斷，極大降低漏檢率[14-15]。

本研究表明，各組患者單一腫瘤標(biāo)記物指標(biāo)不具有代表性，單獨(dú)檢測(cè)時(shí)指標(biāo)會(huì)出現(xiàn)陰性，所以單獨(dú)檢測(cè)帶有一定局限性。各腫瘤標(biāo)記物單獨(dú)檢測(cè)時(shí)意義差別不大，雖然AFP致力于肝癌早期發(fā)現(xiàn)，而CA-125和CA19-9則更傾向檢測(cè)膽道系統(tǒng)惡性腫瘤，但是多種惡性腫瘤均會(huì)有各腫瘤標(biāo)記物的變化。本研究進(jìn)行了腫瘤標(biāo)記物單獨(dú)檢測(cè)，兩兩聯(lián)合檢測(cè)和多種聯(lián)合實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)聯(lián)合多種腫瘤標(biāo)記物(AFP、CEA、CA19-9和CA-125)檢測(cè)有效提高了檢測(cè)敏感度，這對(duì)原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌早期診斷意義重大，能有效降低漏診率。研究發(fā)現(xiàn)同一種腫瘤標(biāo)記物可由多種腫瘤細(xì)胞或同種腫瘤細(xì)胞不同組織和器官分泌，而不同標(biāo)記物又可以僅有1種腫瘤細(xì)胞分泌，因此結(jié)合多種腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)更具全面性，能彌補(bǔ)單一的不足，并且聯(lián)合檢測(cè)能提高各腫瘤標(biāo)記物的敏感度。臨床資料分析表示，乙肝患者體內(nèi)肝功能異常，體內(nèi)AFP較非乙肝患者高，會(huì)干擾對(duì)肝臟惡性腫瘤檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)應(yīng)考慮這一因素。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)患有乙肝的患者患上肝癌的幾率大于無(wú)乙肝患者的，也就是說(shuō)乙肝與肝癌的發(fā)生有一定聯(lián)系，在肝癌患者中乙肝病毒攜帶者和乙肝患者的AFP較無(wú)乙肝病史的高，因此也要考慮乙肝對(duì)聯(lián)合檢測(cè)的影響。

綜上所述，臨床檢測(cè)原發(fā)性及繼發(fā)性肝癌要結(jié)合多種腫瘤標(biāo)記物，可提高檢測(cè)準(zhǔn)確率，同時(shí)要將患者有無(wú)乙肝病史情況加以考慮，進(jìn)一步提高檢測(cè)準(zhǔn)確率。