范 葉，易澤夫，王壯波

(1.長(zhǎng)沙市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心，湖南 長(zhǎng)沙 410008；2.桃江縣畜牧水產(chǎn)局，湖南 桃江 413400）

基質(zhì)效應(yīng)是指樣品基質(zhì)中的某些共提物組分對(duì)待測(cè)物濃度或質(zhì)量測(cè)定準(zhǔn)確度的影響。農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)最先是由Erney[1]在1993年首次提出，近年來(lái)，隨著農(nóng)藥殘留分析規(guī)范化程度的不斷提高，基質(zhì)效應(yīng)現(xiàn)象日益受到重視。目前關(guān)于農(nóng)殘基質(zhì)干擾效應(yīng)問(wèn)題，研究方向主要集中在不同樣品種類、基質(zhì)類型和濃度、農(nóng)藥品種以及儀器條件等對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)基質(zhì)效應(yīng)的影響[2-6]，并提出了很多解決基質(zhì)效應(yīng)的辦法[7-14]。試驗(yàn)利用3種不同型號(hào)的儀器——?dú)庀嗌V（Agilent7890A、Thermo1310）、氣相串聯(lián)質(zhì)譜（Agilent GC7890-MS-MS7000C）（簡(jiǎn)稱：7890A、1310、GC-MS-MS），根據(jù)NY/T 761—2008標(biāo)準(zhǔn)方法前處理，采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)4種不同蔬菜中分別添加4種有機(jī)氯和擬菊酯類的農(nóng)藥進(jìn)行回收校正，比較不同的校正溶液、不同儀器以及不同的樣品類型對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的基質(zhì)效應(yīng)的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

蔬菜樣本：選擇結(jié)球白菜、結(jié)球甘藍(lán)、黃瓜、辣椒4種蔬菜為試驗(yàn)樣品。

主要儀器：氣相色譜儀（Agilent7890A、Thermo1310 ）、 ECD檢測(cè)器、氣相串聯(lián)質(zhì)譜（Agilent GC7890-MS-MS7000C）、高速勻漿機(jī)、氮吹儀等。

主要試劑：乙腈、丙酮 、正己烷（均為色譜純）、 氯化鈉 （分析純）。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：腐霉利、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯4種有機(jī)氯、擬菊酯類農(nóng)藥，濃度均為1 000 mg/L（均購(gòu)買自天津農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心），分別吸取上述農(nóng)藥各0.05 mL至5 mL容量瓶中，用正己烷定容，配成10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理

按照NY/T 761—2008標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行樣品前處理。

1.2.1.1 試樣制備 取4種蔬菜可食部分，采用四分法進(jìn)行取樣，切碎混勻后放入食品加工器粉碎后備用。

1.2.1.2 樣品提取 分別稱取4種蔬菜樣品試樣15.0 g各4份放入100 mL試樣瓶中，其中1份試樣為空白基質(zhì)，其他3份試樣作為3個(gè)添加回收試驗(yàn)平行樣品。添加方法為分別取10 mg/L 的上述混和標(biāo)準(zhǔn)溶液0.15 mL于3份平行樣中，渦旋均勻后靜置15 min做試樣添加回收（樣品添加濃度為0.10 mg/kg）；然后，在各試樣瓶中分別加入30 mL乙腈，在高速勻漿機(jī)中勻漿2 min后用濾紙過(guò)濾，收集濾液并轉(zhuǎn)移到裝有 5～7 g 氯化鈉的100 mL具塞量筒中，收集濾液30～40 mL，蓋上塞子劇烈震蕩1 min后置于室溫下靜置30 min，使乙腈和水相分層。

1.2.1.3 樣品凈化 從以上每個(gè)具塞量筒中用移液管各吸取10.0 mL乙腈溶液，并分別放入25 mL燒杯中，將燒杯置于60 ℃的水浴鍋上蒸至近干，加入2.0 mL正己烷，過(guò)Florisil固相萃取柱凈化。過(guò)柱方法如下：Florisil固相萃取小柱依次用5 mL的正己烷＋丙酮（體積比90∶10）、5 mL正己烷預(yù)淋洗條件化，然后立即將待凈化液倒入小柱，最后再用10 mL正己烷＋丙酮（體積比90∶10）溶液少量多次洗脫，收集試樣洗脫液于15 mL刻度離心管，在5 0 ℃水浴條件下將盛有淋洗液的離心管用氮吹儀吹至近干（小于5 mL），用正己烷定容至5.0 mL。分別作為備用空白基質(zhì)溶液和樣品添加回收待測(cè)溶液。

1.2.2 分析條件

Agilent 7890A：ECD操作條件為柱溫160 ℃（保持1 min），以6 ℃/min的速度升溫至260 ℃ (保持8 min)；色譜柱：HP-5MS 30 m×0.25 mm×0.25 μm；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；檢測(cè)器溫度：300 ℃；載氣流速：1.5 mL/min；氫氣流速：0 mL/min；空氣流速：0 mL/min。

Thermo1310：ECD操作條件為柱溫：160 ℃，以10 ℃/min的速度升溫至240 ℃，后以6 ℃/min升溫至280 ℃（保持8 min）；色譜柱：HP-5MS 30 m×0.25 mm×0.25 μm；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；檢測(cè)器溫度：300 ℃；載氣流速：1.5 mL/min；氫氣流速：0 mL/min；空氣流速：0 mL/min。

Agilent GC7890-GC-MS-MS7000C：ECD操作條件：柱溫：70 ℃（保持1 min），以50 ℃/min的速度升溫至150 ℃，再以6 ℃/min的速度升溫至2 8 0 ℃（保持6 m i n）；色譜柱：HP-5MS；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；采集方式：MRM；離子化方式：EI；離化能量：70 EV；離子源溫度：280 ℃；4級(jí)桿溫度：180 ℃；載氣流速：1.267 mL/min。

1.2.3 工作標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

吸取1.1中配制的10 mg/L 腐霉利、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯4種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.05 mL，用1.2.1處理好的4種蔬菜空白基質(zhì)溶液和純?nèi)軇┱和槿芤悍謩e定容至5個(gè)5 mL的容量瓶中，配制成4種0.1 mg/L的蔬菜基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、1種正己烷溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液，共5種標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)用的所有經(jīng)過(guò)前處理好的農(nóng)藥添加待測(cè)樣品和配制好工作標(biāo)準(zhǔn)溶液分別裝入3個(gè)1 mL樣品瓶中分成3組，每組分別用Thermo1310、Agilent7890A、Agilent GC7890-GC-MSMS7000C這3種儀器進(jìn)行上機(jī)測(cè)定。所有數(shù)據(jù)分別用1.2.3中的5種標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正分析，然后按不同標(biāo)準(zhǔn)溶液分類校正檢測(cè)結(jié)果、標(biāo)樣和樣品為同一基質(zhì)校正的檢測(cè)結(jié)果、不同待測(cè)樣品類型以及3種不同儀器分類的所有樣品檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較在不同標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)樣和樣品為同一基質(zhì)、不同待測(cè)樣品類型以及不同儀器類型等因素在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中基質(zhì)效應(yīng)對(duì)回收結(jié)果的影響。

1.2.5 定性定量分析

進(jìn)樣方式：自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量1 μL。分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液和待測(cè)溶液1 μL進(jìn)行檢測(cè)，采用保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。為減少誤差，每3個(gè)平行樣后各進(jìn)1組標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行計(jì)算。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0軟件一般線性模型（GLM）程序分析不同儀器、不同標(biāo)準(zhǔn)溶液的交互效應(yīng)。若主效應(yīng)內(nèi)組間差異顯著，則進(jìn)行Duncan多重比較。以P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)農(nóng)藥檢測(cè)結(jié)果的影響

表1 結(jié)果表明，用不同基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液與溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液分別校正所有的待測(cè)樣品，腐霉利、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯4種農(nóng)藥的回收結(jié)果均有極顯著差異。其中，溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液校正結(jié)果最高，數(shù)值均高于0.115 mg/kg，存在明顯的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。黃瓜基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液校正結(jié)果數(shù)值大小次之，均在0.100 mg/kg以上；且溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液與黃瓜基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液之間以及與其他3種農(nóng)藥的校正結(jié)果之間均存在極顯著性差異。結(jié)球白菜、結(jié)球甘藍(lán)、辣椒3種基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)腐霉利、甲氰菊酯的校正檢測(cè)結(jié)果之間沒(méi)有極顯著差異；結(jié)球白菜、結(jié)球甘藍(lán)2種基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)氯氰菊酯的校正結(jié)果沒(méi)有極顯著性差異，且基質(zhì)效應(yīng)較弱；結(jié)球白菜、辣椒2種基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)溴氰菊酯的校正結(jié)果沒(méi)有極顯著性差異，且甘藍(lán)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)其的校正結(jié)果最低，基質(zhì)效應(yīng)也最低。

綜上表明，標(biāo)準(zhǔn)溶液中由于基質(zhì)成分不同，對(duì)于農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的基質(zhì)效應(yīng)表現(xiàn)出多樣性和復(fù)雜性的特點(diǎn)。

2.2 不同待測(cè)樣品類型對(duì)農(nóng)藥檢測(cè)結(jié)果的影響

在同一種標(biāo)準(zhǔn)溶液的情況下，檢測(cè)樣品類型對(duì)農(nóng)藥回收結(jié)果的影響。由表2可知，腐霉利、氯氰菊酯2種農(nóng)藥在結(jié)球白菜、黃瓜與辣椒3種蔬菜之間沒(méi)有極顯著差異；甲氰菊酯在結(jié)球白菜與辣椒之間、溴氰菊酯在結(jié)球白菜與黃瓜之間均沒(méi)有極顯著性差異。在4種蔬菜的回收結(jié)果中結(jié)球甘藍(lán)的4種農(nóng)藥回收率數(shù)據(jù)均最高，為0.104～0.107 mg/kg，而黃瓜的4種農(nóng)藥回收率檢測(cè)值均普遍最低，辣椒和大白菜居中。

表1 用不同標(biāo)準(zhǔn)溶液分別校正所有的待測(cè)樣品的農(nóng)藥回收結(jié)果的比較 mg/kg

表2 不同待測(cè)樣品類型對(duì)4種農(nóng)藥回收結(jié)果的比較 mg/kg

綜合以上說(shuō)明，蔬菜樣品類型不同，其基質(zhì)類型的差異是影響蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果的主要因素之一。

2.3 與本底一致基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液校正的檢測(cè)結(jié)果分析

采用與樣品一致的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液校正該同種樣品（表3），結(jié)果表明：采用與本底一致的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液校正腐霉利、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯4種農(nóng)藥的回收結(jié)果均沒(méi)有顯著差異，且檢測(cè)結(jié)果均在0.100 mg/kg以下，說(shuō)明這樣可有效消除基質(zhì)效應(yīng)的影響。

表3 本底一致基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液校正樣品中4種農(nóng)藥回收結(jié)果的比較 mg/kg

2.4 不同儀器檢測(cè)對(duì)農(nóng)藥檢測(cè)結(jié)果的影響

從表4可見(jiàn)，所有數(shù)據(jù)按不同農(nóng)藥的回收結(jié)果分類進(jìn)行分析，對(duì)于腐霉利、甲氰菊酯的回收結(jié)果，7890A與1310的檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有顯著性差異，二者與GC-MS-MS的檢測(cè)結(jié)果均存在顯著差異，且GC-MS-MS的檢測(cè)結(jié)果最高，其對(duì)4種農(nóng)藥的檢測(cè)結(jié)果均在0.100 mg/kg以上；對(duì)于氯氰菊酯的回收結(jié)果，7890A與GC-MS-MS的檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有顯著性差異，二者與1310的檢測(cè)結(jié)果均存在顯著差異，且1310的檢測(cè)結(jié)果最低；對(duì)于溴氰菊酯的回收結(jié)果，GC-MS-MS的檢測(cè)結(jié)果最高，7890A的次之，1310的最低，且三者之間均存在顯著性差異。以上表明，對(duì)于不同農(nóng)藥的回收結(jié)果，不同儀器之間存在一定的差異。

表4 不同儀器型號(hào)測(cè)定4種農(nóng)藥回收結(jié)果的比較 mg/kg

所有數(shù)據(jù)按不同儀器分類進(jìn)行分析，7890A、1310的回收結(jié)果比較理想，而GC-MSMS的回收結(jié)果卻相對(duì)較高，存在較為明顯的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。說(shuō)明3種不同儀器由于檢測(cè)器類型和色譜條件的不同，不同儀器類型對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的影響存在一定的差異。

3 結(jié)果與討論

有效消除基質(zhì)干擾效應(yīng)是當(dāng)前農(nóng)藥殘留分析中急需解決的關(guān)鍵問(wèn)題之一。試驗(yàn)結(jié)果表明：按不同標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品類型校正的檢測(cè)結(jié)果分類，不同蔬菜、不同的校正溶液對(duì)于農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的基質(zhì)效應(yīng)表現(xiàn)出多樣性和復(fù)雜性的特點(diǎn)，但采用與本底一致的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液校正樣品可有效消除基質(zhì)效應(yīng)。按不同儀器檢測(cè)結(jié)果分類，氣相色譜（7890A、1310）與氣相串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MSMS）基質(zhì)效應(yīng)的影響存在一定的差異，GC-MSMS存在較為明顯的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；而同類儀器（7890A、1310）之間基質(zhì)效應(yīng)的影響較弱。

為了能夠更好地消除基質(zhì)效應(yīng)對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果的干擾，一方面要提高前處理的提取凈化水平，對(duì)于不同的待測(cè)物要經(jīng)過(guò)試驗(yàn)確定最佳的、基質(zhì)效應(yīng)影響最小的消除和補(bǔ)償方法；另一方面也要優(yōu)化儀器分析條件，根據(jù)實(shí)際情況對(duì)需要檢測(cè)的農(nóng)藥種類，用不同儀器型號(hào)進(jìn)行匹配分類分組，摸索不同農(nóng)藥殘留檢測(cè)最佳的儀器類型和儀器條件，盡可能地消除基質(zhì)效應(yīng)的干擾，提高農(nóng)藥殘留分析的準(zhǔn)確率。