王新玲

南京市中醫(yī)院，江蘇 南京 210000

近年來甲狀腺癌發(fā)病明顯增加，主要由甲狀腺乳頭狀癌患者增加引起[1]。甲狀腺的惡性腫瘤被分為以下類型[2]：甲狀腺乳頭狀癌 （PTC）、甲狀腺濾泡癌（FTC）、低分化癌（PDC）和甲狀腺未分化癌（UDC），其中甲狀腺乳頭狀癌占甲狀腺惡性腫瘤的65%-80%，因此術前采用有效手段提高甲狀腺乳頭狀癌的診出率有重要意義。BRAF基因是一種原癌基因，BRAF V600E突變能夠調控細胞無限生長獲得惡性增殖的作用，近年來學者發(fā)現(xiàn)BRAF V600E突變與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病密切相關[3]。目前甲狀腺乳頭狀癌的術前診斷主要靠細針穿刺涂片細胞學診斷，往往存在組織不足及結果不確定的情況，本研究引入BRAF V600E基因檢測與之對比。分析檢測結果的差異性，探討兩者在甲狀腺乳頭狀癌術前診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2018-2019年收治的90例甲狀腺結節(jié)穿刺患者。入選標準：影像學發(fā)現(xiàn)患者甲狀腺結節(jié)臨床懷疑甲狀腺癌可能，進行細針穿刺，留取穿刺液進行BRAF基因V600E檢測，同時涂片進行細胞學診斷。其中男25例，女65例。年齡在18-72歲之間，平均年齡（48.47±3.24）歲。

1.2 方法 熒光定量PCR反應：獲取患者穿刺后沖洗液，使用專用DNA提取試劑盒（采購自廈門艾德）提取穿刺液中的DNA，通過人類BRAF基因V600E突變試劑盒（購自廈門艾德），使用熒光定量PCR的方法對穿刺液進行基因突變檢測。同時穿刺細胞進行涂片，HE染色，由兩名主治以上病理科醫(yī)生進行細胞學診斷。對比兩組患者檢測、診斷的結果。

1.3 結果判讀 熒光PCR結果判讀：待測樣品內控基因HEX信號應有標準擴增曲線，且按照產(chǎn)品說明書Ct值位于13-21區(qū)間內，同時若樣本待測基因有擴增曲線出現(xiàn)，且突變信號的Ct值＜28，檢測樣本判定為基因突變陽性。內控基因無擴增，檢測無效，內控基因有擴增，而待測樣本目標基因無擴增則判讀為突變陰性。

細胞學判讀，細胞學涂片HE染色，兩位專家分別讀片后交流，形成統(tǒng)一意見后，甲狀腺乳頭狀癌包括可疑者以陽性計入統(tǒng)計學樣本，其他良性結節(jié)、橋本氏病等計入陰性結果。其他類型癌已經(jīng)從總體樣本中剔除，不計入統(tǒng)計。

2 結果

BRAF基因V600E突變陽性與細針穿刺細胞學診斷為甲狀腺乳頭狀癌的總體符合率為86.7%，雖然采取spearman correlation統(tǒng)計學方法兩種術前篩選方案并無統(tǒng)計學差異，但對臨床17例表現(xiàn)為BRAF V600E突變而細胞學診斷為良性或者懷疑良性的患者進行分析，發(fā)現(xiàn)該部分患者多為穿刺細胞量少不資診斷，或者術后發(fā)現(xiàn)微小乳頭狀癌。這說明該基因的檢測對甲狀腺乳頭狀瘤患者的術前確診具有重要的臨床價值。見表1。

表1 BRAF基因V600E突變陽性與細針穿刺細胞學診斷為甲狀腺乳頭狀癌

3 討論

近年來甲狀腺癌的發(fā)病率逐年增高，而甲狀腺乳頭狀癌作為內分泌系統(tǒng)惡性腫瘤中最常見的病理類型，甲狀腺癌總體發(fā)病率的80%以上。傳統(tǒng)的術前細針穿刺細胞學診斷對甲狀腺乳頭狀癌的確診具有重要的意義，但是由于存在微小乳頭癌及穿刺獲取細胞少造成診斷困難部分患者不能夠明確診斷，導致患者面臨重新穿刺取樣風險的臨床現(xiàn)實情況。

在該組樣本中BRAF V600E在甲狀腺乳頭狀癌患者中的突變比例達90%，與細胞學診斷在統(tǒng)計學雖未體現(xiàn)出明顯差異，但是由于細胞學漏檢樣本的存在，該位點的突變檢測在術前患者確診中起到了很好的補充作用。減小了實際臨床細胞量少細胞學診斷壓力大的問題，同時能夠有效避免了由于細胞量少患者需要重新穿刺取樣的風險及相應帶來的醫(yī)療資源浪費。因此我們認為BRAF V600E突變檢測具有重要的臨床應用價值。