劉奕辰 （山東省泰安第一中學 271000）

銀杏(學名：Ginkgo biloba L.)，為銀杏科、銀杏屬落葉喬木，中生代孑遺的稀有樹種，中國特產，隨著社會進步和園林技術的發(fā)展，已成為隨處可見的園林綠化、觀賞樹種，人們對銀杏的開發(fā)利用也越來越廣泛。除樹干、果實以外，銀杏葉提取物也已被用于藥物、保健品、食品添加劑、功能性飲料、化妝品等領域，帶來很大的經濟效益。但目前銀杏葉應用技術較成熟的成分主要是黃酮和內酯類化合物等脂溶性提取物[1]，對其水溶性提取物活性成分如銀杏葉多糖的開發(fā)利用還很少。

植物多糖是一種天然植物大分子，具有免疫調節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老等生物學活性，且毒副作用小、殘留少。有研究證明，植物多糖是良好的動物免疫增強劑和免疫佐劑[2，3]，如能將銀杏葉多糖提取、研究，用于畜牧業(yè)生產，將開發(fā)銀杏葉新的應用領域，帶來新的經濟效益。目前，植物多糖的提取方法很多，主要有溶劑提取法、酸提法、堿提法、超濾提取法、超聲提取法等等[4]，其中水提醇沉法提取法不需要特殊設備，技術簡單易操作，成本較低。本試驗旨在尋找水提醇沉提取銀杏葉多糖的最佳水浸提溫度。

1 材料與方法

1.1 銀杏葉 7月份采自山東農業(yè)大學校園，全葉。

1.2 試劑 去離子水，正丁醇，氯仿，95%乙醇。

1.3 儀器設備 202型電熱恒溫干燥箱，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；FA1004型分析電子天平，常州市幸運電子設備有限公司； HH-S4數(shù)顯恒溫水浴鍋，國華電器有限公司；冰箱，中國海爾制造；TDL-5000bR型低速冷凍離心機，上海安亭科學儀器廠。

1.4 工藝流程 新鮮銀杏葉60℃“殺青”烘干至恒重，粉碎機粉碎，過260目篩，用水提醇沉法提取多糖，工藝流程如下：銀杏葉粉末稱重→與去離子水按照1：10的比例混合攪拌→熱水浸提8h(此過程中伴隨蒸發(fā)要隨時補充添加去離子水，每0.5h攪拌一次)→置于4℃冰箱沉淀過夜→取上清液用6層紗布過濾 →4℃ 離心，得上清液→上清液85℃水浴濃縮→濃縮液與Sevage試劑混合、震蕩、離心除蛋白(重復2次)，得上清液→上清液加6倍量無水乙醇沉淀多糖，-20°C過夜→棄上清液，收集絮狀沉淀→置于55℃干燥箱中干燥至恒重(每天要注意觀察、攪拌)→粗多糖。

1.5 試驗分組 試驗分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組，上述工藝流程中熱水浸提環(huán)節(jié)溫度分別設定為55、65、75、85、95℃，其余工藝流程相同。

1.6 粗多糖得率計算 銀杏葉粗多糖得率=粗多糖重量/銀杏葉粉末重量X100%。

1.7 數(shù)據分析 所有試驗數(shù)據用SPSS17.0軟件進行單向ANOVA分析，數(shù)據用平均值(Mean)±標準誤差(SD)表示。Duncan’s多重分析表示各組間的差異顯著性，P＜0.05表明差異顯著。

2 結果

表1 不同浸提溫度下銀杏葉粗多糖得率 (%)

表1顯示，隨著浸提溫度的上升，銀杏葉粗多糖的得率均由一定幅度的提高。Ⅰ組顯著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組(P＜0.05)；Ⅱ組顯著高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組(P＜0.05)；Ⅲ組顯著高于Ⅳ、Ⅴ組(P＜0.05)；Ⅳ組高于Ⅴ組，但差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

（1）隨著浸提溫度的上升，銀杏葉粗多糖的得率也隨之上升，這與溫度越高，細胞壁被破壞程度越大釋放粗多糖越多有關；溫度越高，物質的分子運動越快，從而導致在相同的浸提時間內溫度越高粗多糖釋放越多。但是，當溫度超過一定范圍時，釋放出的多糖有一部分會被分解，導致粗多糖得率提升幅度不大。另外，溫度越高，生產成本越高。因此，以85℃作為浸提溫度最適宜。（2）在乙醇沉淀多糖的操作中，要注意應將乙醇慢慢加入上清液中，邊加邊順著同一方向攪拌，否則會造成部分其它成分如鞣質、蛋白質等被多糖包合或螯合生成沉淀，導致提取多糖的純度下降，從而使測得粗多糖得率偏高，誤差增大。（3）本試驗顯示，水提醇沉法提取銀杏葉多糖最佳溫度為85℃。