亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        液相質(zhì)譜法同時檢測豬肉中氯霉素和地塞米松

        2019-02-20 12:21:42舒順順米倩楊彩霞劉芹牛軍
        食品研究與開發(fā) 2019年5期
        關(guān)鍵詞:氯霉素乙酸乙酯內(nèi)標(biāo)

        舒順順,米倩,楊彩霞,劉芹,牛軍

        (正大食品(襄陽)有限公司,湖北襄陽441000)

        在我國,養(yǎng)殖業(yè)抗生素濫用問題一直比較嚴重。在養(yǎng)豬業(yè)不僅用抗生素治療疾病,還用來防治疾病[1]。濫用抗生素,將導(dǎo)致豬體內(nèi)抗生素殘留,不僅會給豬肉食品安全帶來潛在隱患,更會對人類的健康及生存環(huán)境造成危害[2]。氯霉素和地塞米松是抗生素殘留中的重要成員。

        氯霉素(chloramphenicol,CAP)是由委內(nèi)瑞拉鏈絲菌產(chǎn)生的,可作用于細菌核糖核蛋白體的50S亞基,抑制菌體蛋白合成,對革蘭式陰性菌和革蘭氏陽性菌均有抑制作用,屬抑菌性廣譜抗生素[3]。由于價格低廉且效果顯著,常被作為畜禽的疾病治療和預(yù)防[4]。地塞米松(dexamethasone,DXMS)于 1957 年首次合成,是一種人工合成的皮質(zhì)類固醇。其藥理作用主要是抗炎、抗毒、抗過敏、抗風(fēng)濕等[5]。經(jīng)過長時間的臨床應(yīng)用實踐,人們對氯霉素和地塞米松的毒副作用有了充分的認識。氯霉素的毒副作用主要有:抑制骨髓造血功能,引起新生兒致命性灰色綜合癥,以及引起精神抑郁厭食等,低濃度藥物殘留還會誘發(fā)致病菌的耐藥性[6]。地塞米松的毒副作用主要有:可能導(dǎo)致全身性過敏反應(yīng)、骨質(zhì)疏松及骨折、腸胃道刺激(惡心、嘔吐)、兒童生長受到抑制、誘發(fā)青光眼白內(nèi)障、可能出現(xiàn)精神癥狀、停藥綜合癥等危害[7]。

        液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法是對抗生素定量時常用的方法[8],此法的定量方法分為外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法[9-10]。外標(biāo)法是用待測組分的純品作對照物質(zhì),以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的響應(yīng)信號相比較進行定量的方法;此方法簡便,無需校正因子,不論樣品中其他組分是否出峰,均可對待測組分定量,適用范圍較廣。內(nèi)標(biāo)法是選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對照物質(zhì)加入待測樣品溶液中,以待測組分和對照物質(zhì)的響應(yīng)信號對比,測定待測組分含量的方法;此測定的結(jié)果較為準確,由于是通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組分的峰面積的相對值來進行計算的,因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差,適用于對精密度和準確度要求較高的物質(zhì)的檢測。由于氯霉素對精密度(GB/T 22338-2008《動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定》要求:添加濃度為 0.1 μg/kg~5 μg/kg,回收率范圍為80.5%~107.0%)要求比較高,而地塞米松對精密度(農(nóng)業(yè)部1031號公告-2-2008要求:添加濃度為0.5 μg/kg~1.5μg/kg,回收率范圍為 50%~120%)要求寬泛,所以本研究中用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬肉中氯霉素時采用內(nèi)標(biāo)法,測定地塞米松時采用外標(biāo)法。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        氯霉素(CAP,≥99.3%)、氯霉素氘代內(nèi)標(biāo)(氯霉素-D5,100 mg/mL)、地塞米松(DXMS,≥98.9%):德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司;乙酸乙酯(色譜純)、正己烷(色譜純):上海安譜實驗科技有限公司;甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純):德國默克股份兩合公司;試驗用水均為超純水。

        豬肉:正大食品(襄陽)有限公司。

        1.2 儀器與設(shè)備

        TURBOVA LV全自動水浴氮吹儀:美國BIOTAGE公司;LC-MS/MS 8040高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:日本島津公司;VORTEX3迷你振蕩器:德國IKA公司;GL-21高速冷凍離心機:湖南湘儀離心機儀器有限公司;一次性注射器(1 mL):湖南康利來醫(yī)療器械有限公司;500 mg/6mL Silica固相萃取柱、疏水性PTFE針式濾器(0.22 μm):上海安譜實驗科技股份有限公司。

        1.3 方法

        1.3.1 標(biāo)準溶液的配置

        1)標(biāo)準儲備溶液的配置

        氯霉素標(biāo)準儲備溶液:準確稱取氯霉素標(biāo)準品10 mg(精確到 0.1 mg),用甲醇定容到 100 mL,配成100 μg/mL的標(biāo)準儲備溶液。

        氯霉素氘代內(nèi)標(biāo)(氯霉素-D5)儲備溶液:100μg/mL的標(biāo)準儲備溶液(4℃避光保存可使用12個月)。

        地塞米松標(biāo)準儲備溶液:準確稱取地塞米松標(biāo)準品10 mg(精確到0.1 mg),用甲醇定容到10 mL,配成1 000 μg/mL的標(biāo)準儲備溶液(-20℃保存可使用12個月)。

        2)中間儲備溶液的配置

        用移液器分別移取1 mL氯霉素、氯霉素-D5、地塞米松儲備液,用甲醇定容至10 mL,再按照10倍稀釋度逐步分別配成濃度為1 μg/mL的中間儲備液。

        3)工作液配置

        分別移取氯霉素中間儲備液、氯霉素-D5中間儲備液、地塞米松中間儲備液各1mL到3個5mL容量瓶中,用甲醇分別定容到5 mL,配制成200 ng/mL的工作液。

        試驗中用甲醇配置混合標(biāo)準溶液,氯霉素和地塞米松標(biāo)準品終濃度均為 0.2、0.5、2、5、10、20、40 ng/mL;氯霉素-D5終濃度為10 ng/mL。

        1.3.2 色譜、質(zhì)譜條件

        1)液相色譜條件

        島津Shim-packGISTC18色譜柱(150mm×2.1mm,5 μm),柱溫箱溫度:40℃,流速:0.3 mL/min,進樣體積:20 μL,流動相:水(A)-甲醇(B)。梯度洗脫程序如下:0~0.5 min,25%B;0.5 min~2 min,25%B~100%B;2 min~4 min,100%B;4 min~5 min,100%B~25%B;5 min~8 min,25%B。

        2)質(zhì)譜條件

        檢測方式:多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitor ing,MRM),加熱模塊溫度:400℃,干燥器氣流(drying gas flow):15.0 L/min,霧化器氣流(nebulizing gas flow):3.0 L/min,碰撞氣:氬氣,壓力(CID Gas):230 kPa,離子源:電噴霧離子源(electrospray ion source,ESI+),掃描方式:負離子掃描。

        1.3.3 樣品前處理

        1.3.3.1 提取

        取新鮮或冷凍豬肉,去除表觀脂肪,攪碎,準確稱量樣品2.00 g于50 mL離心管中,各樣品管中加入氯霉素-D5內(nèi)標(biāo)標(biāo)準工作溶液50 μL,加標(biāo)回收管再加入相應(yīng)體積的外標(biāo)標(biāo)準工作溶液。各管加乙酸乙酯15 mL,渦旋混合 5 min,4 000 r/min 離心 15 min,將乙酸乙酯層轉(zhuǎn)移到另一個50 mL離心管中;殘渣用15 mL乙酸乙酯重復(fù)提取1次,合并2次樣品提取液,40℃氮氣吹干,加1 mL乙酸乙酯和5 mL正己烷,溶解殘渣,待凈化。

        1.3.3.2 凈化

        用6 mL正己烷活化固相萃取柱,提取液過柱。用6 mL正己烷淋洗萃取柱,抽干,用6 mL正己烷-丙酮(6∶4,體積比)洗脫,用10 mL離心管收集洗脫液。洗脫液45℃氮氣吹干,加25%甲醇水溶液1 mL,溶解殘渣,10 000 r/min離心20 min,用1 mL注射器取上清液,過0.22 μm有機濾膜,供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定。

        1.3.4 試驗方法

        氯霉素采用內(nèi)標(biāo)法,以氯霉素-D5為內(nèi)標(biāo)物測定氯霉素含量;地塞米松采用外標(biāo)法。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

        選用負離子全掃描方式,采用Q3 Scan模式進行一級質(zhì)譜分析,得到各個被測物分子離子峰,掃描圖譜如圖1。

        根據(jù)分子離子峰,確認氯霉素、氯霉素-D5和地塞米松的m/z值分別為321.10、326.10和437.15。以3種化合物確認的m/z值為母離子,進行二級質(zhì)譜分析及自動優(yōu)化,得到質(zhì)譜參數(shù)見表1。

        圖1 3種化合物全掃描圖譜Fig.1 The full scan map of the three compounds

        表1 氯霉素和地塞米松的質(zhì)譜條件參數(shù)Table 1 Mass spectrometry parameters of chloramphenicol and dexamethasone

        2.2 色譜條件的優(yōu)化

        2.2.1 流動相選擇

        氯霉素易溶于甲醇、乙醇、丙醇及乙酸乙酯,在干燥時穩(wěn)定,在弱酸性和中性溶液中較安定,遇堿類易失效[7];地塞米松在丙酮、甲醇、乙醇或二氧六環(huán)中略溶,在三氯甲烷中微溶,在乙醚中極微溶解,在水中幾乎不溶[7]。因此選用不同的流動相對氯霉素和地塞米松的溶解性差別較大,這將直接影響檢測的信號強度。本研究采用4組流動相進行檢測,分別為純水-甲醇、0.1%甲酸水-0.1%甲酸甲醇、純水-乙腈、0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈,對同一混合標(biāo)準品稀釋液進行檢測,以純水-甲醇為流動相時3種化合物峰面積為1,對比結(jié)果如圖2。

        試驗表明,氯霉素和氯霉素-D5在以純水-甲醇為流動相時響應(yīng)最高,在以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈為流動相時響應(yīng)最低,僅為最高響應(yīng)值的0.27倍和0.26倍;地塞米松在以0.1%甲酸水-0.1%甲酸甲醇為流動相時響應(yīng)最高,為純水-甲醇作為流動相時的1.34倍。綜合考慮,本研究采用純水-甲醇作為流動相。

        圖2 流動相對離子化效率的影響Fig.2 Effect of mobile phase on ionization efficiency

        2.2.2 梯度洗脫程序優(yōu)化

        圖3 氯霉素和地塞米松標(biāo)準溶液離子色譜圖Fig.3 Ion chromatograms of chloramphenicol and dexamethasone in standard solution

        選用純水-甲醇為流動相優(yōu)化梯度洗脫程序,在上述液相色譜條件和質(zhì)譜條件下,氯霉素(0.2 ng/mL)出峰時間為4.20 min,地塞米松(0.2 ng/mL)出峰時間為4.52 min,氯霉素和地塞米松能夠良好分離,如圖3。

        2.2.3 提取條件的選擇

        本研究對豬肉樣品分別采用乙腈和乙酸乙酯進行提取,結(jié)果見表2。

        表2 乙腈和乙酸乙酯提取時氯霉素和地塞米松的回收率Table 2 Recoveries of chloramphenicol and dexamethasone using acetonitrile and ethyl acetate

        乙腈和乙酸乙酯提取對氯霉素回收率沒有顯著差別(P>0.05),地塞米松用乙酸乙酯提取時回收率顯著(P<0.05)高于用乙腈提取。因此本研究采用乙酸乙酯作為提取劑。

        2.3 線性范圍和定量限

        選用優(yōu)化的色譜條件、質(zhì)譜條件和前處理條件,對系列混合標(biāo)準溶液進行測定,得到氯霉素和地塞米松標(biāo)準曲線,其中氯霉素標(biāo)準曲線橫坐標(biāo)為系列濃度,縱坐標(biāo)為氯霉素峰面積與氯霉素-D5峰面積的比值,地塞米松標(biāo)準曲線橫坐標(biāo)為系列濃度,縱坐標(biāo)為峰面積。以10倍信噪比確定兩種化合物的定量限,相關(guān)參數(shù)如表3。

        表3 氯霉素、地塞米松的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和定量限Table 3 Linear equations,correlation coefficients and limits of quantitation of chloramphenicol and dexamethasone

        2.4 回收率和精密度

        選取陰性豬肉樣品,稱取15份隨機分成3組,第一組氯霉素添加量為1μg/kg,地塞米松添加量為0.5μg/kg;第二組和第三組氯霉素和地塞米松的添加量相同,兩組添加量分別為2.5 μg/kg和5 μg/kg。批間精密度是在5 μg/kg的添加水平上進行5個樣品分析,連續(xù)測定3 d,結(jié)果見表4。

        表4 陰性豬肉中添加氯霉素和地塞米松的加標(biāo)回收率和精密度Table 4 Spiked recoveries and RSDs of chloramphenicol and dexamethasone in pork samples

        結(jié)果表明,豬肉中氯霉素3個添加水平的平均回收率在90.54%~101.73%之間,批內(nèi)標(biāo)準偏差RSD值在2.3%~7.6%之間,批間標(biāo)準偏差RSD值為8.95%;豬肉中地塞米松3個添加水平的平均回收率在83.82%~87.50%之間,批內(nèi)標(biāo)準偏差RSD值在2.5%~9.5%之間,批間標(biāo)準偏差RSD值為8.03%。

        2.5 實際樣品的檢測

        應(yīng)用本方法對50個豬肉樣品同時進行氯霉素和地塞米松的檢測,未發(fā)現(xiàn)陽性樣品。

        3 結(jié)論

        本研究建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測豬肉中氯霉素和地塞米松殘留的方法。根據(jù)精密度要求不同,氯霉素采用內(nèi)標(biāo)法定量而地塞米松采用外標(biāo)法定量。通過優(yōu)化質(zhì)譜條件、色譜條件,使氯霉素和地塞米松在響應(yīng)強度增強的同時能夠很好的分離;通過優(yōu)化提取溶劑,使地塞米松的回收率顯著提高;兩種藥物殘留一同檢測,使分析時間成倍縮短,節(jié)約時間和成本。該方法回收率高、重復(fù)性好,氯霉素添加量在1 μg/kg~5 μg/kg時,回收率在 90.54%~101.73%之間;地塞米松添加量在 0.5 μg/kg~5 μg/kg 時,回收率在83.82~87.5%之間;批內(nèi)標(biāo)準偏差和批間標(biāo)準偏差RSD%值均小于10。因此,該方法是一種快速、準確、靈敏、實用的方法,完全滿足國內(nèi)外對豬肉中氯霉素和地塞米松藥物殘留的檢測要求。

        猜你喜歡
        氯霉素乙酸乙酯內(nèi)標(biāo)
        氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測洗滌劑中的甲醇
        一種氯霉素高靈敏消線法檢測試紙條的制備
        密蒙花乙酸乙酯萃取層化學(xué)成分的分離與鑒定
        有機熱載體熱穩(wěn)定性測定內(nèi)標(biāo)法的研究
        GC內(nèi)標(biāo)法同時測定青刺果油中4種脂肪酸
        中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:32
        廣西莪術(shù)乙酸乙酯部位的抗血栓作用
        中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:04
        澤漆乙酸乙酯提取物對SGC7901/DDP多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)及機制
        中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:25
        鎖陽乙酸乙酯提取物的雌激素樣作用研究
        嬰幼兒慎用氯霉素眼藥水
        核磁共振磷譜內(nèi)標(biāo)法測定磷脂酰膽堿的含量
        精品国产一区二区三区a| 丰满岳乱妇久久久| 国产午夜精品一区二区三区视频| 在线丝袜欧美日韩制服| 一级黄色一区二区三区视频| 日韩有码在线一区二区三区合集| 红桃av一区二区三区在线无码av| 妺妺窝人体色www聚色窝| 两个人看的www高清视频中文| 人妻少妇人人丰满视频网站| 亚洲成在人网站天堂日本| 最新国产不卡在线视频| 国产福利永久在线视频无毒不卡| 亚洲精品欧美二区三区中文字幕| 亚洲a人片在线观看网址| 久久亚洲一区二区三区四区五| 亚洲麻豆视频免费观看| 日产学生妹在线观看| 四虎成人精品无码永久在线| 国产精品一区成人亚洲| 亚洲白嫩少妇在线喷水| 天天做天天爱夜夜爽女人爽| 污污内射在线观看一区二区少妇| 无码国产精品第100页| 日韩精品一区二区三区含羞含羞草| 户外精品一区二区三区 | 国产偷国产偷精品高清尤物| 一本一道波多野结衣一区| 无码人妻av免费一区二区三区| 亚洲男人第一av网站| 亚洲av国产大片在线观看| 亚洲第一页视频在线观看| 欧美成人秋霞久久aa片| 日韩成人极品在线内射3p蜜臀| 无码人妻中文中字幕一区二区| 久久99国产精品久久99密桃| 欧美白人战黑吊| 国产呦系列呦交| 亚洲国产麻豆综合一区| 久久精品人妻嫩草av蜜桃| 国产一区二区三区仙踪林|