武炳超，童磊，杜昭昌，胡家菱，張歡，陳燚，劉偉，張新全，黃琳凱

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60Co-γ射線對2種狼尾草屬牧草的誘變效應(yīng)

武炳超，童磊，杜昭昌，胡家菱，張歡，陳燚，劉偉，張新全，黃琳凱

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)科學(xué)系，成都 611130）

【目的】探究60Co-γ射線對“熱研4號”雜交狼尾草及“華南”象草的誘變效應(yīng)，創(chuàng)制新種質(zhì)，以推動狼尾草的育種工作?！痉椒ā吭谇捌趧┝亢Y選基礎(chǔ)之上，以2種狼尾草品種（“熱研4號”雜交狼尾草和“華南”象草）種莖為材料，利用60Co-γ射線進行輻射，劑量為30 Gy，劑量率為1 Gy·min-1。將輻射后的種莖與未輻射的種莖栽植于大田中，常規(guī)田間管理，1個月后統(tǒng)計成活率。待成活的植株生長成熟后，在2個誘變系群體中分別隨機挑選30株進行形態(tài)指標(biāo)的測定，共測定7個指標(biāo)。隨后利用分子標(biāo)記探究輻射對遺傳變異的影響?！窘Y(jié)果】2個品種的輻射材料，分別隨機選取30株進行形態(tài)指標(biāo)測定，與對照相比，發(fā)現(xiàn)“熱研4號”誘變系中有28株的株高，21株的莖節(jié)數(shù)及17株的葉寬有顯著或極顯著差異。“華南”誘變系中有20株的株高有顯著或極顯著差異，其他形態(tài)指標(biāo)差異不大。2種牧草的突變體大都表現(xiàn)出株高的降低，因此，生物量也隨之減少。還發(fā)現(xiàn)一個輻射材料RY4-17，由于分蘗數(shù)多于對照導(dǎo)致生物量增加。SSR分子標(biāo)記研究結(jié)果表明，在“熱研4號”誘變系中，20對引物的平均多態(tài)信息含量為0.245，共擴增出83條帶，其中多態(tài)性條帶52條，誘變系與對照之間的遺傳相似系數(shù)為0.67—0.89，平均值為0.81，差異位點數(shù)為9—27，平均為15.9個，UPGMA聚類結(jié)果顯示突變體RY4-9和RY4-23與對照遺傳距離最遠，變異程度最大。在“華南”誘變系中，20對引物的平均多態(tài)信息含量為0.394，共擴增出81條帶，其中多態(tài)性條帶65條，誘變系與對照之間的遺傳相似系數(shù)為0.54—0.86，平均值為0.77，差異位點數(shù)為10—38，平均為18.8個，UPGMA聚類結(jié)果顯示突變體HN-24與對照遺傳距離最遠，變異程度最大?！窘Y(jié)論】適宜劑量的60Go-γ射線輻射可以使2種牧草種莖成活率顯著降低，同時可以有效誘導(dǎo)2種牧草在形態(tài)學(xué)和遺傳學(xué)水平上發(fā)生變異。60Go-γ射線輻射誘變是解決狼尾草因無性繁殖為主而導(dǎo)致遺傳資源多樣性匱乏的有效途徑。

狼尾草；60Co-γ射線；表型變異；遺傳變異；SSR分子標(biāo)記

0 引言

【研究意義】狼尾草屬（Rich）屬于禾本科（Poaceae）黍亞科（Panicoideae A. Br.）的一年生或多年生草本植物，全球約140種，多數(shù)原產(chǎn)于非洲[1]。其中雜交狼尾草（×）是以二倍體美洲狼尾草（）和四倍體象草（）雜交產(chǎn)生的三倍體雜交種，生產(chǎn)上多采用無性繁殖或者雜交一代的種子繁殖[2-3]。雜交狼尾草生產(chǎn)速度快，產(chǎn)量高，氨基酸含量比較平衡，并且耐旱，抗倒伏，極少有病蟲害發(fā)生，是一種喂養(yǎng)畜禽的優(yōu)質(zhì)飼料[4]。象草是一種莖稈粗高、含糖量大、粗蛋白和無氮浸出物含量高的優(yōu)質(zhì)牧草[5]，通常調(diào)制成干草或作為青刈飼料、青貯料喂養(yǎng)家畜[6]。20世紀(jì)90年代美國研究發(fā)現(xiàn)象草可作為能源植物生產(chǎn)乙醇、沼氣和電能[7-10]，也有人將象草看作一種保護生態(tài)和美化環(huán)境的植物[11-12]。關(guān)于狼尾草屬牧草的育種研究工作，美國一直處于領(lǐng)先地位，而中國目前國審象草品種只有6個，其中4個為引進品種，而國審雜交狼尾草品種僅有3個，品種資源的極度匱乏大大阻礙了這兩種狼尾草屬牧草的利用。象草具有不能形成花粉或雌蕊發(fā)育不良的缺點，通常不結(jié)實或結(jié)實率低，種子活性低，因此，生產(chǎn)上多用象草種莖繁殖后代[13-14]。而雜交狼尾草由于無法產(chǎn)生種子，生產(chǎn)上需要年年制種或利用種莖無性繁殖。這種以無性繁殖為主的繁殖方式大大降低了種質(zhì)遺傳資源多樣性，給2種牧草的育種工作帶來困難?！厩叭搜芯窟M展】輻射誘變作為一種有效地增加遺傳多樣性的手段，已被證明造成的變異是可以穩(wěn)定遺傳的[15]，該方法已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物新品種選育上，但是在牧草上的應(yīng)用起步較晚。2011年，福建農(nóng)作物品種審定委員會審定通過了“閩牧6號”品種，該品種是通過輻射雜交狼尾草種子和田間雙重篩選選育的狼尾草新品種[16]。除此之外，多數(shù)牧草的輻射誘變研究都停留在比較基礎(chǔ)的階段，劉天增等[17]利用60Co-γ射線輻射海濱雀稗（）的種莖，初步選育出9個在形態(tài)指標(biāo)上均不同程度優(yōu)于對照的突變體材料。翁伯琦等[18]通過60Co-γ射線對決明屬（spp.）牧草輻射后代的研究發(fā)現(xiàn)3個突變體的生物量都比原種有所增加，氨基酸營養(yǎng)成分也呈現(xiàn)出較大的變化。而60Co-γ射線對狼尾草種莖的誘變效應(yīng)的研究還未見報道?！颈狙芯壳腥朦c】目前，分子標(biāo)記已成為植物遺傳多樣性鑒定的重要工具。其中SSR（simple sequence repeats）分子標(biāo)記作為一種共顯性標(biāo)記，因其穩(wěn)定性好、多態(tài)性高等優(yōu)點，廣泛用于群體遺傳結(jié)構(gòu)分析和遺傳多樣性的研究[19-21]。目前，對于狼尾草莖稈適宜輻射劑量以及所產(chǎn)生的誘變效應(yīng)仍未探明，阻礙了該類牧草輻射誘變育種的工作進程。【擬解決的關(guān)鍵問題】本研究通過對2種狼尾草屬牧草種莖進行大量輻射，隨后對成熟突變體植株進行形態(tài)學(xué)測定，并利用SSR標(biāo)記檢測誘變系與對照植株分子水平上的差異，以期探究60Co-γ射線對2種狼尾草屬牧草的誘變效應(yīng)，創(chuàng)制優(yōu)異新種質(zhì)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為種植在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)崇州實驗基地狼尾草種質(zhì)資源圃中的“熱研4號”雜交狼尾草（品種登記號：196）和“華南”象草（品種登記號：066）。種質(zhì)資源來自于熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院牧草種質(zhì)基因庫，均為同一無性系擴繁，保證遺傳背景一致。挑選成熟健康、長勢相近的植株割取種莖，以含有2—3個莖節(jié)為標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 60Co-γ射線輻射誘變

2017年4月，將割取的種莖送往四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院輻射中心，運送過程中保持種莖濕潤，減少種莖離體脫水受到的損傷。選用劑量為30 Gy的60Co-γ射線對種莖進行輻射，劑量率為1 Gy·min-1[22]。“熱研4號”輻射406根種莖，28根未經(jīng)輻射處理的莖節(jié)作為對照；“華南”輻射390根種莖，34根未經(jīng)輻射處理的莖節(jié)作為對照。將輻射后的種莖種植于四川農(nóng)業(yè)大學(xué)崇州實驗基地，莖稈斜插入土壤，以土壤埋沒一個莖節(jié)為標(biāo)準(zhǔn)，株距1 m，行距1 m，采用常規(guī)大田管理措施，1個月后統(tǒng)計成活率。

1.3 形態(tài)指標(biāo)測定

等待存活的植株生長成熟后，對2種狼尾草屬牧草群體中各自隨機挑選30株突變體和3株對照進行編號（表1和表2）和7種形態(tài)指標(biāo)測定，包括分蘗數(shù)、株高、莖節(jié)數(shù)、莖粗、葉寬、葉長和生物量。其中，葉寬與葉長2項指標(biāo)均選取從下至上倒數(shù)第2片葉子進行測量，葉寬以葉片最寬處的測量數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。除分蘗數(shù)和生物量以外，其余指標(biāo)均重復(fù)測量10次，分蘗數(shù)不足10個的植株，則以最大可測量指標(biāo)數(shù)為準(zhǔn)。

1.4 SSR分子標(biāo)記

1.4.1 DNA提取 在測定形態(tài)指標(biāo)的66個單株上選取生長良好的葉片，使用天根植物基因組DNA提取試劑盒提取DNA，并經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測其質(zhì)量，通過核酸蛋白質(zhì)檢測儀檢測其純度和濃度，-20℃保存?zhèn)溆?。使用時用TE將濃度稀釋至20 ng·μL-1，4℃保存。

1.4.2 引物篩選 2種材料單獨篩選引物，各自隨機挑選5個突變體和1個對照材料用于篩選引物，70對引物由WANG等[23]象草Survey測序開發(fā)，引物合成交由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成。將擴增后條帶清晰且突變體與對照之間存在差異的多態(tài)性引物用于后續(xù)研究。

1.4.3 PCR擴增及電泳 PCR反應(yīng)體系為20 ng·μL-1，DNA 1.5 μL、Taq酶0.3 μL、Master Mix 7.5 μL、10 pmol·μL-1上游引物和下游引物各0.6 μL和ddH2O 4.5 μL。PCR反應(yīng)程序為94℃5 min；94℃30 s，58℃45 s，72℃1 min，35個循環(huán)；72℃7 min，4℃保存。產(chǎn)物用8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，染色。

1.4.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 使用Microsoft Excel 2016軟件處理66個單株的形態(tài)指標(biāo)數(shù)據(jù)，并繪制相關(guān)圖表，采用SPSS 19.0軟件進行方差分析。對電泳得到的膠片進行標(biāo)準(zhǔn)化處理，即在相同遷移位置，對穩(wěn)定且清晰的條帶進行統(tǒng)計，有帶記為“1”，無帶記為“0”，建立原始矩陣。根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果，利用Microsoft Excel 2016統(tǒng)計SSR擴增產(chǎn)物的條帶總數(shù)（total number of bands，TNB）和多態(tài)性條帶數(shù)（number of polymorphic bands，NPB），并計算多態(tài)性條帶比率（percentage of polymorphic bands，PPB）和引物的多態(tài)信息含量（polymorphism information content，PIC）。利用NTSYSpc2.1（Version2.10s）軟件計算遺傳相似系數(shù)（genetic similarity coefficient，GSC）并繪制UPGMA（unweighted pair-group method with arithmetic means）聚類圖。

2 結(jié)果

2.1 輻射后種莖成活率分析

796根種莖經(jīng)過30 Gy的60Co-γ射線輻射后，共獲得239株存活的植株，其中“熱研4號”的存活數(shù)為114株，成活率為28.01%，對照的存活數(shù)為22株，成活率為78.57%；“華南”的存活數(shù)為125株，成活率為32.05%，對照的存活數(shù)為29株，成活率為85.29%。

2.2 2個誘變系群體的表型變異

2.2.1“熱研4號”突變體表型的鑒定 隨機挑選30株經(jīng)誘變存活的“熱研4號”進行形態(tài)測定，與對照相比，30株突變體植株均至少有一項形態(tài)指標(biāo)存在顯著或極顯著差異（表1）。其中28株的株高、21株的莖節(jié)數(shù)以及17株的葉寬存在顯著或極顯著差異，分別占總數(shù)的93.3%、70%和56.7%。而葉長和莖粗分別有4株和9株呈顯著或極顯著差異，僅占總數(shù)的13.3%和30%。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，與對照相比，多數(shù)突變體的株高、莖節(jié)數(shù)呈不同程度的降低或減少，可能造成大部分突變體生物量降低。

表1 “熱研4號”雜交狼尾草突變體形態(tài)指標(biāo)

*代表在0.05水平差異顯著；**代表在0.01水平差異極顯著。下同

* and ** indicate significant differences at 0.05 and 0.01 levels, respectively. The same as below

2.2.2 “華南”突變體表型的鑒定 隨機挑選30株經(jīng)誘變存活的“華南”進行形態(tài)測定，與對照相比，有28株至少有一項形態(tài)指標(biāo)存在顯著或極顯著差異（表2）。其中有20株株高存在顯著或極顯著差異，占66.7%，而莖節(jié)數(shù)、莖粗、葉長與葉寬等指標(biāo)存在顯著或極顯著差異的植株數(shù)分別為2、7、7和11株，占總數(shù)的6.7%、23.3%、23.3%和36.7%。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，與對照相比，多數(shù)突變體株高呈不同程度降低，而其他形態(tài)指標(biāo)差異不大。其中HN-12、HN-13和HN-23 3個突變體的各項形態(tài)指標(biāo)均比對照高，生物量也高于對照。

表2 “華南”象草誘變系形態(tài)指標(biāo)

2.3 SSR分子標(biāo)記

2.3.1 SSR引物多態(tài)性 2種狼尾草屬牧草單獨篩選引物，其中“熱研4號”篩選出的20對引物，共擴增出83條清晰穩(wěn)定的條帶，其中多態(tài)性條帶52條，占比62.7%。每一對引物擴增出2—8條條帶，平均擴增4.2條，擴增多態(tài)性條帶為0—6條，平均擴增2.6條。多態(tài)信息含量（PIC）為0—0.76，平均為0.245，其中引物SSR43的PIC最大，SSR24、SSR53和SSR70的PIC最?。ū?）?！叭A南”篩選出的20對引物共擴增出81條清晰穩(wěn)定的條帶（圖1），其中多態(tài)性條帶65條，占比80.2%。每一對引物擴增出2—8條帶，平均擴增4.1條，多態(tài)性條帶2—7條，平均擴增3.3條。PIC為0.04—0.76，平均為0.394，其中引物SSR53的PIC最大，而SSR66的PIC最小（表4）。其中SSR19、SSR24、SSR43、SSR47、SSR50、SSR53、SSR54、SSR55和SSR59共9對引物在2種狼尾草屬牧草中均可以擴增出清晰條帶。

表4 “華南” 20對SSR引物序列及其擴增結(jié)果

2.3.2 遺傳相似性分析 通過計算2種狼尾草屬牧草誘變系與其對照之間的遺傳相似系數(shù)（表5），發(fā)現(xiàn)“熱研4號”誘變系材料與對照之間的遺傳相似系數(shù)為0.67—0.89，平均值為0.81。“華南”誘變系材料與對照之間的遺傳相似系數(shù)為0.54—0.86，平均值為0.77。2種牧草誘變系中，突變體RY4-9和HN-24與各自對照的遺傳相似系數(shù)最小，說明它們與對照的遺傳差異最大，而突變體RY4-20和HN-27與各自對照的遺傳相似系數(shù)最大，說明它們變異程度最小。

2.3.3 SSR標(biāo)記位點差異分析 根據(jù)擴增條帶，統(tǒng)計2種誘變系群體與對照之間的差異位點數(shù)（表6）?！盁嵫?號”誘變系與對照的差異位點數(shù)為9—27，平均15.9個，其中突變體RY4-9的差異位點數(shù)最多，為27個，差異位點百分率為32.5%，說明該突變體與對照間的遺傳差異最大。“華南”誘變系與對照間的差異位點數(shù)為10—38，平均18.8個，其中突變體HN-24與對照間的遺傳差異最大，差異位點數(shù)最多，為38個，差異位點百分率為46.9%。以上結(jié)果與遺傳相似性分析的結(jié)果一致。

表5 誘變系與對照材料間的遺傳相似系數(shù)

2.3.4 UPGMA聚類分析 通過對2種狼尾草屬牧草誘變系進行非加權(quán)平均法（UPGMA）聚類分析（圖2），發(fā)現(xiàn)“熱研4號”突變體RY4-9和RY4-23與對照遺傳距離最遠，在遺傳相似系數(shù)為0.72時與其他材料分開，聚為兩類，說明其變異程度最大?！叭A南”突變體HN-24與對照遺傳距離最遠，在遺傳相似系數(shù)為0.53時，單獨聚為一類，是變異程度最大的突變體。

表6 對照材料與誘變系間的SSR標(biāo)記位點差異

3 討論

3.1 60Co-γ射線對2種狼尾草屬牧草種莖成活率的影響

近年來，利用γ射線輻射牧草的研究多集中于小型禾本科或豆科牧草[24]。本研究中2種狼尾草屬牧草均屬于高大型禾本科牧草，考慮到成本與效率，選擇用莖稈作為輻射材料。前人研究發(fā)現(xiàn)輻射劑量過小，可以保證植株成活率，但誘變效率低，輻射劑量過大又會導(dǎo)致較高的死亡率，所以確定所選的輻射劑量是否接近臨界劑量或半致死劑量顯得尤為重要[25]。本試驗基于前期研究工作選用30 Gy的60Co-γ射線對406根“熱研4號”王草種莖和390根“華南”象草種莖進行輻射，2種牧草輻射后代成活率分別為28.01%和32.05%，各自對照的成活率分別為78.57%和85.29%，該結(jié)果相較之前的研究結(jié)果有所下降，但仍然接近于臨界劑量。分析原因可能是本次輻射的材料數(shù)量規(guī)模較大，在運輸過程中增加了莖稈受到其他外源傷害的可能性，從而使成活率有所降低。

M：Marker；CK：對照；1—30：“華南”象草誘變系材料

3.2 60Co-γ射線對2種狼尾草屬牧草表型的影響

通過分析2種牧草形態(tài)變異，發(fā)現(xiàn)“熱研4號”誘變系中超過半數(shù)的突變體在株高、莖節(jié)數(shù)和葉寬3項形態(tài)指標(biāo)上與對照材料有顯著或極顯著差異，而葉長和莖粗變化相對較小。其中突變體RY4-17有31個分蘗，遠遠高于對照，雖然其株高、莖節(jié)數(shù)和葉寬比對照降低，但是生物量略高于對照，該植株可能朝著矮小多分蘗型方向變異；“華南”象草誘變系中，多數(shù)突變體的株高與對照間差異較大，而其他形態(tài)指標(biāo)差異不大，不過也有少數(shù)發(fā)生有益突變的植株，例如HN-12、HN-13和HN-23 3個突變體的各項形態(tài)指標(biāo)均比對照高。研究得到的結(jié)果與前人研究結(jié)果基本一致，既輻射誘變會使生物產(chǎn)生大量的有害突變，例如植株矮小化和生物量降低[26]。宣繼萍等[27]利用60Co-γ射線輻射狗牙根（）后，發(fā)現(xiàn)狗牙根草層高度顯著降低，同時還對狗牙根的葉寬、葉長及節(jié)間直徑有顯著影響。張彥芹等[28]利用60Co-γ射線輻射高羊茅（）分化苗，得到葉片變細、變小的的突變體。此外，還發(fā)現(xiàn)“熱研4號”雜交狼尾草與“華南”象草相比較，在植株表型上更容易發(fā)生突變，分析可能是因為2種牧草倍性不同導(dǎo)致對60Co-γ射線耐受性不同，四倍體對60Co-γ射線的耐受性強于三倍體，但該假設(shè)還需要通過進一步研究來驗證。

3.3 60Co-γ射線對2種狼尾草屬牧草分子遺傳水平的影響

SSR標(biāo)記作為一種共顯性標(biāo)記，具有重復(fù)性高、特異性強、多態(tài)性豐富和操作簡單的特點，已經(jīng)廣泛用于品種鑒定，指紋圖譜構(gòu)建，親緣關(guān)系鑒定等方面[29-32]。于立偉等[33]利用385對SRR標(biāo)記對2個玉米（）突變體和野生型進行變異分析，證明遺傳差異真實存在。抗旱甜菜（）突變體的鑒定也用到了這種技術(shù)[34]。本研究利用篩選出的SSR引物分別對2種牧草誘變系群體隨機挑選的30株植株進行分子水平上的鑒定，發(fā)現(xiàn)“熱研4號”誘變系與對照之間的遺傳相似系數(shù)為0.67—0.89，差異位點數(shù)為9—27，而“華南”誘變系與對照之間的遺傳相似系數(shù)為0.54—0.86，差異位點數(shù)為10—38。同時UPGMA聚類圖表明2個誘變系群體與各自對照之間存在遺傳距離，說明2種牧草在受到30 Gy的60Co-γ射線輻射后，在分子水平上均出現(xiàn)了不同程度的變異，并且推測這種變異多數(shù)是由于一些遺傳片段的缺失導(dǎo)致的（圖1）。

圖2 誘變系的UPGMA聚類圖

4 結(jié)論

受30 Gy60Co-γ射線輻射后，2種狼尾草種莖的成活率大大降低，但同時有效誘導(dǎo)2種狼尾草在形態(tài)學(xué)和遺傳學(xué)水平上產(chǎn)生變異。對于以無性繁殖為主而導(dǎo)致遺傳資源多樣性匱乏的狼尾草而言，使用適宜劑量的60Co-γ射線進行輻射誘變是解決這一問題的有效途徑。

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Mutagenic Effects of60Co-γ-rays on Two Species ofGenus Forages

WU BingChao, TONG Lei, DU ZhaoChang, HU JiaLing, ZHANG Huan, CHEN Yi, LIU Wei, ZHANG XinQuan, Huang LinKai

(Department of Grassland Science, Sichuan Agricultural University, Chengdu 611130)

【Objective】 Exploring the mutagenic effects of60Co-γ-rays on×. cv. Reyan No.4 andSchum. cv. Huanan and creating new germplasm, which aims to promote the process ofbreeding. 【Method】 Based on the pre-dose screening, using stems of the two species ofas materials and irradiated by60Co-γ-rays and the dose was 30 Gy, the dose rate was 1 Gy·min-1. Then, the irradiated stems were planted in the field and conventional field cultivation management was performed. The survivor rate was counted one month later. After the plants to be survived mature, we randomly selected 30 individual plants from the two speciesand 7 morphological indicators of them were measured. Then, molecular markers were used to explore the effects of radiation on genetic variation. 【Result】30 individual plants of the two specieswere selected randomly to measure the morphological indicators, respectively. The heights of 28 mutants, internodes of 21 mutants and leaf breadth of 17 mutants of Reyan No.4 have significant differences at 0.05 or 0.01 levels with the control. The heights of 20 mutants of Huanan have significant differences at 0.05 or 0.01 levels with the control, but there were no significant differences in other morphological indicators with the control. Most of the two species ofmutants showed a decrease in plant height, and the biomass also decreased. However, we found that a mutant RY4-17 whose biomass is more than control because it has more tillers. The results of SSR molecular markers indicated that the average PIC of the 20 primers was 0.245 in the Reyan No.4 mutants, and a total of 83 bands were obtained, of which 52 bands were polymorphic. The GS between the mutants and the control was 0.67-0.89, the average was 0.81, the number of different sites was 9-27, with an average of 15.9. The UPGMA cluster showed that the distance between RY4-9, RY4-23 and control was the longest and indicated the mutation degree was greatest. In the Huanan mutants, the average PIC of the 20 primers was 0.394, a total of 81 bands were obtained, of which 65 bands were polymorphic. And the GS between the mutants and the control was 0.54-0.86, the average was 0.77, the number of different sites was 10-38, with an average of 18.8. The UPGMA cluster showed that the distance between HN-24 and control was the longest and indicated the mutation degree was greatest. 【Conclusion】 The appropriate dose of60Co-γ-rays radiation can significantly reduce the survival rate of the two species,and can effectively induce the mutations in the morphological and genetic. The method is an effective way to solve the lack of genetic resources caused by asexual reproduction of.

;60Co-γ-rays; phenotypic variation; genetic variation; SSR molecular markers

10.3864/j.issn.0578-1752.2019.03.003

2018-10-31；

2018-11-22

四川省育種攻關(guān)項目（2016NYZ0039）、國家農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)體系四川飼草創(chuàng)新團隊

武炳超，E-mail：wubingchao94@163.com。通信作者黃琳凱，E-mail：huanglinkai@sicau.edu.cn

（責(zé)任編輯 李莉）