趙樹(shù)銘

(1.陸軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院輸血科/中國(guó)人民解放軍重慶血站，重慶 400038; 2.貴黔國(guó)際總醫(yī)院/貴州婦女兒童國(guó)際醫(yī)院輸血科，貴陽(yáng) 550018)

血液及其成分在臨床救治中具有非常重要的作用，但由于血液及成分的保存期限制，導(dǎo)致其在臨床的應(yīng)用受限。針對(duì)各種類型血液產(chǎn)品的特性，人們?cè)噲D研究和開(kāi)發(fā)具有長(zhǎng)期保存效果的方法，其中低溫或冰凍保存血液產(chǎn)品是該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。特別是戰(zhàn)爭(zhēng)和緊急創(chuàng)傷救治的需要，冰凍血液產(chǎn)品研發(fā)取得了很快的發(fā)展。紅細(xì)胞采用甘油作為冰凍保護(hù)劑，已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用；血漿可直接進(jìn)行凍存；外周血造血干細(xì)胞采用二甲亞砜(DMSO)作為保護(hù)劑，已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用；冰凍血小板也引起人們濃厚興趣，但還未開(kāi)發(fā)成功和得到廣泛應(yīng)用。因此，對(duì)冰凍血液產(chǎn)品的研發(fā)重點(diǎn)是血小板。近年來(lái)，臨床對(duì)血小板的需求逐年增加。血小板主要用于血小板減少癥和血小板功能異常患者的輸注，通常是對(duì)出血性疾病進(jìn)行預(yù)防性輸注和對(duì)活動(dòng)性出血患者進(jìn)行治療性輸注[1-3]。一般來(lái)說(shuō)，常規(guī)保存的血小板[(22±2)℃]比冷藏血小板具有較好的輸注療效。但因?yàn)槌Ｒ?guī)保存的血小板的保存期較短(僅5 d)，常導(dǎo)致臨床血小板的后勤保障困難[4]。另外，常規(guī)保存也增加了細(xì)菌污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此，人們對(duì)冷藏和冰凍保存血小板的研發(fā)興趣很大，希望開(kāi)發(fā)易保存，且有效期長(zhǎng)的替代產(chǎn)品用于出血性疾病的急救救治，特別是運(yùn)輸不便的偏遠(yuǎn)地區(qū)、農(nóng)村社區(qū)或軍事行動(dòng)等特殊需要[1-4]。

1 冰凍血液產(chǎn)品的種類

早在上世紀(jì)初，人們對(duì)全血加入細(xì)胞保護(hù)劑如羥乙基淀粉進(jìn)行冰凍，并采用液氮控速進(jìn)行降溫保存，但效果較差，這種方式未能成功開(kāi)展[1]。人們轉(zhuǎn)而對(duì)血液成分進(jìn)行冰凍保存研究。在1950年，采用干冰和乙醇于-80 ℃用甘油冰凍保存紅細(xì)胞獲得成功。人們關(guān)注軍隊(duì)和應(yīng)急情況下冰凍血液產(chǎn)品的應(yīng)用。軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)冰凍血液產(chǎn)品的最大考慮因素是，冰凍血液產(chǎn)品的后勤保障、運(yùn)輸、冰凍保存劑的類型及毒性作用、懸浮介質(zhì)等。冰凍保存器也是一個(gè)重要的考慮因素。美國(guó)海軍血液研究所(NBRL)對(duì)冷藏血液產(chǎn)品進(jìn)行了多種評(píng)價(jià)，包括：冰凍保存方法、冰凍處理前保存溫度和時(shí)效、冰凍保護(hù)劑、采用或未采用液氮控制速度的程序、冰凍狀態(tài)下的溫度和保存時(shí)間、融化方法、冰凍保存容器、冰凍劑的去除、混懸介質(zhì)、凍融復(fù)蘇后保存的溫度和時(shí)間、輸注前的相容性試驗(yàn)等。

紅細(xì)胞已經(jīng)成功采用40%(W/V)甘油保存于-80 ℃或20%甘油保存于液氮中，或保存于-150 ℃氣態(tài)的液氮中。甘油是一種良好的細(xì)胞冷藏保護(hù)劑，甘油在經(jīng)過(guò)凍融洗滌后的濃度低于1%時(shí)是一種無(wú)毒的冷藏保護(hù)劑[1,5]。

血小板可采用5% DMSO冰凍保存，冰凍在液氮和可控速度的冰凍容器內(nèi)，可在液氮的氣態(tài)環(huán)境中保存3年，或采用6% DMSO于-80 ℃冰箱可達(dá)至少2年。也有采用5% DMSO保存于液氮的氣態(tài)環(huán)境下而未去除DMSO，也有在輸注前經(jīng)過(guò)離心去除上清DMSO。血小板也可采用6% DMSO冰凍保存于-80 ℃，融化、洗滌、懸浮于血漿中再進(jìn)行輸注。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)已經(jīng)評(píng)審過(guò)有NBRL提交的采用6% DMSO于-80 ℃冰凍保存血小板的方案，輸注前融化、洗滌和重懸于血漿中，輸注給正常志愿者、穩(wěn)定的血小板減少癥患者及有體外循環(huán)的外科手術(shù)患者[6]。世界衛(wèi)生組織(WHO)也推薦對(duì)有需求的自身輸注血小板的患者，可采用冰凍保存方式提供自身血小板。另外，還有采用海藻糖作為血小板的冰凍保存劑的研究報(bào)道[7]。

外周血造血干細(xì)胞采用10% DMSO和(或)羥乙基淀粉或人血清蛋白進(jìn)行1 ℃/min液氮降溫保存于液氮的氣態(tài)或液態(tài)下；或者采用10% DMSO，有或無(wú)羥乙基淀粉，人血清蛋白或血漿，保存于-80 ℃冰箱中。NBRL改進(jìn)了兩種血小板和單個(gè)核細(xì)胞的DMSO保存技術(shù)方案。采用改良的方案，DMSO處理的血小板和DMSO處理的外周血造血干細(xì)胞在細(xì)胞負(fù)載DMSO完成后的冰凍前，經(jīng)離心去除上清液(包含多余的DMSO)，可濃縮血液成分產(chǎn)品，冰凍保存后融化產(chǎn)品可用0.9%氯化鈉進(jìn)行復(fù)蘇，以減少輸注前的洗滌過(guò)程[6]。

血漿冰凍則不需要冷凍保存劑。血漿從抗凝血液[采用枸酸鹽-磷酸鹽-葡萄糖溶液(CPD)抗凝劑]中分離出來(lái)，直接保存于-20 ℃至少1年或-80 ℃達(dá)14年，且可達(dá)到能夠接受的因子Ⅴ和Ⅷ及纖維蛋白原水平。

2 冰凍血液產(chǎn)品的影響因素

2.1溫度 冰凍血液產(chǎn)品的最主要應(yīng)用是軍事和急救用途。維持冰凍血液產(chǎn)品的溫度，采用深低溫冰箱可保持溫度達(dá)-80 ℃和-135 ℃。也可采用液氮-196 ℃保存方式。40%甘油冰凍保存的紅細(xì)胞、6% DMSO冰凍保存的血小板及新鮮冰凍血漿均可采用-80 ℃干冰形式進(jìn)行運(yùn)輸[1-4]。

2.2冰凍保護(hù)劑 紅細(xì)胞可采用甘油，血小板和外周血造血干細(xì)胞可采用DMSO進(jìn)行冰凍保存，血漿無(wú)需保護(hù)劑直接冰凍保存。血小板和外周血造血干細(xì)胞等還可采用海藻糖或海藻糖加磷酸鹽進(jìn)行冰凍保存[7-8]。美國(guó)成功研發(fā)了采用40%(W/V)甘油在-80 ℃冰凍保存紅細(xì)胞的方法；后來(lái)開(kāi)發(fā)了低濃度20%甘油在-150 ℃氣態(tài)的液氮環(huán)境下保存紅細(xì)胞。最方便的40%甘油冰凍保存紅細(xì)胞在-80 ℃環(huán)境(-90～-65 ℃)可達(dá)37年，脫甘油后保存在4 ℃ 24 h，都可以達(dá)到體外質(zhì)量良好。脫甘油洗滌處理的目的是使紅細(xì)胞產(chǎn)品中甘油殘留量低于1%，以避免和預(yù)防發(fā)生溶血[1]。

DMSO是血小板和外周血造血干細(xì)胞最好的冰凍保存劑。冰凍血小板采用5% DMSO以1 ℃/min速度降溫冰凍保存在液氮的氣態(tài)環(huán)境下可達(dá)3年，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。外周血造血干細(xì)胞則可采用10% DMSO結(jié)合自身血漿保存在-70 ℃或-80 ℃冰箱24 h后再保存在液氮中可達(dá)15年。

除DMSO可作為血小板的冰凍保護(hù)劑之外，還有其他一些制劑也可作為冷凍保護(hù)劑，如二甲基乙酰胺(DMAC)[1]。DMAC可作為血小板的冰凍保護(hù)劑，加入葡萄糖則可促進(jìn)這種保護(hù)劑對(duì)血小板的凍存效果，但這一方法未得到廣泛認(rèn)可。

2.3冰凍保存時(shí)降溫速率 冰凍保存紅細(xì)胞、血小板及外周血造血干細(xì)胞從室溫(22 ℃)到-40 ℃可通過(guò)合適的降溫程序以最佳的1 ℃/ min達(dá)到最少損傷血液產(chǎn)品的方式。更為簡(jiǎn)便和常用的方法是，冰凍保存40%(W/V)甘油的紅細(xì)胞、6% DMSO的血小板、10% DMSO的外周血干細(xì)胞及無(wú)需保存劑的血漿，將PVC塑料袋置于聚酯塑料袋中，放置于-80 ℃冰箱的硬紙板盒內(nèi)[1]。

2.4冰凍保存的時(shí)效 冷凍保護(hù)劑的濃度及保存溫度都影響冰凍狀態(tài)的保存時(shí)效。紅細(xì)胞經(jīng)40%(W/V)甘油保存于-80 ℃(-90～-65 ℃)可達(dá)37年。血小板經(jīng)6% DMSO保存于-80 ℃(-90～-65 ℃)可達(dá)2年。外周血造血干細(xì)胞經(jīng)10% DMSO保存于-80 ℃(-90～-65 ℃)可達(dá)1.5年。血漿凍存于-80 ℃(-90～-65 ℃)可達(dá)14年[1]。

2.5破袋率 據(jù)報(bào)道[1]，4 996袋甘油化冰凍保存于PVC塑料袋并置于硬紙殼外包的紅細(xì)胞經(jīng)-80 ℃保存14～18年后破袋率約為2.5%。633袋冰凍保存于-80 ℃的紅細(xì)胞保存14年后，并使用干冰運(yùn)輸，破袋率為6.7%。

2.6冰凍血液產(chǎn)品的復(fù)融 冰凍血液產(chǎn)品可以在42 ℃或36 ℃水浴中置于隔離袋中進(jìn)行復(fù)融，不宜直接接觸水。冰凍血液產(chǎn)品從聚酯塑料袋中取出時(shí)應(yīng)小心放入水浴中。

2.7冰凍血液產(chǎn)品的復(fù)蘇后處理程序 用甘油和DMSO冰凍的血液產(chǎn)品必須在輸注前經(jīng)過(guò)去除甘油和DMSO的復(fù)融處理。甘油是一種細(xì)胞內(nèi)凍存保護(hù)劑，可產(chǎn)生一種滲透效應(yīng)，其從紅細(xì)胞以較慢的進(jìn)入和移出速率，需要反復(fù)洗滌以達(dá)到復(fù)融后甘油濃度低于1%的要求。對(duì)于采用DMSO凍存的血小板和外周血造血干細(xì)胞因在凍存前進(jìn)行了離心去除上清液的處理，復(fù)蘇后則不需要進(jìn)行凍融洗滌。

3 冰凍血液產(chǎn)品的質(zhì)量和功能

3.1冰凍紅細(xì)胞 紅細(xì)胞采用20%甘油在液氮中凍存于-150 ℃氣態(tài)環(huán)境下，需要經(jīng)過(guò)血庫(kù)用離心機(jī)進(jìn)行一系列洗滌過(guò)程以去除甘油，方可用于自身紅細(xì)胞、稀有血型的紅細(xì)胞及特殊紅細(xì)胞的凍存。美軍更是在多種情況下采用低離子介質(zhì)的40%(W/V)甘油-80 ℃凍存紅細(xì)胞。對(duì)于采用20%或40%(W/V)甘油凍存的紅細(xì)胞，都需要高滲和等滲溶液進(jìn)行去甘油處理，以使甘油殘留量小于1%[1]。 可采用手工離心方法進(jìn)行，也可采用全自動(dòng)的解凍、去甘油洗滌的細(xì)胞處理機(jī)，如美國(guó)的ACP215等，國(guó)內(nèi)已有類似產(chǎn)品。國(guó)內(nèi)多數(shù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)采用手工洗滌去甘油的方式制備冰凍解凍去甘油的紅細(xì)胞，也有部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)采用全自動(dòng)機(jī)器進(jìn)行制備。

3.2冰凍血小板 2004年FDA曾出臺(tái)一份血小板評(píng)價(jià)新標(biāo)準(zhǔn)的征求意見(jiàn)稿，試圖對(duì)血小板新產(chǎn)品提出替代的評(píng)價(jià)方法。FDA提議將血小板產(chǎn)品的回收率和存活率均定為66%。人血小板如果采用冷藏或冰凍保存技術(shù)，一些體外檢測(cè)指標(biāo)，如血小板計(jì)數(shù)、流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定標(biāo)志物、血小板聚集率、血栓彈力圖(TEG)等檢測(cè)，可用于評(píng)價(jià)這些產(chǎn)品的特性和功能。依靠這些檢測(cè)指標(biāo)，可以對(duì)冰凍血小板產(chǎn)品用于人類志愿者和患者進(jìn)行判斷。

對(duì)血小板采用6% DMSO在-80 ℃凍存2年，評(píng)價(jià)復(fù)蘇洗滌后體外血小板回收率、血小板聚集率、血小板血栓烷產(chǎn)生、血小板低滲休克反應(yīng)及無(wú)菌狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。自體人血小板采用6% DMSO凍存于-80 ℃，然后再保存-80 ℃、融化、洗滌、再懸浮于自體血漿中，相當(dāng)于自體人常規(guī)血小板保存于22 ℃ 5 d時(shí)的體外回收率和生存期，但具有更強(qiáng)的止血功能。采用6% DMSO -80 ℃凍存2年的異基因血小板，經(jīng)融化、洗滌和再懸浮于血漿后具有大約新鮮異體血小板的75%回收率和輸注給血小板低下癥患者體內(nèi)的50%回收率[1]。

采用自體新鮮液態(tài)血小板或冰凍洗滌血小板在狒狒體內(nèi)進(jìn)行輸注試驗(yàn)表明[1]，冰凍洗滌血小板與保存在22 ℃ 5 d的血小板相比，僅有輕度提升體內(nèi)回收率的效果，但止血功能更加良好，可有效減少因阿司匹林誘導(dǎo)的出血時(shí)間延長(zhǎng)和在出血部位產(chǎn)生血栓烷。異基因凍存的洗滌血小板比異基因常規(guī)血小板具有較低的輸注后存活率，但是在圍術(shù)期對(duì)非手術(shù)性血液丟失及紅細(xì)胞和新鮮冰凍血漿的輸注需求都有減少，這意味著具有較好的止血效果。

經(jīng)DMSO冰凍的血小板的促凝血活力可通過(guò)因子Ⅴ和Ⅹ的聚集和血小板膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)結(jié)合力進(jìn)行評(píng)價(jià)。Annexin V結(jié)合力與磷脂酰絲氨酸暴露可用于評(píng)價(jià)血小板及血小板微粒的促凝血活性。血小板及血小板來(lái)源的微粒的磷脂酰絲氨酸通過(guò)提供因子Ⅴa和因子Ⅹa的裂解位點(diǎn)，參與后續(xù)的凝血瀑布系統(tǒng)。Annexin V與磷脂酰絲氨酸的結(jié)合也證實(shí)血小板及血小板微粒的凋亡，導(dǎo)致被組織巨噬細(xì)胞快速清除。這也是低溫保存血小板被活化后在體內(nèi)快速清除的原因[1]。

在以前的研究中，采用6% DMSO -80 ℃保存人和狒狒血小板，經(jīng)融化、洗滌后再懸浮于血漿中，發(fā)現(xiàn)血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)正常和 GPIb減少兩類血小板。在狒狒中，自體GPIb正常的血小板數(shù)與輸注后1～2 h回收率為48%和血小板存活時(shí)間6 d之間呈相關(guān)性。聚集了促凝血因子Ⅴ的GPIb減少型血小板和GPIb減少的因子Ⅴ陽(yáng)性血小板被快速?gòu)难h(huán)中清除。相似地，凍干復(fù)蘇的自體狒狒血小板比新鮮血小板被發(fā)現(xiàn)聚集更多的促凝血因子Ⅴ，而且體內(nèi)存活不超過(guò)15 min。

通過(guò)采用花生四烯酸和腺苷二磷酸刺激血小板產(chǎn)生血栓烷A2的研究，冰凍血小板比液態(tài)血小板產(chǎn)生血栓烷A2更多，累計(jì)的因子Ⅴ也比常規(guī)血小板更多。冰凍血小板較強(qiáng)的促凝活性和血栓烷A2產(chǎn)生的增加，在患者身上就體現(xiàn)在輸注后增加止血效果，減少了非手術(shù)血液丟失和對(duì)異體紅細(xì)胞和新鮮冰凍血漿的輸注需求。大量研究已表明，冰凍血小板的增加的體內(nèi)止血功能與其促凝血活力及產(chǎn)生血栓烷的能力呈相關(guān)性。

對(duì)采用DMSO是否冰凍前進(jìn)行洗滌去除上清液的血小板進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)冰凍前去除DMSO方法的凍融后血小板回收率為94%和血小板微粒產(chǎn)生達(dá)7%，而冰凍前未去除DMSO上清液的老式方法的血小板回收率為69%和微粒產(chǎn)生達(dá)15%。目前采用改進(jìn)的冰凍前去除DMSO的方法，DMSO低溫保存人血小板的操作要求用250 mL 0.9%氯化鈉-0.2%葡萄糖-40 mg%無(wú)機(jī)磷酸鹽溶液(pH 5.0)洗滌去除DMSO。洗滌的血小板再離心去除上清液后，再懸浮于50 mL全血保養(yǎng)液(ACD)血漿中。由于DMSO的加入及血小板的洗滌均是在開(kāi)放狀態(tài)下進(jìn)行的，因此洗滌后的血小板要求在室溫下無(wú)需振搖保存不超過(guò)6 h。國(guó)內(nèi)大多采用5%～6% DMSO凍存血小板，復(fù)蘇后直接輸注的方式，也具有良好的止血效果。

海藻糖作為一種優(yōu)良的細(xì)胞低溫保護(hù)劑可望用于血小板的低溫保存。研究表明海藻糖凍存血小板顯示出與新鮮血小板相似的凝血酶刺激的凝集反應(yīng)，可保護(hù)血小板的結(jié)構(gòu)和功能，包括完整的漿膜結(jié)構(gòu)、代謝活性和對(duì)凝血酶的刺激反應(yīng)。海藻糖作為人體內(nèi)本身存在的一種多糖，無(wú)毒，有望開(kāi)發(fā)為血小板的冰凍保護(hù)劑[7-8]。

4 冰凍血液產(chǎn)品的臨床應(yīng)用

4.1冰凍紅細(xì)胞 一般民營(yíng)醫(yī)院不使用冰凍紅細(xì)胞產(chǎn)品。預(yù)期手術(shù)和預(yù)期未來(lái)用紅細(xì)胞的自體紅細(xì)胞受者可采用冰凍保存技術(shù)。稀有血型紅細(xì)胞也可以被冰凍保存，可用于自身或異基因紅細(xì)胞輸注。另外，同種異基因凍存洗滌紅細(xì)胞也推薦給免疫球蛋白A缺乏癥的患者。如采用加甘油和去甘油過(guò)程為“開(kāi)放”式系統(tǒng)，冰凍保存的紅細(xì)胞因只有24 h的復(fù)蘇凍融后的保存時(shí)間。現(xiàn)在采用全自動(dòng)細(xì)胞處理儀，可使去甘油的紅細(xì)胞保存在4 ℃達(dá)2周，可使冰凍的O型紅細(xì)胞得到廣泛應(yīng)用，凍存O型紅細(xì)胞可作為一種通用型的血液儲(chǔ)備特別是對(duì)軍事行動(dòng)具有重大意義。國(guó)內(nèi)采用手工方法可制備冰凍-解凍后洗滌的紅細(xì)胞，也有全自動(dòng)細(xì)胞處理儀研制成功，將極大地推動(dòng)冰凍紅細(xì)胞在稀有血型的血液、自身保存血液，以及特殊情況和軍事行動(dòng)等血液保障工作。

總之，冰凍保存技術(shù)可以用于儲(chǔ)備大量的稀有血型紅細(xì)胞及愿意選擇儲(chǔ)存紅細(xì)胞的志愿者。冰凍保存技術(shù)還可以用于隔離保存通用型紅細(xì)胞至少6個(gè)月，以便對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行再次傳染性指標(biāo)檢測(cè)，從而確保更有效降低窗口期的風(fēng)險(xiǎn)[1-3]。

4.2冰凍血小板 FDA在1988年認(rèn)可DMSO作為人血小板的冰凍保護(hù)劑。NBRL后來(lái)改進(jìn)減少了凍融洗滌步驟，簡(jiǎn)化了冰凍保存過(guò)程。制備冰凍血小板復(fù)蘇后溶于0.9%氯化鈉溶液中僅需要15 min[1-3]。冰凍血小板因含有活化的血小板及因保存而產(chǎn)生的血小板源性微粒，對(duì)出血患者具有明顯的止血作用，更有利于創(chuàng)傷患者的止血使用?；罨谋鶅鲅“逶隗w內(nèi)易被很快清除，這可能是血小板作為預(yù)防性輸注的一大缺陷，但可作為出血性創(chuàng)傷患者的緊急救治。冰凍血小板在創(chuàng)傷患者的早期凝血功能障礙性出血期即可使用，這些活化的血小板和微?？稍缬诖傺ㄐ纬善诰蛷难貉h(huán)中消失，由于高濃度的血小板與發(fā)生血栓栓塞事件密切相關(guān)，因此這相對(duì)于常規(guī)保存的血小板在體內(nèi)較長(zhǎng)存活還是一個(gè)優(yōu)點(diǎn)[9]。

4.3冰凍血液產(chǎn)品 荷蘭軍隊(duì)將-80 ℃冰凍保存紅細(xì)胞、血漿和血小板結(jié)合常規(guī)的懸浮紅細(xì)胞制劑用于海外軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的創(chuàng)傷救治。冰凍血液可救治武裝沖突時(shí)發(fā)生的戰(zhàn)創(chuàng)傷患者，不需要再進(jìn)行戰(zhàn)地血液采集。這些結(jié)果還可對(duì)平時(shí)邊遠(yuǎn)地區(qū)的血液供應(yīng)提供經(jīng)驗(yàn)[3]。荷蘭軍方在海外采用一種統(tǒng)一的供者冰凍血液產(chǎn)品，以補(bǔ)充液態(tài)血液產(chǎn)品。所有融化(洗滌)的冰凍血液產(chǎn)品均符合國(guó)際相關(guān)規(guī)定與指南。-80 ℃冰凍保存的紅細(xì)胞、血漿和血小板在融化后均可使用，可減少運(yùn)輸和取締移動(dòng)血庫(kù)。所有血液產(chǎn)品在冰凍前均進(jìn)行了濾白處理和全面的病原體檢測(cè)，所有血小板均在融化后6 h內(nèi)使用，所有血型檢測(cè)均無(wú)差錯(cuò)，少數(shù)液態(tài)庫(kù)存的紅細(xì)胞用于輸注，血漿均從AB型男性采集，所有這些均減少了輸血反應(yīng)發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。新鮮冰凍血液產(chǎn)品與常規(guī)血液產(chǎn)品相比至少是等效的，而且更為安全。

5 冰凍血液產(chǎn)品輸注的不良反應(yīng)

對(duì)紅細(xì)胞和血小板開(kāi)發(fā)有效的低溫保存技術(shù)，以維持體外最大的生物活力，結(jié)合冰凍血漿的應(yīng)用，可為臨床提供一種通用的血液庫(kù)存策略。但由于冰凍保存血液產(chǎn)品有些需要添加凍存保護(hù)劑，應(yīng)注意其不良反應(yīng)。

5.1冰凍紅細(xì)胞 冰凍紅細(xì)胞復(fù)蘇后需要反復(fù)洗滌以去除甘油，使甘油殘留量低于1%，即可預(yù)防發(fā)生溶血。荷蘭軍隊(duì)的經(jīng)驗(yàn)表明，冰凍血液供應(yīng)和大劑量輸血是安全有效的，輸血反應(yīng)發(fā)生率及死亡率低。冰凍紅細(xì)胞現(xiàn)在已經(jīng)被普遍接受，荷蘭、美國(guó)等軍隊(duì)均已廣泛使用[1-3]。

5.2冰凍血小板 冰凍血小板和外周血造血干細(xì)胞使用的冰凍保護(hù)劑最主要的是DMSO。據(jù)認(rèn)為，DMSO是一種滲透性保護(hù)劑，能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，減輕自由基對(duì)細(xì)胞損害，改變生物膜對(duì)電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。但研究表明，DMSO存在一定的毒性作用，與蛋白質(zhì)疏水基團(tuán)發(fā)生作用，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，具有血管毒性和肝腎毒性。最為常見(jiàn)的不良反應(yīng)為惡心、嘔吐、皮疹及在皮膚和呼出的氣體中發(fā)出大蒜、洋蔥味。DMSO可代謝成二甲基硫醚和二甲基砜，其可能的不良反應(yīng)是升高血中的二甲基硫醚水平，導(dǎo)致一種血源性口臭癥狀。對(duì)于臨床患者，采用非干預(yù)的觀察，歐洲多家移植中心對(duì)自體干細(xì)胞移植的骨髓瘤和淋巴瘤患者采用DMSO凍存干細(xì)胞發(fā)生的不良反應(yīng)進(jìn)行分析，提出應(yīng)更好地對(duì)DMSO保存干細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，減少患者DMSO的攝入量，以減少移植者的不良反應(yīng)和死亡率[10]。研究發(fā)現(xiàn)DMSO不宜用作化療藥的熔劑，因其會(huì)與化療藥發(fā)生反應(yīng)，從而抑制它們的毒性作用和殺傷作用。DMSO可通過(guò)調(diào)理3種DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的轉(zhuǎn)錄本及改變基因組的甲基化譜系，進(jìn)而影響小鼠胚胎體的表觀基因組，造成鼠干細(xì)胞的一種未受控制的分化。因此，國(guó)外已有對(duì)干細(xì)胞移植時(shí)采用去除DMSO的洗滌方式來(lái)減少可能的DMSO毒性作用。

海藻糖作為一種優(yōu)良的細(xì)胞低溫保護(hù)劑可望用于血小板的低溫保存。研究表明海藻糖凍存血小板顯示出與新鮮血小板相似的凝血酶刺激的凝集反應(yīng)，可保護(hù)血小板的結(jié)構(gòu)和功能，包括完整的漿膜結(jié)構(gòu)、代謝活性和對(duì)凝血酶的刺激反應(yīng)。海藻糖無(wú)毒，且作為人體內(nèi)本身存在的一種多糖，有望開(kāi)發(fā)為血小板的冰凍保護(hù)劑。

國(guó)內(nèi)多家報(bào)道采用DMSO凍存血小板，并應(yīng)用于臨床患者的救治，特別是外科出血者，起到了良好的治療作用；有些并未在冰凍前去除多余的DMSO，對(duì)臨床應(yīng)用的潛在風(fēng)險(xiǎn)還需進(jìn)行大樣本和多中心的臨床試驗(yàn)。因此，筆者認(rèn)為，在未取得科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑囼?yàn)數(shù)據(jù)之前，對(duì)冰凍血小板的深入研究還需進(jìn)一步加強(qiáng)，對(duì)其臨床應(yīng)用還應(yīng)更為小心謹(jǐn)慎，期望在不遠(yuǎn)的將來(lái)能開(kāi)發(fā)出良好的冰凍甚至是凍干血小板類產(chǎn)品以方便臨床使用。

6 結(jié) 語(yǔ)

冰凍血液產(chǎn)品的研發(fā)取得了很大的成功。紅細(xì)胞采用甘油作為冰凍保護(hù)劑，安全有效；血漿可直接進(jìn)行凍存；外周血造血干細(xì)胞采用DMSO作為保護(hù)劑，已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用；血小板采用DMSO作為冰凍保護(hù)劑，是目前認(rèn)為最好的方法，但因DMSO還存在一定毒副作用，對(duì)臨床適應(yīng)證還應(yīng)進(jìn)行多中心臨床觀察，對(duì)冰凍血小板的臨床廣泛應(yīng)用還應(yīng)小心謹(jǐn)慎。