游靜

（湖南應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，湖南常德415000）

隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，各種微生物檢驗(yàn)試劑被細(xì)分化，檢測工作也因此更加快捷方便。但是，檢測過程中尤其是在微生物的分離培養(yǎng)中會(huì)遇到難分離、生化反應(yīng)不明顯等現(xiàn)象，這時(shí)培養(yǎng)基的質(zhì)量起到了決定性的因素。培養(yǎng)基是保證微生物繁殖、維持其活力的物質(zhì)，是微生物生存的場所，其存在狀態(tài)主要有液體、半固體或者固體。如果培養(yǎng)基的質(zhì)量達(dá)不到微生物生存的條件，那么微生物檢驗(yàn)結(jié)果就會(huì)受到影響，所以做好培養(yǎng)基的質(zhì)量控制對(duì)于保障檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性意義重大?；诖?，就培養(yǎng)基的選購、驗(yàn)收及配制過程中的注意事項(xiàng)做以下分析。

1 培養(yǎng)基的選購與驗(yàn)收

1.1 培養(yǎng)基的采購

實(shí)驗(yàn)室所用培養(yǎng)基除實(shí)驗(yàn)過程特殊要求外，基本選用市場上方便又快捷的商業(yè)化合成培養(yǎng)基。商業(yè)化培養(yǎng)基有以下優(yōu)點(diǎn)：（1）不需要實(shí)驗(yàn)人員動(dòng)手配制，節(jié)約時(shí)間成本；（2）不會(huì)有其它物質(zhì)的污染，避免給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來物質(zhì)干擾；（3）操作誤差較小等。但是市面上人工合成的培養(yǎng)基質(zhì)量參差不齊，不同廠家培養(yǎng)基對(duì)同一樣品檢測得到的結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)很大的差異。因此，實(shí)驗(yàn)室在選購過程之中應(yīng)該注重質(zhì)量，選購?fù)ㄟ^質(zhì)量管理體系認(rèn)證、信譽(yù)度高、知名度高且質(zhì)量有保障的廠家的產(chǎn)品。選購質(zhì)量有保證的培養(yǎng)基，是出具準(zhǔn)確檢測結(jié)果的基礎(chǔ)。

1.2 培養(yǎng)基的驗(yàn)收

培養(yǎng)基要應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)過程中，需經(jīng)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收合格后才可使用。培養(yǎng)基購買后應(yīng)交由專業(yè)人員進(jìn)行驗(yàn)收，認(rèn)真核驗(yàn)并記錄培養(yǎng)基的名稱、培養(yǎng)基的數(shù)量、批號(hào)以及有效日期，同時(shí)查驗(yàn)相應(yīng)培養(yǎng)基的質(zhì)檢報(bào)告，保證其有良好的理化指標(biāo)和微生物性能測量指標(biāo)，做到每種培養(yǎng)基質(zhì)量可溯源。做好一切的檢驗(yàn)工作之后方可入庫儲(chǔ)存。

培養(yǎng)基在實(shí)驗(yàn)室具體投入使用之前必須要進(jìn)行測試，保證其各項(xiàng)指標(biāo)都符合使用標(biāo)準(zhǔn)，主要是理化指標(biāo)以及微生物性能指標(biāo)測試。

1.2.1 理化指標(biāo)測試

理化指標(biāo)測試主要是指培養(yǎng)基的pH值、顏色、澄清度以及穩(wěn)定性等方面的檢測。具體檢測過程中，工作人員應(yīng)對(duì)這些外在因素進(jìn)行具體研究，觀察其與商家提供的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)是否符合。做好這些因素的控制，保障培養(yǎng)基的質(zhì)量，需要廠家在生產(chǎn)過程中從原材料以及生產(chǎn)過程、生產(chǎn)工藝等幾方面進(jìn)行控制。如果出現(xiàn)問題，工作人員應(yīng)及時(shí)更換培養(yǎng)基，同時(shí)與生產(chǎn)廠家進(jìn)行溝通，督促其調(diào)整自己的生產(chǎn)工藝，做好生產(chǎn)原料質(zhì)量的控制，保障培養(yǎng)基質(zhì)量。工作人員在檢驗(yàn)過程中一旦發(fā)現(xiàn)任何問題，應(yīng)立即停止該培養(yǎng)基的使用，因?yàn)槲⑸餀z測過程中培養(yǎng)基較小的質(zhì)量差異都會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成巨大的影響。

1.2.2 性能指標(biāo)測試

利用培養(yǎng)基進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)必須要保證除了實(shí)驗(yàn)的微生物以外沒有其他的微生物可以存活，以避免對(duì)最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。培養(yǎng)基在投入生產(chǎn)使用之前，工作人員應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基的生長率、選擇性和特異性進(jìn)行具體檢測，確保試驗(yàn)過程中不會(huì)有外在因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不利影響。生長率是指實(shí)驗(yàn)菌種在培養(yǎng)基上的存活率，培養(yǎng)基對(duì)該實(shí)驗(yàn)菌種的促生長率，確保微生物在該培養(yǎng)基上能夠長久地存活，且不斷繁殖，方便以后觀察與實(shí)驗(yàn)。選擇性是指培養(yǎng)基對(duì)于其他非實(shí)驗(yàn)生物的抑制性，避免其對(duì)最終的試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生不利影響。而特異性則是指培養(yǎng)基的指示能力，實(shí)驗(yàn)菌種在培養(yǎng)機(jī)制上會(huì)形成相應(yīng)的菌落，該群落的外部形態(tài)必須與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、以往的經(jīng)驗(yàn)相符合，否則該培養(yǎng)基則存在質(zhì)量方面的問題。在具體的實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行控制，具體的方法包括定量法、半定量法、定性法。其中半定量法和定性法應(yīng)用使用較為廣泛。

2 培養(yǎng)基配制過程中的注意事項(xiàng)

2.1 配制要求

2.1.1 一般要求

為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，培養(yǎng)基的配制必須按照相應(yīng)的要求進(jìn)行，做好配制記錄，記錄好培養(yǎng)基的名稱等各方面外部條件，確保培養(yǎng)基的質(zhì)量，確保其能夠保障實(shí)驗(yàn)順利完成。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)用水

實(shí)驗(yàn)過程中，培養(yǎng)基的配制用水有著嚴(yán)格的要求，pH值應(yīng)為中性，水溫保持在25 ℃左右。除了規(guī)定的要求以外，水中的菌落不能對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響，應(yīng)按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行具體的菌落總數(shù)測定，檢驗(yàn)水污染狀況。為了避免這種情況，實(shí)驗(yàn)過程中一般使用蒸餾水，這樣可以減少其它因素的干擾。

2.2 配制步驟

培養(yǎng)基的配制具體分為稱量、溶解和分裝3個(gè)步驟。稱量過程中應(yīng)注意空氣濕度，在具體實(shí)踐過程中應(yīng)選擇濕度較低的房間，防止培養(yǎng)基受潮，滋生細(xì)菌。此外，在具體稱量過程中還應(yīng)正確使用天平，定量選擇，精確到位。還要使用專業(yè)的稱量物、量取儀器，防止交叉感染。分裝器具應(yīng)盡量選擇玻璃容器，不建議選擇銅鐵制品的容器，因?yàn)檫@些容器本身在配制過程中會(huì)釋放鐵離子到培養(yǎng)基中，這對(duì)于細(xì)菌的成長與菌落菌株的控制十分不利。溶解時(shí)應(yīng)注意溫度、適當(dāng)加熱，分步驟、多層次加水，保障培養(yǎng)基能夠充分融合。分裝過程是將培養(yǎng)基分配到不同的容器中，應(yīng)注意容器至少比培養(yǎng)基體積大1/5。

2.3 滅菌要求

滅菌是保證培養(yǎng)基質(zhì)量的關(guān)鍵步驟，滅菌方法分為干熱滅菌和濕熱滅菌2種，這2種方法各有優(yōu)點(diǎn)，但一般選擇濕熱滅菌。在具體實(shí)踐過程中，應(yīng)切實(shí)保證培養(yǎng)基的質(zhì)量，滅菌應(yīng)以不損害培養(yǎng)基質(zhì)量為前提。具體操作條件為在121 ℃環(huán)境中滅菌15～20 min。滅菌完成后，應(yīng)采用具體的檢測方法進(jìn)行滅菌效果的檢驗(yàn)。不同培養(yǎng)基的滅菌方法存在差異，有些只需要高溫加熱煮沸即可。因此，工作人員在具體檢驗(yàn)過程中要注意具體問題具體分析。

2.4 存儲(chǔ)

培養(yǎng)基的存儲(chǔ)首先應(yīng)保證其在適宜菌種生長的溫度中，不可過高或過低。滅菌完成后，應(yīng)立刻緊密封鎖容器蓋，避免受潮或者是空氣中的細(xì)菌落入培養(yǎng)基中，影響到實(shí)驗(yàn)觀察。此外，還應(yīng)該保證培養(yǎng)基在其有效期內(nèi)能夠使用完，避免影響到最終結(jié)果。培養(yǎng)基使用后，應(yīng)對(duì)各培養(yǎng)菌種、培養(yǎng)基做好標(biāo)識(shí)，方便今后觀察選用。

3 結(jié)語

微生物檢測過程中，培養(yǎng)基的質(zhì)量直接影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果。做好培養(yǎng)基的質(zhì)量控制對(duì)提升微生物檢驗(yàn)效果有著很大的幫助。通過對(duì)培養(yǎng)基的選購、驗(yàn)收及配制過程中的注意事項(xiàng)進(jìn)行分析，為實(shí)驗(yàn)室以后開展檢驗(yàn)工作做好培養(yǎng)基的控制提供了參考。