許迪明，劉忠義，王春芳

（寧波海關(guān)，浙江 寧波，315012）

0 引 言

維生素A又稱視黃醇或抗干眼病因子，是一類脂溶性維生素。維生素A具有促進(jìn)生長發(fā)育，延長壽命，保護(hù)視覺與上皮細(xì)胞的作用。維生素A缺乏，產(chǎn)生夜盲癥、干眼病等疾病，維生素A過量也會(huì)引發(fā)中毒癥狀[1]。

目前測定維生素A的方法有比色法，紫外分光光度法和高效液相色譜法等[2]。其中高效液相色譜法較為常用，現(xiàn)行有效的測定食品中維生素A的國標(biāo)GB 5009.82-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素A、D、E的測定》采用該方法測定[3]。

測定食品中維生素A的國標(biāo)[3-5]，先后有三版，分別是GB/T 12388-1990《食物中維生素A和維生素E的測定方法》、GB 5009.82-2003《食品中維生素A和維生素E的測定》和GB 5009.82-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素A、D、E的測定》。上述三個(gè)國標(biāo)方法測定維生素A的原理基本相同，即樣品經(jīng)皂化、提取、凈化后，用液相色譜進(jìn)行分析。但具體測定步驟略有不同，皂化時(shí)采用的抗氧化劑、皂化裝置、提取溶劑，以及液相定量方法有區(qū)別。本文采用奶粉為樣品，對(duì)上述GB 5009.82-2003《食品中維生素A和維生素E的測定》和GB 5009.82-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素A、D、E的測定》方法的采用的抗氧化劑、提取溶劑以及液相定量方法進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)回收率的影響。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

安捷倫1100高效液相色譜儀，配紫外檢測器；梅特勒PL203電子天平；上海左樂SHA-B水浴恒溫振蕩器；Heidolph Hei-VAP Advantage旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；美國OrganomationN-EVAPTM112氮吹儀。

1.1.2 試劑

氫氧化鉀（分析純）；乙醚（分析純）；石油醚（30℃～60℃）（分析純）；無水硫酸鈉（分析純）；無水乙醇（分析純）；抗壞血酸（分析純）；2,6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）（分析純）；甲醇（色譜純）；維生素A標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥95.0%）；苯并[e]芘（純度≥98.0%）。苯并[e]芘標(biāo)準(zhǔn)溶液100 ug/m L。實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

1.2 色譜條件

色譜柱：資生堂MGⅡC18柱，250mm×4.6mm，5um；流動(dòng)相：乙腈+甲醇(8+2)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：325 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20 uL。

1.3 樣品處理

1.3.1 GB 5009.82-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素A、D、E的測定》

稱取5 g奶粉試樣于平底燒瓶，加入20 m L溫水后搖勻，再加入1.0 g抗壞血酸和0.1 g BHT后搖勻，加入30 mL無水乙醇，加入20 mL氫氧化鉀（1+1）水溶液，混勻后于80℃恒溫水浴震蕩皂化30 min，皂化后冷卻至室溫。皂化液轉(zhuǎn)入分液漏斗，加入50 mL乙醚—石油醚混合液（1+1），振蕩萃取5 min，將下層溶液轉(zhuǎn)移至另一分液漏斗，再加入50 mL乙醚—石油醚混合液（1+1）再次萃取，合并醚層。用約100 mL水洗滌醚層，重復(fù)3次，直至將醚層洗至中性，去除下層水相。醚層經(jīng)無水硫酸鈉（約3 g）濾入雞心瓶中，用15 m L石油醚沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉2次，并入雞心瓶，于40℃蒸餾至約2 mL時(shí)，用氮?dú)獯抵两?。用甲醇定容至刻?0 mL。溶液過0.22μm有機(jī)系濾膜后供高效液相色譜測定。外標(biāo)法定量。

1.3.2 GB 5009.82-2003《食品中維生素A和維生素E的測定》

稱取5 g奶粉試樣于皂化瓶中，加入20 mL50℃水溶解，加30 mL無水乙醇，攪拌均勻。加10 mL10%抗壞血酸溶液，苯并[e]芘標(biāo)準(zhǔn)液100 ug/mL 200 uL，混勻。加入10 mL氫氧化鉀（1+1）水溶液，混勻，于沸水浴回流30 min使皂化完全。皂化后立即冷卻。將皂化后的試樣移入分液漏斗，用約100 mL乙醚分兩次洗皂化瓶及其殘?jiān)?，合并乙醚液于分液漏斗中。輕輕振搖分液漏斗2 min，靜置分層，棄去水層。用約50 mL水洗分液漏斗中的乙醚層直至水層不顯堿性。將乙醚提取液經(jīng)過無水硫酸鈉（約5 g）濾入于雞心瓶內(nèi)，用約100 mL乙醚沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉3次，并入雞心瓶，于55℃水浴中減壓蒸餾至剩下約2 mL乙醚時(shí)，取下蒸發(fā)瓶，用氮?dú)獯档粢颐选Ａ⒓醇尤?.00 mL乙醇，充分混合，溶解提取物。溶液過0.22μm有機(jī)系濾膜后供高效液相色譜測定。內(nèi)標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 兩版國標(biāo)方法比較

以奶粉為樣品，采用GB 5009.82-2003和GB 5009.82-2016兩版國標(biāo)方法測定其維生素A含量的回收率，見表1。

表1 GB 5009.82兩版國標(biāo)測定結(jié)果的比較 %

結(jié)果表明，GB 5009.82-2003測定結(jié)果回收率高，在100%左右；GB 5009.82-2016測定回收率較低，在80%左右。

2.2 液相色譜定量方法

兩版國標(biāo)中，液相色譜定量方法有區(qū)別，GB 5009.82-2003采用內(nèi)標(biāo)法定量，而GB 5009.82—2016采用外標(biāo)法定量。為考察內(nèi)外標(biāo)法對(duì)測定結(jié)果的影響，分別采用兩個(gè)國標(biāo)的前處理方法，分別內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法進(jìn)行定量，結(jié)果見表2、表3。

表2 GB5009.82-2003維生素A測定內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法的比較%

表3 GB5009.82-2016維生素A測定內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法的比較%

表2、表3結(jié)果顯示，采用任意一版國標(biāo)的前處理方法，液相定量方法采用內(nèi)標(biāo)法，其回收率在100%左右；而采用外標(biāo)法定量，回收率在70%～80%。

2.3 抗氧化劑的選擇

抗氧化劑的使用，兩版國標(biāo)有差別，GB 5009.82-2003采用10%抗壞血酸溶液，而GB 5009.82-2016則直接加入1.0 g抗壞血酸和0.1 g BHT固體。為考察兩者區(qū)別，采用GB 5009.82-2003的前處理方法，比較兩者的抗氧化效果，結(jié)果見表4。

表4 GB5009.82兩版國標(biāo)抗氧化劑效果比較 %

采用10%抗壞血酸溶液和1.0 g抗壞血酸和0.1 g BHT固體，測定維生素A的回收率相差不大，因此10%抗壞血酸溶液和1.0 g抗壞血酸和0.1 g BHT固體的抗氧化效果相差不大。

2.4 提取溶劑的選擇

提取溶劑的選擇，兩版國標(biāo)有差別，GB 5009.82-2003采用乙醚提取，而GB 5009.82-2016采用乙醚-石油醚混合液（1+1）提取。為考察兩者區(qū)別，采用GB 5009.82-2003的前處理方法，比較兩者的實(shí)驗(yàn)效果，結(jié)果見表5。

表5 GB 5009.82兩版國標(biāo)提取試劑效果比較 %

提取試劑采用乙醚與乙醚—石油醚混合液（1+1），測定維生素A的回收率相差不大，乙醚、乙醚—石油醚的提取效果相差不大。

3 結(jié) 論

兩版測定食品中維生素A的國標(biāo)，其原理相同，操作大致相同，只是在抗氧化劑、皂化溫度提取試劑和定量方法有所區(qū)別。GB 5009.82-2003實(shí)驗(yàn)回收率較GB 5009.82-2016實(shí)驗(yàn)回收率高，原因是GB 5009.82-2003采用內(nèi)標(biāo)法，而GB 5009.82-2016采用外標(biāo)法。其他兩個(gè)因素，抗氧化劑和提取試劑的區(qū)別對(duì)實(shí)驗(yàn)回收率影響不大。