孫秀梅，郜 文，葉茂盛，郝 青，金衍健，胡紅美，郭遠(yuǎn)明，應(yīng)忠真

(1.浙江省海洋水產(chǎn)研究所 浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 舟山 316021；2.浙江海洋大學(xué)海洋與漁業(yè)研究所，浙江 舟山 3160211)

養(yǎng)殖水產(chǎn)品中常見(jiàn)的殘留農(nóng)藥為殺蟲劑、殺螨劑、殺菌劑以及除草劑類[1]。有機(jī)氯農(nóng)藥和有機(jī)磷農(nóng)藥是常用的兩類殺蟲劑。我國(guó)早在80年代開始禁止有機(jī)氯農(nóng)藥，現(xiàn)在環(huán)境基質(zhì)中其含量已經(jīng)較低，有機(jī)氯農(nóng)藥污染主要來(lái)源是早期殘留[2]。有機(jī)磷農(nóng)藥是我國(guó)農(nóng)藥市場(chǎng)所占份額最大且使用比較廣泛的一類農(nóng)藥。通常有機(jī)磷農(nóng)藥被認(rèn)為是易降解、不易殘留和富集的一類農(nóng)藥，曾一度被認(rèn)為是有機(jī)氯農(nóng)藥的替代農(nóng)藥。而事實(shí)上，有機(jī)磷農(nóng)藥可以在生物體內(nèi)與膽堿酯酶形成磷酰化膽堿酯酶，從而對(duì)生物體產(chǎn)生毒性[3]。2015年世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥致癌性的審查評(píng)估中，草甘膦被重新評(píng)級(jí)為“對(duì)人類可能的致癌物”。關(guān)于浙江省水產(chǎn)品中多氯聯(lián)苯、滴滴涕、六六六等有機(jī)氯有機(jī)物已有研究報(bào)道,而對(duì)有機(jī)磷類農(nóng)藥在浙江省養(yǎng)殖水產(chǎn)品中的殘留和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)尚未有報(bào)道。

有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析和評(píng)價(jià)的前提是對(duì)其準(zhǔn)確的定性定量分析。樣品的凈化除雜是有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測(cè)分析的關(guān)鍵步驟。在農(nóng)藥多殘留分析除雜過(guò)程中基質(zhì)分散固相萃取方法雖應(yīng)用較廣泛，但其除雜能力有限，比較適合植物性樣品，對(duì)有機(jī)質(zhì)豐富的養(yǎng)殖環(huán)境樣品及水產(chǎn)品效果有限[4]。水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)方法主要為氣相色譜質(zhì)譜法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[5-11]。本文開發(fā)一種了水產(chǎn)品中28種有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留的準(zhǔn)確、便捷測(cè)定方法，利用建立的方法來(lái)監(jiān)測(cè)水產(chǎn)品中有機(jī)磷、菊酯類農(nóng)藥殘留水平并根據(jù)居民膳食消費(fèi)習(xí)慣，結(jié)合現(xiàn)行的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)/世界衛(wèi)生組織(WHO)相關(guān)規(guī)定，對(duì)浙江省居民水產(chǎn)品消費(fèi)中有機(jī)磷農(nóng)藥暴露風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

在溫州區(qū)域分別采集了牡蠣、泥蚶、青蛤、縊蟶、烏鱧、貽貝、南美白對(duì)蝦、黑鯛、鱸魚、大黃魚、甌江彩鯉等水產(chǎn)品。正己烷、乙酸乙酯、丙酮、N-丙基二乙胺(PSA)、硅膠固相萃取小柱(500 mg，3 mL)。

28種有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，有機(jī)磷各組分為甲胺磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷、氧化樂(lè)果、滅線磷、硫線磷、甲拌磷、樂(lè)果、特丁硫磷、地蟲硫磷、磷胺、二嗪磷、甲基對(duì)硫磷、皮影磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、倍硫磷、毒死蜱、對(duì)硫磷、水胺硫磷、喹硫磷、殺撲磷、苯線磷、丙溴磷、三唑磷、亞胺硫磷、伏殺磷、蠅毒磷。

1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜儀，渦旋振蕩器，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，高速離心機(jī)，超聲波儀，氮吹儀。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品的前處理

稱取5 g水產(chǎn)品經(jīng)正己烷：乙酸乙酯(1∶1)超聲渦旋振蕩提取，濃縮后經(jīng)PSA-硅膠固相萃取小柱凈化，正己烷：丙酮：乙酸乙酯(8∶1∶1)洗脫，氮吹定容至1.001 mL，待氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析。具體前處理步驟如葉茂盛等報(bào)道[12]。

1.3.2 樣品的分析測(cè)定

前處理好的樣品進(jìn)行氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析，升溫程序及質(zhì)譜條件如葉茂盛等報(bào)道[12]，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式。經(jīng)過(guò)MS1掃描確定分子離子峰，產(chǎn)物離子掃描確定產(chǎn)物離子和碰撞能量，最終獲得MRM掃描的監(jiān)測(cè)離子。

2 結(jié)果與分析

2.1 水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析

在溫州區(qū)域分別采集了牡蠣、泥蚶、青蛤、縊蟶、烏鱧、貽貝、南美白對(duì)蝦、黑鯛、鱸魚、大黃魚、甌江彩鯉等水產(chǎn)品，采用本研究中建立的有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留氣相色譜三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜質(zhì)譜技術(shù)對(duì)樣品中的28種有機(jī)磷殘留進(jìn)行分析。結(jié)果顯示在樣品中有不同程度的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，在所檢測(cè)的水產(chǎn)品中三唑磷的檢出率達(dá)30%，在所檢測(cè)的貝類樣品中三唑磷的檢出率達(dá)50%，地蟲硫磷、毒死蜱也有檢出。水產(chǎn)品貝類中三唑磷檢出率最高，貝類中三唑磷濃度水平在0.222～17.644 μg/kg。烏鱧、鯽魚、南美白對(duì)蝦、黒鯛、鱸魚、大黃魚中三唑磷未檢出。

2.2 居民水產(chǎn)品消費(fèi)三唑磷農(nóng)藥暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)

通過(guò)水產(chǎn)品中有機(jī)磷殘留現(xiàn)狀研究發(fā)現(xiàn)貝類樣品中三唑磷的殘留較為普遍。三唑磷，是一種中等毒性的廣譜性殺蟲劑，在漁業(yè)中被用于清塘和毒殺雜魚，廣泛應(yīng)用于漁業(yè)和農(nóng)業(yè)。我國(guó)在谷物、蔬菜、水果等食品中制定了三唑磷最大殘留限量(MRL)(GB 2763-2016)：三唑磷在在稻谷、麥類、旱糧類等中MRL為0.05 mg/kg ；三唑磷在棉籽等中MRL為0.1 mg/kg；在蔬菜中MRL為0.1 mg/kg；三唑磷在水果中MRL為0.2 mg/kg。沒(méi)有規(guī)定水產(chǎn)品中三唑磷最大殘留限量(MRL)值。

由水產(chǎn)品消費(fèi)量和水產(chǎn)品中有關(guān)化學(xué)品濃度的數(shù)據(jù)進(jìn)行水產(chǎn)品中農(nóng)藥污染物的膳食攝入量估算，對(duì)估算暴露水平與可接受水平進(jìn)行比較。使用公式(l)計(jì)算居民每周水產(chǎn)品消費(fèi)暴露的三唑磷估計(jì)量(Estimated weely intakes,EWI)，其中C為水產(chǎn)品中三唑磷殘留濃度，M為水產(chǎn)品每天的消費(fèi)量，BW為體重量。

EWI=C×M×7/BW 公式 (1)

在2008年浙江省城鄉(xiāng)居民膳食結(jié)構(gòu)調(diào)查報(bào)告中，浙江農(nóng)村人口魚蝦類水產(chǎn)品人均消費(fèi)量為93.43 g/d，城市人口人均消費(fèi)量為121.54 g/d。浙江沿海居民較內(nèi)陸人口攝入水產(chǎn)品多，加乘系數(shù)1.3，本研究以農(nóng)村和城市居民人均水產(chǎn)品消費(fèi)量分別為121.5 g/d和158 g/d計(jì)算，居民體重以60 kg計(jì)。以調(diào)查樣品中的三唑磷最大殘留計(jì)算高攝入水平。由公式(1)計(jì)算可得，城市和農(nóng)村居民每周經(jīng)水產(chǎn)品攝入三唑磷的最高值分別為0.25 μg/kg·bw和0.33 μg/kg·bw。

GB2763-2016《 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中最大農(nóng)藥殘留限量》中三唑磷每日允許攝入量ADI 0.001 mg/kg·bw。按體重60 kg計(jì)算，則每日攝入該化學(xué)物質(zhì)在0.05 mg以內(nèi)是安全的。貝類中三唑磷濃度水平在0.222～17.644 μg/kg.，根據(jù)公式EWI=C×M/BW 計(jì)算可得，每日貝類食用量在225.23～2.833 kg/60kg·bw為安全范圍內(nèi)。

根據(jù)現(xiàn)狀來(lái)看，普通百姓正常情況下各種海產(chǎn)品消費(fèi)量都不及上述評(píng)估出的處于風(fēng)險(xiǎn)臨界值的水產(chǎn)品消費(fèi)量，因此可以得出食用浙江省水產(chǎn)品三唑磷污染風(fēng)險(xiǎn)較低。

3 結(jié)論

利用建立的水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥的固相萃取-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法,對(duì)溫州典型養(yǎng)殖水產(chǎn)品進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析，結(jié)果顯示貝類樣品中三唑磷檢出率較高。居民水產(chǎn)品消費(fèi)三唑磷農(nóng)藥暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)表明水產(chǎn)品三唑磷殘留其膳食風(fēng)險(xiǎn)是較低的。