李 梅

(浦城縣投資開發(fā)公司，福建 浦城 353400)

納他霉素作為天然廣譜抗真菌劑，納他霉素生產(chǎn)菌是一種鏈霉菌，在鏈霉菌中大多存在野生型菌種抗生素產(chǎn)量低和遺傳不穩(wěn)定的現(xiàn)象，因此，納他霉素生產(chǎn)菌種的選育工作成為各個納他霉素生產(chǎn)企業(yè)和科研單位研究的熱點(diǎn)。本文介紹的納他霉素育種主要是誘變育種。

1 納他霉素生產(chǎn)茵的菌種選育

1.1 自然分離

最早的納他霉素生產(chǎn)菌的育種方法是自然分離，但長期使用自然選育挑選的生產(chǎn)菌種生產(chǎn)容易出現(xiàn)不穩(wěn)定，效價跌幅較大，生產(chǎn)周期拉長，生產(chǎn)的產(chǎn)量低，質(zhì)量不穩(wěn)定的特點(diǎn)。

1.2 誘變育種

1.2.1 紫外線誘變

紫外線誘變是納他霉素企業(yè)生產(chǎn)育種最常用手段，在納他霉素生產(chǎn)菌的育種工作中發(fā)揮了重要作用。

1.2.1.1 出發(fā)菌種的制備

把沙土管菌種接到斜面培養(yǎng)中30℃恒溫培養(yǎng)3天，觀察無染菌，菌苔呈灰色，生產(chǎn)的菌落正常再轉(zhuǎn)接2～3次無異常的菌種為誘變育種的出發(fā)菌株。

1.2.1.2 紫外線誘變

將培養(yǎng)好的出發(fā)菌種刮入裝有生理鹽水的平皿中，用功率15 W、波長256 nm的紫外燈距離25 cm處照射2 min，然后進(jìn)行稀釋10-8稀釋自然分離，挑單菌落轉(zhuǎn)入斜面培養(yǎng)。上搖瓶考核，生產(chǎn)性能穩(wěn)定，效價高于出發(fā)菌株10%菌種作為生產(chǎn)菌種進(jìn)沙土管冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 紫外線復(fù)合誘變

經(jīng)紫外線誘變后的菌種再接入含有0.001%化學(xué)誘變劑的生理鹽水的平皿中處理30 min。然后進(jìn)行稀釋10-6稀釋自然分離，挑單菌落轉(zhuǎn)入斜面培養(yǎng)。上搖瓶考核，效價高于紫外線誘變的菌株15%的菌種為生產(chǎn)菌種進(jìn)沙土管冰箱保存?zhèn)溆?。?jīng)過紫外線復(fù)合誘變挑出的菌種要轉(zhuǎn)接3代并在中試車間做綜合性實(shí)驗。

1.3 原生質(zhì)體育種

納他霉素素原生質(zhì)體育種在生產(chǎn)企業(yè)和科研單位中主要采用的是原生質(zhì)體誘變育種和原生質(zhì)體融合育種兩種方法，但由于操作要求較高，平時用的比較少。

1.3.1 原生質(zhì)體誘變育種

原生質(zhì)體誘變育種是以原生質(zhì)體為材料，采用物理誘變劑和化學(xué)誘變劑進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，然后分離到培養(yǎng)基中進(jìn)行再生，挑單菌落進(jìn)行搖瓶考核篩選出生產(chǎn)穩(wěn)定性好的高產(chǎn)菌株。

1.3.2 原生質(zhì)體融合育種

原生質(zhì)體融合育種是通過兩個或兩個以上的遺傳性狀不同的親株原生質(zhì)體融合而進(jìn)行雜交。挑單菌落進(jìn)行搖瓶考核從中篩選出生產(chǎn)穩(wěn)定性好的高產(chǎn)菌株。

1.4 基因工程育種

近年來，有一部份的納他霉素科研單位開始使用基因工程育種。基因工程育種是一種定向選育，能有效的提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量。

2 總結(jié)

目前納他霉素生產(chǎn)菌菌株選育的手段有自然分離、誘變育種、原生質(zhì)體育種和基因工程育種。誘變育種在生產(chǎn)中是最常規(guī)育種手段，不需要了解菌株的遺傳背景，其操作簡單、成本低；但誘變育種也存在正突變率比較低，篩選工作量比較大的缺點(diǎn)，今后生產(chǎn)企業(yè)也應(yīng)進(jìn)行基因工程的定向育種為大生產(chǎn)的高產(chǎn)量和質(zhì)量服務(wù)。