王來(lái)成

新生兒呼吸窘迫綜合征(NRDS)是指患兒出生后4～12 h內(nèi)出現(xiàn)的肺泡進(jìn)行性萎縮，從而出現(xiàn)呼吸困難，呼吸衰竭的癥狀[1]。NRDS的主要病因是缺乏肺泡表面活性物質(zhì)，是新生兒的常見病，具有極高的致死率和致殘率，越來(lái)越受社會(huì)的關(guān)注[2]。炎性因子在急性NRDS中發(fā)揮作用，研究認(rèn)為NRDS的病理改變與炎性因子失衡相關(guān)[3]。正常情況下，體內(nèi)同時(shí)存在促炎因子和抗炎因子，其中促炎因子有腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)，白細(xì)胞介素-6(IL-6)，白細(xì)胞介素-2(IL-2)等，抗炎因子有白細(xì)胞介素-4(IL-4)，白細(xì)胞介素-10(IL-10)等。NRDS時(shí)肺損傷因素導(dǎo)致肺泡中巨噬細(xì)胞激活，釋放大量促炎因子，激活炎癥級(jí)聯(lián)，引起肺泡上皮細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷甚至凋亡，造成進(jìn)一步肺損傷[4]。研究發(fā)現(xiàn)促炎因子越高的NRDS患兒預(yù)后越差，提示促炎因子可能與NRDS相關(guān)[5]。本研究以NRDS患兒為研究對(duì)象，通過(guò)研究NRDS與促炎因子以及抗炎因子的相關(guān)性來(lái)探討NRDS發(fā)病與機(jī)體炎性因子的相關(guān)性，為闡明NRDS發(fā)病機(jī)制，開發(fā)和制訂有效的治療方案提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2013年2月至2015年12月在開封市兒童醫(yī)院就診的NRDS患兒46例?；純壕螻RDS診斷標(biāo)準(zhǔn)：出生后出現(xiàn)進(jìn)行性呼吸困難，青紫和三凹征；符合NRDS肺X線變化分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ級(jí)：雙肺野透亮度降低，見均勻散在的細(xì)小顆粒和網(wǎng)狀陰影；Ⅱ級(jí)：存在Ⅰ級(jí)改變，還存在支氣管充氣征，并延伸至肺野中外帶；Ⅲ級(jí)：存在Ⅱ改變，且肺野透亮度進(jìn)一步降低，心緣，膈緣模糊；Ⅳ級(jí)：肺野呈白肺，支氣管充氣征更加明顯，胸廓擴(kuò)張良好，橫隔位置正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：依從性差的患兒；小于胎齡兒；存在新生兒敗血癥，新生兒硬腫癥的患兒。選擇同時(shí)期同科室的正常新生兒46例為對(duì)照組，對(duì)照組和NRDS組患兒的性別比例，平均胎齡等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)胸片結(jié)果對(duì)NRDS病情進(jìn)行分級(jí)，Ⅰ、Ⅱ級(jí)為輕度組31例，Ⅲ、Ⅳ級(jí)為重度組15例。本研究得到了開封市兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。患兒近親屬對(duì)本次研究知情同意并簽署了知情同意書。

1.2樣本采集納入標(biāo)準(zhǔn)的研究對(duì)象入院后采集靜脈血3 mL，室溫靜置30 min，3 000 r/min，離心4 min，分離血清，置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3檢測(cè)血清炎性因子水平使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清IL-1β，IL-6，TNF-α水平。檢測(cè)步驟大致如下：(1)先取試劑盒中攜帶的標(biāo)準(zhǔn)品，按說(shuō)明書配成不同濃度，做標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)將樣品加入酶標(biāo)板中，每孔100 μL；(3)將酶標(biāo)板放入培養(yǎng)箱，37 ℃孵育90 min；(4)棄去反應(yīng)液；(5)每孔加入含有IL-1β、IL-6、TNF-α的生物素工作液 100 μL，將酶標(biāo)板放入培養(yǎng)箱，37 ℃孵育60 min；(6)棄去反應(yīng)液，用洗滌液清洗3次；(7)每孔加入親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物工作液 100 μL，將酶標(biāo)板放入培養(yǎng)箱，37 ℃孵育30 min；(8)棄去反應(yīng)液，用洗滌液清洗5次；(9)每孔加入顯色液90 μL，37 ℃孵育20 min；(10)每孔加入終止液10 μL；(11)在450 nm處測(cè)定吸光度值，根據(jù)濃度曲線算出樣品濃度。

2 結(jié)果

2.1新生兒血清炎性因子水平結(jié)果顯示NRDS組患兒血清IL-1β和IL-6明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.774、8.373，均P=0.000)，兩組TNF-α比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.527,P=0.130),見表1。

表1 新生兒血清炎性因子水平

2.2新生兒血清炎性因子與呼吸窘迫相關(guān)性分析Pearson分析顯示，IL-1β與NRDS病情呈正相關(guān)(r=0.47，P<0.05)，IL-6與NRDS病情呈正相關(guān)(r=0.42，P<0.05)。

3 討論

肺泡表面活性物質(zhì)缺乏是NRDS發(fā)病的主要因素。肺泡表面活性物質(zhì)由肺泡上皮Ⅱ型細(xì)胞產(chǎn)生和分泌[6]。肺泡上皮Ⅱ型細(xì)胞是肺中非經(jīng)典免疫細(xì)胞，能產(chǎn)生多種炎性因子，參與肺部的炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)肺泡表面活性物質(zhì)也能調(diào)節(jié)肺中炎性因子水平[7]。所以研究認(rèn)為肺泡表面活性物質(zhì)缺乏引起的肺部炎性因子水平異常也是導(dǎo)致NRDS發(fā)病的因素之一[8]。本研究為了驗(yàn)證炎性因子與NRDS的關(guān)系，比較NRDS患兒和正常病人的血清IL-1β，IL-6，TNF-α水平，并把NRDS病情嚴(yán)重程度與炎性因子水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示NRDS組患兒血清IL-1β和IL-6明顯高于對(duì)照組，兩組TNF-α差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，NRDS病情與IL-1β和IL-6呈正相關(guān)。本研究結(jié)果再次驗(yàn)證炎性因子與NRDS發(fā)病和病情嚴(yán)重程度相關(guān)，炎性因子可能通過(guò)激活炎癥反應(yīng)，引起肺損傷，導(dǎo)致NRDS病情進(jìn)一步加重。

綜上所述，NRDS患兒血清IL-1β，IL-6明顯升高，與NRDS病情嚴(yán)重程度關(guān)系密切，聯(lián)合檢測(cè)IL-1β，IL-6對(duì)NRDS病情評(píng)估具有重要意義。