張振宇 李 明

（濟(jì)源市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心，河南濟(jì)源 459000）

0 引言

獸藥廣泛應(yīng)用的于畜牧養(yǎng)殖業(yè)，使用過(guò)程中濫用、誤用及不遵守休藥期規(guī)定，導(dǎo)致產(chǎn)生藥物殘留，這些藥物通過(guò)食物鏈在人體內(nèi)產(chǎn)生耐藥性，還可致基因突變、致畸、致癌。生豬、牛、羊體內(nèi)獸藥殘留監(jiān)控通過(guò)尿液檢測(cè)較為便捷，易操作，但我國(guó)動(dòng)物尿液中獸藥多殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重缺乏，且存在通量低的不足，難以滿足殘留快速檢測(cè)的要求。

檢測(cè)獸藥殘留的方法較多，主要有液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫法等。開(kāi)展了動(dòng)物尿液獸藥多殘留檢測(cè)技術(shù)的研究，相比單一檢測(cè)方法具有更高的效率、更簡(jiǎn)單的前處理過(guò)程。

1 材料與方法

1.1 儀器

UPLC Xevo TQ MS超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（Waters公司）；高速冷凍離心機(jī)（香港力康公司）；TTL-DCII型氮吹儀（北京同泰聯(lián)科技公司）。

1.2 試劑與材料

乙腈、甲醇、甲酸為色譜純；克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、氯丙那林、特布他林、苯乙醇胺A、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、金剛烷胺、金剛乙胺標(biāo)準(zhǔn)品全部購(gòu)自于德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司；同位素內(nèi)標(biāo)為：沙丁胺醇-D3、萊克多巴胺-D3、克侖特羅-D9、氯霉素-D5、甲砜霉素-D3、氟苯尼考-D3、金剛烷胺-D15；Oasis MCX 固相萃取柱（Waters公司，60 mg/3mL）。

1.3 色譜條件

色譜柱：CORTECS UPLC C18（1.6 μm，2.1 mm X 100 mm）；流動(dòng)相A為乙腈；流動(dòng)相B為0.2%甲酸水；流速為0.4 ml/min；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣量為5μl，0～1min，5～10%A；1～3min，10～80%A；3～4min，80%A；4～5min，80～5%A。

1.4 質(zhì)譜條件

電離方式：除酰胺醇類采用電噴霧負(fù)離子模式，其他均為電噴霧正離子模式；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）采集；毛細(xì)管電壓2.7kV離子源溫度為150 ℃；脫溶劑氣溫度為500 ℃；脫溶劑氣流量為1000 L/h。

1.5 樣品處理

測(cè)試取適量尿液于離心管，10000r/min離心10min，量取試樣2ml于10ml離心管，添加混合同位素內(nèi)標(biāo)，加入甲酸100μl，混合均勻；MCX小柱依次用甲醇、水各3ml活化，試樣過(guò)柱，用0.2%甲酸水溶液、甲醇各3ml淋洗，減壓抽干，用5%氨水甲醇溶液3mL洗脫，洗脫液在50℃氮?dú)獯蹈?，殘余物?.0ml初始流動(dòng)相溶解，渦旋混勻，過(guò)膜，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱及流動(dòng)相的選擇

本方法選取了CORTECS UPLC C18 柱、BEH C18柱、HSS T3柱進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn)。本研究選擇了3大類11種獸藥進(jìn)行檢測(cè)，在根據(jù)各色譜柱的特點(diǎn)分別對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)，上述三種化合物在CORTECS UPLC C18的分離優(yōu)于HSS T3 色譜柱、BEH C18色譜柱，本實(shí)驗(yàn)采用該色譜柱進(jìn)行測(cè)定。

2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

為降低基質(zhì)效應(yīng)影響，采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量，采用尿液空白基質(zhì)溶液配制質(zhì)量濃度，為0.5，1，5，10，20，50 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，以標(biāo)樣峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積比值與質(zhì)量濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明：在此質(zhì)量濃度范圍內(nèi)所有組分線性良好，相關(guān)系數(shù)r均在0.991～0.999。以3倍信噪比計(jì)算得到的檢出限在0.1～10μg/kg范圍內(nèi)，可滿足動(dòng)物尿液中相應(yīng)獸藥殘留測(cè)定的要求。

2.2.2 回收率、精密度

根據(jù)實(shí)際檢出能力，制備了1.0，5.0，10.0 μg/kg三個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的陽(yáng)性尿液樣品，每個(gè)水平5 平行實(shí)驗(yàn)，三個(gè)水平樣品的回收率在75.1～106.5%之間，RSD小于12.5%。方法的準(zhǔn)確性和重復(fù)性良好。

3 結(jié)論

本文建立了采用Oasis MCX固相萃取柱凈化超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定動(dòng)物尿液中β-激動(dòng)劑類、酰胺醇類、抗病毒類11種違禁藥物殘留含量的方法，該法與現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相比在保證準(zhǔn)確性好、靈敏度高的同時(shí)，前處理方法更簡(jiǎn)單快速，可用大批量樣品檢測(cè)。