蔡治祥 王曉武 李莉 畢生輝 陳漢威

1廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院（廣州511400）；2中國(guó)人民解放軍南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院心血管外科中心（廣州510010）

肺是機(jī)體溝通外界的主要場(chǎng)所，它容易受外界大氣、微粒粉塵及病原微生物因素的影響，導(dǎo)致肺組織損傷、炎癥以及感染相關(guān)的呼吸性肺?。?］。在抵御外來(lái)物質(zhì)入侵過(guò)程中，NOD 樣受體蛋白3（NOD-like receptor protein 3，NLRP3）炎性小體能夠識(shí)別外源性病原體病原相關(guān)分子模式（pathogen associated molecular pattern，PAMPs）或內(nèi)源性損傷相關(guān)分子模式（damage associated molecular pattern，DAMPs），并經(jīng)模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRR）活化后介導(dǎo)下游通路炎性因子的表達(dá)來(lái)調(diào)控炎癥反應(yīng)［2-4］，是機(jī)體固有免疫應(yīng)答的重要組成部分。近年來(lái)研究［5-6］表明，炎性小體的異?；罨c機(jī)體固有免疫失調(diào)導(dǎo)致的病態(tài)反應(yīng)有關(guān)，它在人類(lèi)許多免疫性疾病中扮演重要角色?；谝陨媳尘埃疚尼槍?duì)NLRP3 炎性小體與肺部疾病的作用進(jìn)行重點(diǎn)綜述。

1 NLRP3 炎性小體的簡(jiǎn)述

NLRP3 炎性小體是目前研究較深入的炎性小體之一，其結(jié)構(gòu)與功能明確。它主要由三部分組成，即NLRP3 蛋白、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD，ASC）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶前體蛋白（procaspase-1）。

1.1 NLRP3 炎性小體的結(jié)構(gòu)NLRP3 蛋白結(jié)構(gòu)主要由中間段特征性核苷酸寡聚化區(qū)域（nucleotide-binding and oligomerizationdomain，NACTH）、亮氨酸重復(fù)序列（leucine-richrepeats，LRRs）的C 端和具有可變的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的N 端組成［2-3］。其中可變效應(yīng)結(jié)構(gòu)域包括熱蛋白結(jié)構(gòu)域（pyrin domain，PYD）和胱天蛋白酶募集區(qū)域（caspase recruitment domain，CARD）［2-3］。ASC 位于NLRP3 炎性小體復(fù)合物核心區(qū)域，通過(guò)ASC 氨基端的CARD 招募procaspase-1 并加工形成caspase-1，活化后的caspase-1 通過(guò)一系列反應(yīng)將促炎性因子的前體加工成為成熟、有致炎作用的炎性因子IL-1β 和IL-18，并釋放至細(xì)胞外，最終引起炎性反應(yīng)［7］。

1.2 NLRP3 炎性小體的活化通常認(rèn)為NLRP3炎性小體是被經(jīng)典的雙信號(hào)模式被激活。該激活過(guò)程主要分為兩個(gè)階段：第一個(gè)階段，Toll 樣受體4（Toll-like receptor-4，TLR4）信號(hào)通路介導(dǎo)的核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-Kappa-B，NF-κB）依賴的NLRP3 前體、pro-IL-1β 和pro-IL-18 等相關(guān)前體轉(zhuǎn)錄；第二階段，介導(dǎo)NLRP3 炎性小體的組裝和修飾階段。其中第二階段可通過(guò)DAMPs 和PAMPs 模式作用于胞質(zhì)內(nèi)的Nod 樣受體（NOD-like receptor，NLR）作為第二信號(hào)，最終介導(dǎo)NLRP3 炎性小體各組分（NLRP3，ASC，caspase-1 前體）的組裝及活化，完成IL-1β、IL-18等促炎因子的加工及分泌［5，8-9］。至今，尚無(wú)證據(jù)表明NLRP3 是直接被激活的，故推測(cè)NLRP3可識(shí)別多種物質(zhì)并通過(guò)共同的上游信號(hào)通路使其活化，但具體機(jī)制仍不清楚。

目前，NLRP3 炎性小體經(jīng)典的活化途徑主要有3 種。（1）鉀離子外流。 RIVERS-AUTY 等［10］認(rèn)為，K+外流是NLRP3 炎性小體激活的共同通路。胞外的ATP與細(xì)胞表面的P2X2嘌呤受體結(jié)合致K+通道開(kāi)放［11］，致K+外流招募泛連接蛋白pannexin-1，介導(dǎo)相關(guān)跨膜通道開(kāi)放，隨后胞外物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)激活NLRP3 炎性小體［12］。（2）溶酶體破壞［13］。晶體或微粒物質(zhì)通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，吞噬后溶酶體膜的穩(wěn)定性降低，引起溶酶體蛋白水解酶-B（cathepsin-B）釋放并進(jìn)入胞漿，繼而激活NLRP3炎性小體。（3）線粒體活性氧類(lèi)（reactive oxygen species，ROS）。損傷型線粒體活性氧（mtROS）誘導(dǎo)產(chǎn)生的心磷脂、損傷型線粒體DNA 等線粒體相關(guān)危險(xiǎn)信號(hào)（mitochondrial DAMPs）能夠激活NLRP3。研究表明，NLRP3 炎性小體激活劑均能導(dǎo)致ROS 的產(chǎn)生，mtROS 是激活NLRP3 炎性小體的關(guān)鍵信號(hào)［14］。若細(xì)胞液中加入ROS 抑制劑乙酰半胱氨酸后，胞內(nèi)的caspase-1 活化水平顯著降低，生成的炎性因子IL-1β 亦明顯減少［15］。線粒體源的硫氧化還原蛋白（thioredoxin-in-teracting protein）可活化心血管內(nèi)皮細(xì)胞源的NLRP3 炎性小體，活化后的炎性小體復(fù)合物通過(guò)自身的催化裂解使procaspase-1 加工成有活性的caspase-1，最終催化pro-IL-1β、pro-IL-18 為有促炎活性的白細(xì)胞介素IL-1β、IL-18［16］。其中IL-1β 能夠介導(dǎo)一氧化氮合成酶（NOS）等炎性介質(zhì)的合成和釋放，IL-18 介導(dǎo)T 細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞分泌干擾素-Y［17-18］。

細(xì)胞炎性死亡在是機(jī)體固有免疫反應(yīng)中的一種防御性機(jī)制，保護(hù)機(jī)體不被細(xì)菌、病毒等病原體感染，但過(guò)度活化、分泌的炎性信號(hào)會(huì)導(dǎo)致組織損傷及多種疾病的發(fā)生發(fā)展。若caspase-1 過(guò)度活化，激活下游信號(hào)并過(guò)度分泌炎性細(xì)胞因子，可導(dǎo)致細(xì)胞炎癥性死亡，細(xì)胞死亡將釋放高濃度的炎性細(xì)胞因子，引起細(xì)胞因子風(fēng)暴，繼而加重炎性反應(yīng)［19-20］。

2 炎性小體和肺部疾病

在機(jī)體抵御病原體、微粒等外來(lái)有害刺激時(shí)，NLRP3炎性小體活化caspase-1導(dǎo)致細(xì)胞因子IL-1β和IL-18 的成熟和釋放，在炎性相關(guān)的特異性和非特異性免疫中，特別是炎癥相關(guān)的肺部疾病中扮演著重要角色［5-6，21-22］。NLRP3 炎性小體復(fù)合物具有多重作用，BRUCHARD 等［23］發(fā)現(xiàn)NLRP3 炎性小體還可能還存在一些其他的作用，如在T 細(xì)胞分化過(guò)程中作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。MIZUSHINA 等［24］也發(fā)現(xiàn)在部分肺部疾病中NLRP3 炎性小體并不是IL-1β 唯一的調(diào)控者。NLRP3 炎性小體主要表達(dá)于中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞中，并誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)［25］。研究發(fā)現(xiàn)在肺組織細(xì)胞中NLRP3 炎性小體的過(guò)度激活導(dǎo)致的異常炎癥反應(yīng)與多種肺部疾病有關(guān)，如肺動(dòng)脈高壓、慢性阻塞性肺病、肺間質(zhì)纖維化、肺泡纖維化和哮喘等炎癥相關(guān)肺部疾病。NLRP3 炎性小體在該類(lèi)疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，但具體機(jī)制尚未完全清楚。

2.1 NLRP3 炎性小體和肺部感染呼吸道感染是臨床較常見(jiàn)的疾病，同NLRP3 炎性小體參與固有免疫反應(yīng)一樣，NLRP3/ASC/Caspase-1 軸與肺部感染亦關(guān)系密切［21］。研究［26］發(fā)現(xiàn)，鮑曼不動(dòng)桿菌可活化NLRP3 炎性小體并作用于免疫細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β，繼而導(dǎo)致小鼠肺部炎癥反應(yīng)。甲型流病毒是一種常見(jiàn)的呼吸道RNA 病毒，它能夠感染機(jī)體并通過(guò)單鏈病毒RNA 與TLR7 受體結(jié)合，介導(dǎo)胞質(zhì)內(nèi)NLRP3 炎性小體各組分表達(dá)。此外，甲型流病毒的M2 蛋白能夠觸發(fā)K+離子外流，并介導(dǎo)了NLRP3炎性小體復(fù)合物的組裝［27］。與正常小鼠比，Nlrp3、caspase-1 和Asc 基因敲除大鼠表現(xiàn)為更低炎癥反應(yīng)和高度的易感性。故推測(cè)NLRP3 炎性小體在IAV 感染的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中作為保護(hù)性因子［28-29］。肺炎鏈球菌毒素（pneumolysin virulence factor）為一種新型炎性小體活化劑，在肺炎鏈球菌致病的呼吸道感染疾病中NLRP3 有重要的保護(hù)作用［30］。結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）ESAT-6毒素可活化NLRP3 炎性小體，繼而分泌大量促炎性因子IL-1β。研究發(fā)現(xiàn)，小鼠的對(duì)照組和NLRP3基因敲除組對(duì)MTB 具有相似的抵抗性，而Asc 基因敲除小鼠則較易被MTB 感染，推測(cè)當(dāng)敲除NLRP3 基因后，其調(diào)控的代償機(jī)制增加了IL-1β 的表達(dá)水平［31-32］。而奈瑟菌感染巨噬細(xì)胞，其通過(guò)ATP誘導(dǎo)IL-1β 分泌，而不是通過(guò)NLRP3/ASC/Caspase-1 軸介導(dǎo)IL-1β 分泌［33］。衣原體肺炎疾病中，NLRP3 炎性小體的活化并非損傷性mtROS 介導(dǎo)，而是與線粒體膜電位消失、功能失調(diào)有關(guān)［34］。綜上，NLRP3 炎性小體在肺部感染性疾病中參與并發(fā)揮多種作用。

2.2 NLRP3炎性小體和肺纖維化在博來(lái)霉毒誘導(dǎo)肺纖維化小鼠模型中，Nlrp3基因敲除組IL-1β 水平低表達(dá)及肺組織聚集中性粒細(xì)胞減少，在caspase-1 和Asc 基因敲除組和caspase-1 抑制劑處理組中，博來(lái)霉毒所致的中性粒細(xì)胞侵潤(rùn)也是減弱的，肺組織損傷和炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度與支氣管肺泡灌洗液（brachalveolar lavage fluid，BAL）中細(xì)胞外ATP（eATP）和尿酸的水平呈正相關(guān)，特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化患者的支氣管肺泡灌洗液中eATP 也處于較高水平［35-36］。研究［35］表明，使用他汀類(lèi)藥物是發(fā)生間質(zhì)性肺病的一個(gè)潛在危險(xiǎn)因素，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)他汀類(lèi)藥物可使博來(lái)霉毒誘導(dǎo)caspase-1 過(guò)度活化，繼而加劇肺損傷。故NLRP3 在肺纖維化的病理過(guò)程中扮演重要角色，為肺纖維化提供了一個(gè)有治療意義的新靶點(diǎn)。

2.3 NLRP3 炎性小體和肺動(dòng)脈高壓VILLEGAS等［37］研究表明，低氧誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓與NLRP3 炎性小體、caspase-1 的活化、IL-1β 的表達(dá)水平上調(diào)關(guān)系密切。CERO 等［38］證實(shí)Asc 基因敲除小鼠對(duì)低氧誘導(dǎo)肺高壓具有一定抵抗性，原因可能與減少右心收縮壓和肺血管的重塑有關(guān)，而NLRP3 基因敲除小鼠與對(duì)照組無(wú)明顯差異，提示ASC 可能涉及多種炎性小體復(fù)合物。鞣花酸可通過(guò)抑制NLRP3 炎性小體的活化，對(duì)野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈高壓疾病中具有一定的治療作用［39］。研究通過(guò)量化分析炎性細(xì)胞因子的表達(dá)水平，繼而評(píng)估特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者的生存率［40］。炎性小體可能成為針對(duì)肺動(dòng)脈高壓治療新的靶點(diǎn)［41］。

2.4 NLRP3 炎性小體和急性肺損傷（acute lung injury，ALI）ALI 和急性呼吸窘迫征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是臨床較常見(jiàn)急性呼吸衰竭疾病。王虎等［42］和顧娜等［43］發(fā)現(xiàn)海水吸入性肺損傷組及PM2.5 致肺損傷組大鼠肺組織內(nèi)NLRP3、IL-18、IL-1β 及caspase-1 的表達(dá)水平不同程度上調(diào)。與野生和IL-1β 基因敲除小鼠相比，高氧環(huán)境下NLRP3 基因敲除小鼠具有較高死亡率，NLRP3 基因敲除小鼠炎性細(xì)胞和炎性因子低表達(dá)，炎癥反應(yīng)較輕，而肺組織IL-1β 的表達(dá)量與野生小鼠差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［24］。DOLINAY 等［44］通過(guò)機(jī)械通氣誘導(dǎo)肺損傷小鼠模型，并分析炎性小體在ALI 中的作用，結(jié)果表明機(jī)械通氣對(duì)IL-1α、caspase-1 活化結(jié)構(gòu)域-10、IL-1 受體-1 和受體-2（IL-1 r1、IL-1 r2）等炎性小體通路相關(guān)的因子的調(diào)節(jié)具有重要作用，機(jī)械通氣與炎性小體適配銜接蛋白的表達(dá)量呈正相關(guān)，機(jī)械通氣對(duì)IL-18 或caspase-1 基因敲除小鼠肺損傷和炎癥反應(yīng)相對(duì)較輕，推測(cè)原因是該組肺泡毛細(xì)血管膜通透性相對(duì)穩(wěn)定和肺水腫相對(duì)較輕，故提示炎性小體及其調(diào)控的促炎因子在ALI 中具有促進(jìn)作用。研究發(fā)現(xiàn)，不僅褪黑素可通過(guò)抑制NLRP3 炎性小體的表達(dá)［45］，中藥成分蒼術(shù)苷也可通過(guò)抑制NLRP3 炎癥小體活化，繼而減輕脂多糖誘導(dǎo)的ALI［46］，提示中藥成分研究可作用NLRP3/ASC/Caspase-1 軸，為ALI 的治療提供新思路。

2.5 NLRP3 炎性小體和慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）吸煙為COPD 發(fā)病的首要危險(xiǎn)因素［47-48］。SUFFWAN 等［48］發(fā)現(xiàn)暴露在吸煙環(huán)境下，Nlrp3 基因敲除組小鼠BAL 中caspase-1 活化、IL-18/IL-1β 表達(dá)水平和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)較野生型正常小鼠均降低。近年來(lái)研究表明，NLRP3 炎性小體與COPD關(guān)系越來(lái)越密切。FANER 等［49］發(fā)現(xiàn)在急性加重期組和穩(wěn)定期組COPD 患者肺組織NLRP3 mRNA水平均顯著高于對(duì)照組。孫世民等［50］研究發(fā)現(xiàn)，與COPD 穩(wěn)定期相比，急性加重期患者血清IL-1β水平顯著升高。DIMA 等［51］發(fā)現(xiàn)慢阻肺患者痰液和血清中IL-18、IL-1β 均不同程度的增高。以上研究表明，NLRP3 炎癥小體對(duì)COPD 的診斷和治療具有重要指導(dǎo)意義。

2.6 NLRP3 炎性小體和哮喘與COPD 一樣，哮喘的急性發(fā)作與炎性小體的活化、氣道炎癥反應(yīng)關(guān)系密切。研究［52］表明，在哮喘患者血清、誘導(dǎo)痰及支氣管肺泡灌洗液中IL-1β 水平較正常明顯升高。Th2 型反應(yīng)是過(guò)敏性炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵，NLRP3是Th2 型反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子，其活化可促進(jìn)Th2程序的轉(zhuǎn)錄。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，Nlrp3、caspase-1 和Asc 基因敲除小鼠中Th2 細(xì)胞因子水平降低［53］。KIM 等［54］發(fā)現(xiàn)抑制mtROS 水平，NLRP3 炎癥小體的活化和IL-1β 表達(dá)水平均降低，繼而可以減輕過(guò)敏性氣道炎癥反應(yīng)。在衣原體和嗜血桿菌感染的激素抵抗型哮喘小鼠模型中，能夠通過(guò)P2X7 受體促使NLRP3 炎性小體的活化，故推測(cè)NLRP3 炎性小體有可能成為激素抵抗型哮喘治療的新靶點(diǎn)［55］。

3 小結(jié)和展望

NLRP3 炎性小體通過(guò)調(diào)控炎癥反應(yīng)，在肺纖維化和肺動(dòng)脈高壓中具有保護(hù)性作用，而在ALI/ARDS、COPD 和哮喘中會(huì)加重肺組織損傷和重構(gòu)。NLRP3 炎性小體在肺部疾病中的具體作用尚未清楚，NLRP3 炎性小體與肺部疾病的相關(guān)性研究仍充滿著挑戰(zhàn)，進(jìn)一步研究二者的相關(guān)性可能為疾病的治療提供新靶點(diǎn)和新方向。