（昆明法醫(yī)院司法鑒定中心，云南 昆明 650034）

1 案 例

1.1 簡要案情

因落戶需要，某男委托本中心對其與孩子是否有親緣關(guān)系進(jìn)行鑒定，用FTA卡采集孩子、某男（疑父，以下簡稱“被檢父”）、母親（生母）的末梢血各1份，同時采集孩子帶有毛囊的毛發(fā)、口腔拭子各1份。

1.2 DNA分型檢驗

上述5份檢材用Chelex-100法提取DNA[1]，使用PowerPlex?21試劑盒（美國Promega公司）對Amelo?genin基因座和20個常染色體基因座（D3S1358、D1S1656、D6S1043、D13S317、PentaE、D16S539、D18S51、D2S1338、CSF1PO、PentaD、TH01、vWA、D21S11、D7S820、D5S818、TPOX、D8S1179、D12S391、D19S433、FGA）進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增。

孩子的口腔拭子、血痕與被檢父血痕使用YfilerTMPlus PCR擴(kuò)增試劑盒（美國Thermo Fisher Scientific公司）對25個Y-STR基因座（DYS576、DYS389Ⅰ、DYS635、DYS389Ⅱ、DYS627、DYS460、DYS458、DYS19、Y GATA H4、DYS448、DYS391、DYS456、DYS390、DYS438、DYS392、DYS518、DYS570、DYS437、DYS385、DYS449、DYS393、DYS439、DYS481、DYF387S1、DYS533）進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增。

所有擴(kuò)增產(chǎn)物在3130基因分析儀（美國AB公司）上進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用GeneMapperID-Xv1.5軟件處理電泳數(shù)據(jù)。

1.3 檢驗結(jié)果

采用PowerPlex?21試劑盒檢測得到的STR分型結(jié)果見表1、圖1。孩子的口腔拭子、血痕與被檢父血痕采用YfilerTMPlus PCR擴(kuò)增試劑盒檢測得到的YSTR分型結(jié)果見表2。

表1 母親、被檢父的血痕以及孩子的毛發(fā)、口腔拭子、血痕的Amelogenin和常染色體基因座分型結(jié)果

續(xù)表1

圖1 孩子的血痕、口腔拭子和毛發(fā)的常染色體STR分型結(jié)果

表2 孩子的口腔拭子、血痕與被檢父血痕的Y-STR分型結(jié)果

鑒定意見：根據(jù)本中心對20個常染色體STR基因座和25個Y-STR基因座遺傳多態(tài)性的分析，支持被檢父、母親是孩子的生物學(xué)父母親。

2 討 論

本案排除近期輸血史、異基因骨髓移植、雙胞胎兄弟姐妹以及樣品受到其他污染的情況，在20個常染色體STR檢測數(shù)據(jù)中，發(fā)現(xiàn)孩子帶有毛囊的毛發(fā)的常染色體STR基因分型均正常，未出現(xiàn)嵌合基因現(xiàn)象，孩子的口腔拭子及血痕的基因分型均出現(xiàn)嵌合基因。孩子的血痕、口腔拭子在D6S1043、D13S317、Penta E、Penta D、D12S391、D19S4336個基因座上出現(xiàn)三等位基因，在D18S51、D21S11、TPOX、FGA4個基因座上出現(xiàn)四等位基因，在D3S1358、D6S1043、D13S317、PentaE、D16S539、D2S1338、CSF1PO、Penta D、TH01、vWA、D7S820、D5S818、D12S391、D19S433、Amelogenin15個基因座上的等位基因峰高不均衡（圖1），可能是等位基因的疊加所致。分析上述嵌合體的基因分型，孩子的等位基因均可從其父母的等位基因中找到來源。Y-STR基因分型結(jié)果顯示，被檢父血痕與孩子的口腔拭子、血痕的單倍體基因分型一致，不排除被檢父與孩子來自同一父系家族成員。

人類嵌合體較為少見[2]，嵌合體分為獲得性嵌合體和先天性基因嵌合體。獲得性嵌合體是由于骨髓移植、胎肝移植、異體外周血造血干細(xì)胞移植、宮內(nèi)輸血等造成；先天性基因嵌合體由遺傳獲得，是在胚胎時期就形成的，又分為雙倍體、三倍體及四配子體嵌合體[3]。嵌合體在生物學(xué)上可以分為兩種：同源嵌合體和異源嵌合體。嵌合體成分來源于同一受精卵的嵌合體稱為同源嵌合體（在常染色體STR基因座中，所有基因座都顯示1個父源等位基因和1個母源等位基因），自發(fā)或者誘發(fā)導(dǎo)致的基因突變以及染色體畸變均可導(dǎo)致同源嵌合體的產(chǎn)生[4]。由2個不同的受精卵融合而形成的個體為異源嵌合體，異源嵌合體可分為人造異源嵌合體、孿生子異源嵌合體和四配子異源嵌合體[5]。人造異源嵌合體大部分為醫(yī)源性。孿生子異源嵌合體是由雙生子之間血管交叉吻合，造血細(xì)胞通過吻合的血管交換而產(chǎn)生。四配子異源嵌合體形成的機(jī)制[6]：（1）兩個胚胎的融合；（2）卵細(xì)胞和第一極體雙受精作用；（3）次級卵母細(xì)胞和第一極體雙受精作用；（4）卵細(xì)胞和第二極體雙受精作用。其中，兩個胚胎的融合是由2個卵細(xì)胞和2個精子獨立受精后形成的兩個受精卵（或胚泡）相互融合，擁有兩套遺傳基因，在常染色體STR檢測中顯示含有2個母源等位基因和2個父源等位基因[4，7-9]。本案中，孩子的血痕、口腔拭子在D18S51、D21S11、TPOX、FGA4個基因座上出現(xiàn)四等位基因的現(xiàn)象，其等位基因均可從被檢父、母親的基因中找到來源，推測本案男孩出現(xiàn)四等位基因可能是四配子異源嵌合體并由兩個胚胎融合而成。從上述檢驗結(jié)果可見，本案中男孩在血痕和口腔拭子的STR基因分型都表現(xiàn)出嵌合現(xiàn)象，但毛發(fā)中未檢出嵌合現(xiàn)象，可推測孩子為組織部分性嵌合體[10]。

在親子鑒定過程中，很少出現(xiàn)多個基因座同時出現(xiàn)2個以上等位基因的現(xiàn)象，消除外部環(huán)境對檢驗結(jié)果的影響，在檢測中若出現(xiàn)嵌合基因，可以采集多種類型（毛發(fā)、口腔拭子等）的樣本進(jìn)行綜合分析，對嵌合的基因應(yīng)重復(fù)檢驗、使用不同的試劑盒以及YSTR、X-STR試劑盒等進(jìn)行進(jìn)一步分析，并對出現(xiàn)的嵌合現(xiàn)象進(jìn)行分析解釋。在條件允許的情況下應(yīng)對出現(xiàn)嵌合的基因進(jìn)行測序分析或?qū)η逗匣驑颖镜膫€體進(jìn)行核型分析，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性、科學(xué)性。