趙建，羅銀洲，王玉仲，肖成，石河，胡孫林，康曉東，徐曲毅，成建定，劉超

（1.中山大學中山醫(yī)學院法醫(yī)學系，廣東 廣州 510080；2.廣州市刑事科學技術(shù)研究所 法醫(yī)病理學公安部重點實驗室，廣東 廣州 510030；3.十堰市公安局，湖北 十堰 442000；4.廣東江門中醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學院，廣東 江門 529000；5.南方醫(yī)科大學法醫(yī)學院，廣東 廣州 510515）

硅藻檢驗是溺死診斷最常用的實驗室檢查方法[1-5]。一般認為，在肺、肝、腎、牙齒和骨髓等器官中檢出硅藻，是診斷溺死的基本原則[6]。溺死和死后入水時，硅藻均可以隨溺液從呼吸道進入尸體肺組織[7]。由于進入方式不同（主動吸入或被動進入），導(dǎo)致溺死和死后入水的尸體肺組織硅藻含量存在差異，溺死者肺組織硅藻含量較高，死后入水者肺組織硅藻含量較低或者不含硅藻[1，8-13]。然而，過去關(guān)于肺組織硅藻含量的描述多為直觀感受，無明確的分析參數(shù)和量化標準[6]。本研究采用較傳統(tǒng)硅藻檢驗方法更靈敏的微波消解-真空抽濾-掃描電鏡聯(lián)用法[14]，分析溺死及死后入水者肺組織和溺液的硅藻含量，探討肺組織硅藻檢驗在溺死診斷中的應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物及分組

18只新西蘭大白兔（廣東省動物實驗中心提供），雌雄不限，體質(zhì)量1.0～3.0kg，隨機分為溺死組10只，死后入水組6只，陸地死亡組2只。實驗地點為廣州市南沙區(qū)虎門大橋。本實驗設(shè)計符合實驗動物福利倫理要求。

26只五指山豬（廣東省實驗動物監(jiān)測中心），雌雄不限，體質(zhì)量13.3～15.1kg，隨機分組，如表1。

表1 實驗豬分組

1.1.2 試劑

硝酸（65%～68%）、過氧化氫（30%）和無水乙醇均為分析純，購自廣州化學試劑廠。

1.1.3 儀器

Multiwave3000微波消解儀（奧地利Anton Parr公司），HL-6多聯(lián)真空抽濾儀（珠海黑馬醫(yī)學儀器有限公司），F(xiàn)EI QUANTATM600型掃描電鏡（荷蘭FEI公司），Genesis7000型能譜儀（美國EDAX公司）。

1.2 方法

根據(jù)實驗分組，模擬溺死、死后入水和陸地死亡[15]。溺死組：實驗動物沉入水下0.5m處1min，提出水面30s后重新沉入相同水深處，重復(fù)數(shù)次直至實驗動物溺死，死后在水中浸泡30 min。死后入水組：實驗動物注射過量麻醉劑處死，沉入水下0.5m處浸泡30min。陸地死亡組：實驗動物注射過量麻醉劑處死。

提取實驗兔的全肺組織，提取實驗豬肺左尖葉、左心葉、左膈葉、左副葉、右尖葉、右心葉、右膈葉的邊緣及中段組織各2 g，提取各水體類型的溺液樣本500mL。

提取前所有試劑、工具、器皿均用超純水沖洗，確認不含硅藻。

采用微波消解-真空抽濾-掃描電鏡聯(lián)用法[14]，分析肺組織和溺液的硅藻含量（個/g）。

計算肺組織與溺液硅藻含量的比值（ratio of content of diatoms in lung tissue and drowning fluid，CL/CD）[7]：

CL/CD=肺組織硅藻含量/溺液硅藻含量。

1.3 統(tǒng)計學處理

實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學分析。對溺死與死后入水組實驗兔肺組織的CL/CD值進行t檢驗，對溺死與死后入水組實驗豬各肺葉組織的CL/CD值、不同水體類型中溺死與死后入水實驗豬的CL/CD值進行秩和檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結(jié) 果

陸地死亡的實驗兔及實驗豬的肺組織中均未檢出硅藻。

溺死組實驗兔肺組織CL/CD最小值為1.02，最大值為13.69；死后入水組實驗兔肺組織CL/CD最小值為0.22，最大值為1.17。由表2可知，溺死組與死后入水組實驗兔肺組織CL/CD值的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），溺死組肺組織CL/CD值大于死后入水組。

表2 溺死與死后入水組實驗兔肺組織的CL/CD值

溺死組實驗豬各肺葉組織CL/CD最小值為0.02，最大值為418.76；死后入水組實驗豬各肺葉組織CL/CD最小值為0，最大值為1.59。由表3可知，溺死組與死后入水組實驗豬各肺葉組織CL/CD值的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），溺死組各肺葉邊緣及中段組織的CL/CD值均大于死后入水組。如表4所示，不同水體類型中，溺死組與死后入水組實驗豬之間肺組織CL/CD值的差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），溺死組CL/CD值大于死后入水組。

表3 溺死與死后入水組實驗豬各肺葉組織的CL/CD值（n=12±s）

表3 溺死與死后入水組實驗豬各肺葉組織的CL/CD值（n=12±s）

注：1）與溺死組比較，P＜0.05。

images/BZ_69_206_460_1194_514.png26.19±32.380.29±0 38.31±60.670.23±0 35.78±46.500.20±0 24.29±33.570.14±0 13.26±11.050.30±0 25.75±27.410.09±0 26.20±37.690.30±0 57.42±100.850.19±0 25.54±23.230.31±0 42.42±63.530.09±0 32.13±35.600.25±0 54.82±119.100.21±0 10.00±8.350.26±0 20.17±15.360.33±0左尖葉邊緣左尖葉中段左心葉邊緣左心葉中段左膈葉邊緣左膈葉中段左副葉邊緣左副葉中段右尖葉邊緣右尖葉中段右心葉邊緣右心葉中段右膈葉邊緣右膈葉中段.351）.421）.351）.171）.501）.121）.491）.281）.461）.111）.501）.301）.441）.471）

表4 不同水體類型中溺死與死后入水實驗豬的CL/CD值（±s）

表4 不同水體類型中溺死與死后入水實驗豬的CL/CD值（±s）

注：1）與溺死組比較，P＜0.05。

死后入水組77.31±90.380.54±0 26.39±32.000.10±0 9.65±8.910.10±0 14.16±10.230.14±0.611）.131）.101）.161）水體類型海水咸淡水交界河道淡水湖泊淡水n3 2 2 5溺死組

3 討 論

溺死是法醫(yī)學實踐中最難判斷的死因之一[16-17]。法醫(yī)學者們研發(fā)了許多用于診斷溺死的標志物[18-23]，其中硅藻檢驗被認為是最可靠、最有效的方法[16]。肺、肝、腎、脾、腦、骨髓、血液、胃內(nèi)容物等均可以用于硅藻檢驗。肺組織和至少一個遠端器官組織檢出硅藻是診斷溺死的基本要求[6，24]。為了排除死后入水進入肺組織的硅藻和外源性硅藻污染，認為10g肺組織中的硅藻多于20個是診斷溺死的依據(jù)之一[2，24]。但是，隨著硅藻檢驗方法靈敏度的提高，ZHAO等[7]發(fā)現(xiàn)死后入水者肺組織中硅藻含量比傳統(tǒng)認為的要高，最高接近2000個/10g肺組織。因此，傳統(tǒng)的20個/10g肺組織并不適用于靈敏度高的硅藻新方法檢驗結(jié)果的分析。由于肺組織硅藻含量受溺液影響很大，為了排除溺液的影響，本研究引入了CL/CD值來分析比較溺死與死后入水者肺組織的硅藻含量。CL/CD值體現(xiàn)了肺組織對溺液中硅藻的“凈富集”情況。

如表2～3所示，溺死兔、溺死豬肺組織的CL/CD值均高于死后入水組，說明溺死組肺組織對溺液中硅藻的“富集”更為明顯。這是由于溺水時，主動呼吸吸入大量的溺液，部分溺液通過肺泡進入血液，導(dǎo)致硅藻在肺組織內(nèi)富集。溺死豬7個肺葉邊緣及中部的CL/CD值均大于死后入水組，說明溺水時實驗豬全肺均擴張吸入了大量溺液，是在溺液中缺氧導(dǎo)致呼吸運動加劇的表現(xiàn)。而死后入水者，溺液在水壓的作用下進入肺組織，無主動呼吸和溺液滲透作用，那么肺組織的硅藻含量應(yīng)該少于溺液中的硅藻含量或者與溺液中的硅藻含量相當，CL/CD值分布應(yīng)在0～1，考慮到溺液中硅藻含量的變化，部分可能大于1。死后入水兔肺組織的CL/CD最大值為1.17，死后入水豬肺組織的CL/CD最大值為1.59。死后入水豬肺組織的CL/CD最小值為0，這是由于死后入水時，硅藻難以到達肺邊緣，肺組織中的硅藻主要來源于在水的壓力作用下被動進入的呼吸道內(nèi)的溺液。當CL/CD值在1～1.6時，溺死組與死后入水組存在部分重疊，而在CL/CD＞1.6時，所有的均為溺死組實驗兔或?qū)嶒炟i。動物實驗結(jié)果表明，當肺組織硅藻富集明顯（CL/CD＞1.6）時，是診斷溺死的可靠指標。對CL/CD值在1～1.6的案例進行溺死診斷時，應(yīng)與多器官的硅藻檢驗結(jié)果相結(jié)合進行分析。

無論是在海水、咸淡水交界還是淡水，溺死組CL/CD值均大于死后入水組，CL/CD值可以用于區(qū)別溺死與死后入水，CL/CD值具有穩(wěn)定的特點，不受溺液類型的影響。

溺死與死后入水的區(qū)別在于入水后是否有主動呼吸，肺組織硅藻的富集是主動呼吸作用的重要體現(xiàn)。因此，進行硅藻檢驗時，在多器官檢出硅藻的同時引入肺組織CL/CD值這一參數(shù)進行分析，能更準確地作出溺死的診斷。

需要注意的是，肺組織的富集作用在溺液中硅藻含量高時才能較好地體現(xiàn)，溺液中硅藻含量低時，富集作用不明顯[7]。在進行溺死診斷時，仍然應(yīng)該與尸體檢驗、案情調(diào)查、毒（藥）物檢驗等結(jié)合綜合分析。