羅劍 王媛媛 李愛玲 馮華君 許勝恩 趙沖 覃綱

1西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科（四川瀘州646000）；2西南醫(yī)科大學循證醫(yī)學中心（四川瀘州646000）

盡管癌癥領(lǐng)域研究不斷取得進步，但其臨床結(jié)果仍然很差，主要原因之一是缺乏有效的生物標志物來對癌癥做出早期診斷和預(yù)后評價，故尋找具有潛力的癌癥患者診斷和預(yù)后的生物標志物顯得尤為必要。長鏈非編碼RNA（long non?coding RNA，lncRNA）是長度＞200個核苷酸的一類轉(zhuǎn)錄物，具有有限的蛋白編碼能力［1］。越來越多的研究表明lncRNA參與了很多腫瘤發(fā)生的生物過程，包括增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡［2］。位于第10q26染色體上的lncRNA癌易感性候選基因2（cancer susceptibili?ty candidate 2，CASC2）最初在子宮內(nèi)膜癌中被發(fā)現(xiàn)［3］。ZHAO 等［4］發(fā)現(xiàn)低表達的 CASC2可通過調(diào)節(jié)miR?362?5p/NF?κB軸從而促進肝癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移；XIONG等［5］發(fā)現(xiàn)在甲狀腺癌中CASC2的低表達與更高的TNM分期呈顯著的相關(guān)性；ZHOU等［6］也發(fā)現(xiàn)在胃癌中CASC2的低表達與遠處轉(zhuǎn)移、更高的TNM分期和血管侵襲呈顯著的相關(guān)性，提示CASC2低表達可能會影響癌癥患者的生存情況。故本研究對已檢索到的全部相關(guān)文獻進行系統(tǒng)評價，以探究CASC2的表達情況與惡性腫瘤患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標準

1.1.1 研究類型探究癌癥患者CASC2異常表達與其預(yù)后相關(guān)性的病例?對照研究。

1.1.2 研究對象均經(jīng)過組織病理學確診的腫瘤患者，且所有病例均具有詳細的臨床病理資料。

1.1.3 暴露因素CASC2的低表達為暴露因素，結(jié)果判讀根據(jù)原始文獻臨界值區(qū)分。采用qRT?PCR法檢測CASC2的表達情況。

1.1.4 結(jié)局指標（1）臨床特征：主要包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、TNM分期；（2）總生存期。

1.1.5 排除標準（1）重復發(fā)表的文獻；（2）研究與癌癥或CASC2無關(guān)；（3）動物研究；（4）缺乏列入納入研究標準的數(shù)據(jù)；（5）評論或摘要。

1.2 文獻檢索策略計算機檢索PubMed、Web of Science、Embase、Cochrane Library、OVID、中國知網(wǎng)、萬方和維普等數(shù)據(jù)庫，搜索關(guān)于CASC2異常表達與腫瘤患者預(yù)后相關(guān)性的文獻，截止時間為2018年5月9日。英文檢索詞：long non?coding RNA、lncRNA、lincRNA、CASC2、cancer susceptibility can?didate 2、tumor、cancer、carcinoma、neoplasms。中文檢索詞：長鏈非編碼RNA、CASC2、癌易感性候選基因2、腫瘤、惡性腫瘤、癌等。該策略在不同的數(shù)據(jù)庫中進行了調(diào)整，以最大限度地檢索更多原始文獻。此外，進行手工檢索專業(yè)期刊，以補充獲取相關(guān)文獻。

1.3 文獻篩選與資料提取由2位研究員獨立提取并檢查所選原始文獻的數(shù)據(jù)。評估意見分歧通過與第3位研究員達成共識來解決。資料提取內(nèi)容主要包括：（1）納入研究的基本信息，包括研究題目、第一作者和發(fā)表時間等；（2）納入研究的基線特征，包括腫瘤類型、患者性別、樣本數(shù)、CASC2表達水平及檢驗方法；（3）結(jié)局指標：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、TNM分期及總生存期等，從文中直接提取或運用Engauge Digitizer5.1軟件從生存曲線上獲取所需數(shù)據(jù)，通過計算獲得總生存期的風險比（hazard ratio，HR）；（4）偏倚風險評價的關(guān)鍵要素。

1.4 納入研究的偏倚風險評價采用紐卡斯爾?渥太華量表（Newcastle?Ottawa scale，NOS）［7］對納入研究的偏倚風險進行評價。包括研究對象的選擇，設(shè)計分析中的可比性，暴露及結(jié)局情況。由2名研究員獨立進行風險偏倚評價，對存在的意見和分歧由第3名研究員評價解決。評分≥7分，則認為質(zhì)量較高。

1.5 統(tǒng)計學方法統(tǒng)計分析采用RevMan 5.2軟件進行。通過Q和I2測試來測量不同研究之間的異質(zhì)性。I2≥50%的概率值和P＜0.1表明存在顯著的異質(zhì)性，基于異質(zhì)性分析的結(jié)果選擇隨機效應(yīng)模型或固定效應(yīng)模型。如果研究之間存在顯著的異質(zhì)性，則使用隨機效應(yīng)模型，否則使用固定效應(yīng)模型。使用比值比（odds ratio，OR）作為匯總統(tǒng)計來分析二分類數(shù)據(jù)。通過匯集HR與其相應(yīng)的95%CI分析CASC2與癌癥患者存活之間的關(guān)聯(lián)。P＜0.05說明差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 文獻篩選流程及結(jié)果檢索英文數(shù)據(jù)庫初次共獲得93篇文獻；檢索中文數(shù)據(jù)庫初次獲得13篇文獻。通過閱讀題目、摘要進行初篩，再通讀全文進行復篩，最終納入 13 篇符合條件的文獻［4?6，8?17］，文獻篩選流程見圖1。所檢索的數(shù)據(jù)庫及檢出文獻數(shù)具體如下：PubMed（n＝34）、Web of Science（n＝29）、Embase（n＝29）、The Cochrane Library（n＝0）、OVID（n＝0）、中國知網(wǎng)（n＝3）、萬方（n＝8）、維普（n＝2）。

圖1 文獻檢索及篩選流程圖Fig.1 Flow chart of document search and screening

2.2 納入研究的基本特征和偏倚風險評價結(jié)果納入研究均分為CASC2高表達組和低表達組。預(yù)后共納入13項研究，共923例患者。13項研究均來自中國。納入研究的基本特征及風險偏倚評價結(jié)果見表1。

2.3 Meta分析結(jié)果

2.3.1 CASC2表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性共5個研究［5，9，13?15］報告了發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達情況。固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達差異無統(tǒng)計學意義（OR＝0.76，95%CI＝0.48～1.20）（圖2）。

表1 納入研究的基本特征Tab.1 Basic characteristics of the studies

圖2 描述CASC2表達與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性的森林圖Fig.2 Forest plot of the correlation between CASC2 expression and lymph node metastasis in patients

2.3.2 CASC2表達與遠處轉(zhuǎn)移的相關(guān)性共4個研究［5?6，13，16］報告了發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移組和未遠處轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達情況。固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示，發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達與未發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移組患者中CASC2的表達差異無統(tǒng)計學意義（OR＝0.74，95%CI＝0.42～1.32）（圖3）。

2.3.3 CASC2表達與TNM分期的相關(guān)性共12個研究［4?6，8?16］報告了 TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者中CASC2的表達情況。固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示，Ⅲ～Ⅳ期組患者中CASC2的表達低于Ⅰ～Ⅱ期組，其差異有統(tǒng)計學意義（OR＝0.31，95%CI＝0.23～0.4）（圖4）。

2.3.4 CASC2表達與總生存期的相關(guān)性共11個研究［4?6，8，10?12，14?17］提供了患者的總生存期。固定效應(yīng)模型Meta分析結(jié)果顯示：與CASC2高表達組相比，CASC2低表達組患者的總生存期更短，差異有統(tǒng)計學意義（HR＝0.46，95%CI＝0.37～0.58）（圖5）。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)lncRNAs參與癌細胞各種信號通路的轉(zhuǎn)導，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中起著重要作用［18］。大量研究表明lncRNAs的異常表達與癌癥患者的預(yù)后相關(guān)，如肝癌高表達轉(zhuǎn)錄本［19］和HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA［20］等被認為是預(yù)測人類癌癥不良預(yù)后的新型生物標志物。

圖3 描述CASC2表達與患者遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)性的森林圖Fig.3 Forest plot of the correlation between CASC2 expression and distant metastasis in patients

圖4 描述CASC2表達與TNM分期相關(guān)性的森林圖Fig.4 Forest plot of the correlation between CASC2 expression and TNM staging

圖5 描述CASC2表達與總生存期相關(guān)性的森林圖Fig.5 Forest plot of the correlation between CASC2 expression and overall survival time

很多研究表明CASC2在各種腫瘤的發(fā)生中扮演著抑癌基因的角色。CHEN等［17］發(fā)現(xiàn)低表達的CASC2可調(diào)節(jié)高遷移率族蛋白A2的表達從而促進垂體腺瘤細胞的增值和侵襲，抑制其凋亡。來自于WANG等［12］的研究表明CASC2表達降低時促進上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而增強肝癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。然而，WANG等［14］發(fā)現(xiàn)過表達的CASC2通過調(diào)節(jié)性別決定區(qū)Y框蛋白4從而抑制肺腺癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移及上皮間皮轉(zhuǎn)化。LIAO等［10］發(fā)現(xiàn)過表達的CASC2通過抑制Wnt/β?catenin信號通路從而抑制膠質(zhì)瘤細胞的增殖、遷移和侵襲。基于上述有關(guān)CASC2研究的結(jié)果，推測CASC2在癌癥患者中可能具有潛在的預(yù)后價值。但CASC2作為人類癌癥分子生物標志物的作用尚不清楚。

本研究利用Meta分析探討了CASC2在癌癥患者預(yù)后評估中的價值，發(fā)現(xiàn)CASC2的低表達與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移均無關(guān)。低表達的CASC2與較晚的TNM分期存在顯著相關(guān)性，且CASC2的表達還與癌癥患者總生存期存在顯著正相關(guān)，提示CASC2可能是評估癌癥患者預(yù)后的潛在生物標志物，臨床上醫(yī)生應(yīng)該更多地關(guān)注CASC2低表達的癌癥患者。

應(yīng)該承認本研究存在一些局限性：（1）所有納入的研究均來自中國，因此所獲數(shù)據(jù)可能缺乏全球推斷；（2）癌癥的類型和數(shù)量較少；（3）不同研究的低表達標準各不相同。

綜上，本研究提示CASC2的低表達與較晚的TNM分期和較短的總生存期有關(guān)，CASC2低表達可能是癌癥患者不良預(yù)后的危險因素。受納入研究的總樣本數(shù)量、文獻質(zhì)量和地域的影響，尚需開展更為高質(zhì)量的研究予以驗證上述結(jié)論。