張 程，吳姍姍，呂 丹

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,遼寧沈陽 110032)

抗核抗體是以真核細(xì)胞核內(nèi)的DNA、RNA、蛋白或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物產(chǎn)生的自身抗體。按其核內(nèi)各個(gè)分子的性能不同可將各抗核抗體區(qū)分開來，如抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)、抗組蛋白抗體、抗核仁抗體等。目前，抗核抗體靶抗原的分布已由傳統(tǒng)的細(xì)胞核成分?jǐn)U散至整個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜等結(jié)構(gòu)均可成為自身免疫系統(tǒng)的目標(biāo)抗原，無器官特異度和種屬特異度[1]。抗核抗體可特征性地出現(xiàn)在自身免疫性疾病中，對(duì)疾病的活動(dòng)性及預(yù)后、治療反應(yīng)均具有一定的臨床意義[2]。現(xiàn)有的檢測(cè)自身免疫性疾病的方法主要有間接免疫熒光法(IFA)、線性免疫印跡法(LIA)等[3]，而這些方法存在需要血清量大、費(fèi)時(shí)費(fèi)力等缺點(diǎn)[4]。近年來，液相芯片技術(shù)已得到廣泛應(yīng)用，包括對(duì)可提取核抗體的檢測(cè)均得到了認(rèn)可[5]。該法提供了一種快速而靈敏的技術(shù)手段，通過對(duì)單一微球表面進(jìn)行多種抗原的包被而實(shí)現(xiàn)相應(yīng)抗體的同時(shí)檢測(cè)，達(dá)到快速、靈敏的目的[2]。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院收治的已確診為自身免疫性疾病患者120例，其中男45例，女75例。選擇健康對(duì)照組血清90例。研究對(duì)象均已簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 AtheNA Multi-Lyte自身抗體檢測(cè)試劑盒由美國(guó)宙斯公司提供。

1.3檢測(cè)方法 液相芯片(AtheNA法)可半定量檢測(cè)的抗體包括Ro52、SSA、SSB等15種。比對(duì)方法包括IFA法和LIA法。3種檢測(cè)方法均嚴(yán)格按試劑盒說明書要求進(jìn)行操作。IFA法以任一核型滴度>1∶100為陽性標(biāo)準(zhǔn)，LIA法和AtheNA法以檢測(cè)抗核抗體譜中任一種抗體陽性為陽性標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)；采用kappa一致性檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.13種檢測(cè)方法陽性率比較 病例組AtheNA法、IFA法和LIA法檢測(cè)陽性率分別為61.7%、71.7%和50.8%;健康對(duì)照組分別為6.7%、5.6%和5.6%，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2AtheNA法與LIA法檢測(cè)15種抗體結(jié)果比較 除抗dsDNA抗體外，AtheNA法總符合率超過85.0%。2種檢測(cè)方法檢測(cè)抗dsDNA抗體具有高度一致性，其他14種抗體檢測(cè)結(jié)果一致性極佳。表明AtheNA法具有較高的靈敏度。見表2。

表1 3種檢測(cè)方法陽性率比較[n(%)]

2.3交叉反應(yīng)驗(yàn)證及標(biāo)準(zhǔn)曲線 1種微球僅針對(duì)其待測(cè)抗原發(fā)出高強(qiáng)度熒光，導(dǎo)致該種抗原只與其對(duì)應(yīng)的抗體結(jié)合而并不與其他蛋白標(biāo)志物結(jié)合，因此，抗體之間無交叉反應(yīng)存在。由于目前缺乏抗核抗體譜抗體的國(guó)際校準(zhǔn)品，所以無法通過聯(lián)合檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線去溯源，但AtheNA法可通過攜帶抗體的微球數(shù)來半定量反應(yīng)抗體水平，而LIA法無法實(shí)現(xiàn)，所以，與LIA法比較，AtheNA法能實(shí)現(xiàn)半定量檢測(cè)，提高靈敏度，滿足臨床檢測(cè)需求。

表2 AtheNA法與LIA法檢測(cè)15種抗體結(jié)果比較

3 討 論

抗核抗體檢測(cè)對(duì)自身免疫性疾病的診斷已有50多年的歷史，尤其診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡的靈敏度幾乎達(dá)100%，抗核抗體陽性對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的預(yù)測(cè)也具有較為重要的作用[6-8]。目前，常用的有免疫擴(kuò)散法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫印跡法、液相芯片法和LIA法。隨著抗原提純技術(shù)的提高，LIA法、免疫印跡法和液相芯片法被越來越多的實(shí)驗(yàn)室所采用。

液相芯片是新一代高通量生物芯片技術(shù)，因其具有高精準(zhǔn)、特異性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)可同時(shí)綜合分析多種標(biāo)志物，在自身免疫、腫瘤篩查等方面體現(xiàn)出較高的診斷價(jià)值。傳統(tǒng)的“金標(biāo)準(zhǔn)”酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)雖然靈敏度較高，但每一反應(yīng)孔只能檢測(cè)一種抗體，當(dāng)多種抗體同時(shí)檢測(cè)就變得繁瑣、費(fèi)時(shí)，AtheNA法的優(yōu)點(diǎn)：(1)高通量。液相芯片可同時(shí)檢測(cè)100種生物標(biāo)志物，可通過重組蛋白不斷更新自身抗體譜來建立診斷體系。(2)用血量少。(3)操作簡(jiǎn)便。液相芯片采用熒光分析方法，活性范圍大大增強(qiáng)，節(jié)省了洗滌和稀釋的時(shí)間，使實(shí)驗(yàn)時(shí)間大大縮短。

有研究結(jié)果表明，由于IFA法的基質(zhì)為HEP-2/猴肝細(xì)胞，細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為完整，可幾乎完全捕獲待測(cè)血清中的抗核抗體，使其檢測(cè)抗核抗體陽性率較高[9]，但其僅為定性實(shí)驗(yàn)，對(duì)臨床“灰區(qū)”患者不能確切說明問題。液相芯片技術(shù)是一種以經(jīng)過特殊編碼、可識(shí)別的微球作為生物分子(抗原、抗體、蛋白質(zhì)、核酸等)反應(yīng)及信號(hào)檢測(cè)載體的陣列分析技術(shù)。微球逐一通過檢測(cè)通道時(shí)受到雙色激光的照射，既可識(shí)別微球表面包被的分子種類；又可確定目標(biāo)分子數(shù)量，所以，可半定量確定抗體的水平，達(dá)到實(shí)現(xiàn)高精準(zhǔn)的目的[10-12]。

本研究以LIA法作為參照，采用AtheNA法對(duì)15種抗核抗體進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，2種方法具有較高的一致性。LIA法因其各模塊上抗原濃度不詳，不可根據(jù)顯色條帶的深淺度來判斷待測(cè)抗體的水平[13-15]。而液相芯片通過每個(gè)微孔板中的大量微球，再配合不同激光的發(fā)射，可較精確地區(qū)別抗體，并實(shí)現(xiàn)待測(cè)抗體的半定量檢測(cè)[16-18]。

4 結(jié) 論

液相芯片系統(tǒng)對(duì)抗核抗體的聯(lián)合檢測(cè)具有良好的性能，其對(duì)抗核抗體譜的檢測(cè)具有較好的靈敏度和特異度。