杜漢芳，許海軍，趙 穎

(十堰市太和醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.心內(nèi)科，湖北十堰 442000)

自身免疫性溶血性貧血(AIHA)是一類(lèi)由于B淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn)而使體內(nèi)產(chǎn)生抗自身紅細(xì)胞(RBC)抗體，并通過(guò)該抗體激活補(bǔ)體或直接與RBC表明抗原結(jié)合導(dǎo)致靶RBC破裂的獲得性溶血性疾病[1]。AIHA主要見(jiàn)于青年人群，危險(xiǎn)性大，嚴(yán)重者可發(fā)生高熱、急性心功能衰竭、腎衰竭等并發(fā)癥[2]。目前，對(duì)AIHA的診斷多為排他性診斷，主要檢測(cè)項(xiàng)目有網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白(Hb)、RBC形態(tài)學(xué)鏡檢、乳酸脫氫酶(LDH)和總膽紅素(TBIL)等。但因其發(fā)病機(jī)制尚未明確，且患者臨床癥狀不典型，為疾病的早期診斷及救治帶來(lái)一定困難。近年來(lái)，有研究表明，包括抗髓過(guò)氧化物酶(MPO)、抗腎小球基膜(GBM)、抗蛋白酶3(PR3)、抗Ku抗體等多種自身抗體在多種自身免疫性疾病中可被檢測(cè)到，成為疾病診斷的潛在生物學(xué)標(biāo)志物[3-5]。同時(shí)，因多個(gè)自身抗體與多種疾病間的網(wǎng)狀關(guān)聯(lián)關(guān)系，使單獨(dú)應(yīng)用某一個(gè)標(biāo)志物作為診斷指標(biāo)對(duì)自身免疫性疾病的早期診斷的難度加大，聯(lián)合多個(gè)指標(biāo)將顯著提高對(duì)疾病的診斷效能。本研究收集本院AIHA患者、其他自身免疫性疾病患者和健康體檢者血液樣本，探討了血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體診斷AIHA的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年2月至2017年8月本院收治的AIHA患者133例，所有AIHA患者的診斷均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》，其中男51例，女82例；原發(fā)性AIHA患者94例(原發(fā)性AIHA組)，繼發(fā)性患者39例(繼發(fā)性AIHA組，其中繼發(fā)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡16例、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎17例、甲狀腺疾病6例)。選擇同期患有其他自身免疫性疾病患者55例(其他自身免疫性疾病組，其中系統(tǒng)性紅斑狼瘡22例、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎13例、甲狀腺自身免疫病10例、硬皮病4例和其他疾病6例)和健康體檢者106例(體檢組)。所有研究對(duì)象均排除惡性腫瘤、急性與慢性感染、正在接受免疫治療和妊娠期婦女等。本研究的開(kāi)展經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2血液標(biāo)本收集與處理 使用乙二胺四乙酸抗凝采血管采集研究對(duì)象靜脈血2 mL用于血常規(guī)檢測(cè)；使用含有促凝劑的一次性真空采血管收集研究對(duì)象靜脈血5 mL，待血清析出后，于3 500 r/min離心15 min后收集血清標(biāo)本于-20 ℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè) 相關(guān)血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)采用DxH800血細(xì)胞分析儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)完成，相關(guān)生化指標(biāo)檢測(cè)采用全自動(dòng)生化分析儀AU5800(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司)完成。血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體檢測(cè)均采用免疫印跡法，檢測(cè)試劑均購(gòu)自歐蒙醫(yī)學(xué)診斷(中國(guó))有限公司。檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1研究對(duì)象的臨床特征 各組研究對(duì)象年齡、性別、吸煙史和飲酒史比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，Hb、RBC、LDH和TBIL比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與體檢組比較，原發(fā)性AIHA組患者Hb、RBC和繼發(fā)性AIHA組患者Hb、RBC水平均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-5.104、-3.231，-4.643、-2.311；P<0.05)，原發(fā)性AIHA組患者LDH、TBIL和繼發(fā)性AIHA組的LDH、TBIL水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.809、3.133，7.991、2.959；P<0.05)。與其他自身免疫性疾病組比較，原發(fā)性AIHA組患者Hb、RBC和繼發(fā)性AIHA組患者Hb、RBC水平均顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-4.786、-3.354，-4.576、-2.326；P<0.05)，原發(fā)性AIHA組患者LDH、TBIL和繼發(fā)性AIHA組患者LDH、TBIL水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.532、3.176，7.881、2.805；P<0.05)。而原發(fā)性AIHA組患者Hb、RBC、LDH、TBIL與繼發(fā)性AIHA組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.2各組研究對(duì)象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)比較 各組研究對(duì)象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體檢測(cè)結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與體檢組比較，原發(fā)性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體和繼發(fā)性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽(yáng)性數(shù)均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.214、4.431、7.001，5.168、9.219、6.111；P<0.05)。與其他自身免疫性疾病組比較，原發(fā)性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體和繼發(fā)性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽(yáng)性數(shù)量均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.677、4.398、6.719，5.104、9.287、6.912；P<0.05)。單獨(dú)應(yīng)用抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體診斷AIHA的靈敏度分別為74.4%、45.1%和82.0%，特異度分別為93.3%、95.3%和92.5%。與原發(fā)性AIHA比較，繼發(fā)性AIHA組患者抗GBM抗體陽(yáng)性數(shù)顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.091，P<0.05)。而各組患者抗Ku抗體檢測(cè)結(jié)果比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體與AIHA臨床特征的關(guān)系 不同性別、年齡，有無(wú)吸煙、飲酒史，不同Hb、RBC、LDH、TBIL水平AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽(yáng)性數(shù)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

2.4風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體與AIHA的發(fā)生有關(guān)(單因素分析)，在校正了年齡、性別、吸煙、飲酒等因素后血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體仍與AIHA的發(fā)生相關(guān)(多因素分析)。見(jiàn)表4。

表1 研究對(duì)象的臨床基本信息

注：與體檢組比較，*P<0.05；與其他自身免疫性疾病組比較，#P<0.05

表2 各組研究對(duì)象血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)比較[n(%)]

注：與體檢組比較，*P<0.05；與原發(fā)性AIHA組比較，△P<0.05；與其他自身免疫性疾病組比較，#P<0.05

表3 AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽(yáng)性數(shù)與臨床特征的關(guān)系(n=133)

續(xù)表3 AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽(yáng)性數(shù)與臨床特征的關(guān)系(n=133)

表4 血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體對(duì)AIHA的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

發(fā)生AIHA時(shí)機(jī)體自身產(chǎn)生抗RBC抗體導(dǎo)致RBC溶解破裂，使循環(huán)中攜帶氧的RBC數(shù)量不足而產(chǎn)生一系列癥狀，如乏力、黃疸等[6]。國(guó)外相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，AIHA患者占溶血性疾病的30.0%，國(guó)內(nèi)AIHA的發(fā)生率占獲得性溶血性貧血的第2位，僅次于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿病[7]。

AIHA的發(fā)生可由多個(gè)不同類(lèi)別的抗體參與，并以免疫球蛋白G(IgG)和IgM類(lèi)抗體為主。同時(shí)，根據(jù)所涉及的自身抗體不同，疾病的病理學(xué)表現(xiàn)又會(huì)有所不同。目前，對(duì)AIHA的診斷多為排他性診斷，大多數(shù)患者確診時(shí)體內(nèi)溶血過(guò)程已發(fā)生并造成了相應(yīng)的病理學(xué)和功能學(xué)改變，有的甚至造成了嚴(yán)重的并發(fā)癥，如急性腎衰竭、重度貧血，甚至休克等[8-9]。如何早期診斷AIHA并及時(shí)采取有效預(yù)防措施是臨床醫(yī)生關(guān)注的重點(diǎn)之一。

抗MPO、抗PR3抗體均屬抗中性粒細(xì)胞質(zhì)抗體，起初研究發(fā)現(xiàn)，主要是針對(duì)自身中性粒細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)成分?？笹BM抗體是由多種組分形成的細(xì)胞外基質(zhì)混合體，主要成分為膠原Ⅳ，最初在肺出血-腎炎綜合征患者中被發(fā)現(xiàn)。近年來(lái)，有研究表明，在原發(fā)性和過(guò)敏性肉芽腫性血管炎、抗腎小球基底膜疾病、干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、韋格納肉芽腫等多種自身免疫性疾病中檢測(cè)到患者血清抗MPO、抗PR3、抗GBM抗體陽(yáng)性[10-12]。提示抗MPO、抗PR3、抗GBM抗體在多種自身免疫疾病的發(fā)生中均具有重要作用。由于多個(gè)自身抗體與多種疾病間的網(wǎng)狀關(guān)聯(lián)關(guān)系，使單獨(dú)應(yīng)用某一個(gè)標(biāo)志物作為診斷指標(biāo)對(duì)自身免疫性疾病的早期診斷的難度加大，聯(lián)合多個(gè)指標(biāo)將顯著提高對(duì)疾病的診斷效能。

本研究通過(guò)收集本院AIHA患者、其他自身免疫性疾病患者和健康體檢者血液樣本，探討了血清抗MPO、抗GBM、抗PR3、抗Ku抗體診斷AIHA的臨床價(jià)值，結(jié)果顯示，與體檢組和其他自身免疫性疾病組比較，原發(fā)性和繼發(fā)性AIHA組患者抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽(yáng)性數(shù)均顯著增加；與原發(fā)性AIHA組比較，繼發(fā)性AIHA組患者抗GBM抗體陽(yáng)性數(shù)顯著增加。單獨(dú)應(yīng)用抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體診斷AIHA的靈敏度分別為74.4%、45.1%和82.0%，特異度分別為93.3%、95.3%和92.5%。在校正了年齡、性別、吸煙、飲酒等因素后血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體仍與AIHA的發(fā)生相關(guān)。提示血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體在AIHA的早期發(fā)現(xiàn)中具有潛在價(jià)值。

4 結(jié) 論

AIHA患者血清抗MPO、抗GBM、抗PR3抗體陽(yáng)性數(shù)與健康者和其他自身免疫性疾病患者比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值，有望為臨床AIHA患者早期診斷提供新的途徑與思路。