方 艷，何彥瑤，彭 騫

(湖南省兒童醫(yī)院,長(zhǎng)沙 410007)

復(fù)方鋅布顆粒為治療感冒類(lèi)非處方藥[1-2]，口服，用于緩解普通感冒或流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、四肢酸痛、鼻塞、流涕和打噴嚏等癥狀[3-4]。該品為兒童感冒用藥，含有葡萄糖酸鋅、馬來(lái)酸氯苯那敏、布洛芬以及適量的輔料。具有兒童更易接受的口味及外觀(guān)性狀[5-8]。

復(fù)方鋅布顆粒處方中葡萄糖酸鋅、馬來(lái)酸氯苯那敏在水中易溶，而布洛芬在水中幾乎不溶[6]。因此布洛芬的溶出對(duì)該品的生物利用度起決定作用，該品現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)溶出度控制項(xiàng)目[9]。本文參考《美國(guó)藥典》40版中復(fù)方枸櫞酸苯海拉明布洛芬片的溶出度檢查方法[10]，建立了以磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(pH=6.5±0.05)為溶出介質(zhì)，HPLC法測(cè)定復(fù)方鋅布顆粒溶出度的方法[11-12]。

1 儀器與試藥

1.1儀器 FADT-801RC全自動(dòng)溶出度儀(富科思公司)；Dionex Ultimate 3000液相色譜儀(戴安公司)；XSE205DU電子分析天平(Mettler Toledo有限公司，精度：十萬(wàn)分之一)。

1.2試藥 復(fù)方鋅布顆粒(A公司，批號(hào)：09-160307，09-170312和09-170602；B公司，批號(hào)16021981；C公司，批號(hào)20121105；D公司，批號(hào)：171002，171003和171004；E公司，批號(hào)：20171001，20171002和20171003；F公司，批號(hào)：1706131，1706132和1706133)，規(guī)格：每包含葡萄糖酸鋅0.1 g、布洛芬0.15 g及馬來(lái)酸氯苯那敏2 mg。布洛芬對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100179-201406，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.5%)；重蒸水；甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸二氫銨、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉和磷酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：InerSustain C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-磷酸二氫銨溶液[70∶30(磷酸二氫銨溶液的配制：取磷酸二氫銨2.0 g，加水適量使溶解，加磷酸1 mL，用水稀釋至1 000 mL)]；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：263 nm；進(jìn)樣量：20 μL。在該色譜條件下，布洛芬的保留時(shí)間約為6.1 min，理論塔板數(shù)大于5 000，對(duì)稱(chēng)因子為1.11，不含布洛芬的陰性樣品不干擾布洛芬的測(cè)定，見(jiàn)圖1。

2.2溶出度實(shí)驗(yàn)方法的確定 取6家生產(chǎn)企業(yè)的各1批供試品(A公司，批號(hào)09-160307；B公司，批號(hào)16021981；C公司，批號(hào)20121105；D公司，批號(hào)171004；E公司，批號(hào)20171003；F公司，批號(hào)1706133)，按照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0931溶出度與釋放度測(cè)定法第二法，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，參考《美國(guó)藥典》40版中復(fù)方枸櫞酸苯海拉明布洛芬片項(xiàng)下的條件[10]，選擇以磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(取0.2 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液250 mL與0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液50 mL，稀釋至1 000 mL，并用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5±0.05)900 mL為溶出介質(zhì)，分別于5，10，15，20，30，45和60 min時(shí)取溶出液5 mL，濾過(guò)(同時(shí)向溶出杯中補(bǔ)充相同體積溶出介質(zhì))，取續(xù)濾液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算累積溶出百分率，繪制溶出曲線(xiàn)，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖1系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)HPLC圖

A.布洛芬對(duì)照品；B.供試品；C.陰性樣品;1.布洛芬。

Fig.1 HPLC chromatograms of system suitability test

A.ibuprofen reference substance；B.sample；C.negative sample;

1.ibuprofen.

結(jié)果表明，5個(gè)生產(chǎn)企業(yè)(C公司除外，批號(hào)20121105)的復(fù)方鋅布顆粒中布洛芬在該溶出條件下溶出良好，且各企業(yè)溶出曲線(xiàn)存在較大差異，具有區(qū)分力，故選擇該條件測(cè)定其溶出度。

圖2各企業(yè)樣品溶出曲線(xiàn)

Fig.2 Dissolution curve of samples from different manufacturers

2.3溶出度測(cè)定

2.3.1線(xiàn)性范圍的考察 稱(chēng)取布洛芬對(duì)照品0.161 6 g，置于100 mL量瓶中，加入乙腈適量使溶解，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液；精密吸取儲(chǔ)備液0.5，1.0，2.5，5.0，7.5，15.0 和25.0 mL，分別置于50 mL 量瓶中，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，按照2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程A=0.026 5C+0.082 4(r=1.000)。結(jié)果表明，布洛芬質(zhì)量濃度在16.16～775.6 μg·mL-1范圍內(nèi)，布洛芬峰面積與質(zhì)量濃度有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.3.2精密度實(shí)驗(yàn) 取線(xiàn)性關(guān)系實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下第4份溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果峰面積RSD值為0.31%，表明該方法進(jìn)樣精密度良好。

2.3.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取線(xiàn)性關(guān)系實(shí)驗(yàn)項(xiàng)下第4份溶液在室溫下放置，在0，2，4，8，12 和24 h測(cè)定，結(jié)果峰面積RSD值為0.22%，表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取布洛芬對(duì)照品16.6，25.0 和33.2 mg，各3份，分別置于200 mL量瓶中，分別加入相應(yīng)比例的混合空白輔料，加乙腈10 mL使溶解，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以溶出線(xiàn)性關(guān)系項(xiàng)下的第4份溶液作為對(duì)照品溶液。精密量取上述溶液各20 μL，按照2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得平均回收率為101.0%，RSD值為0.55%。結(jié)果表明，加樣回收率良好。見(jiàn)表1。

表1布洛芬的回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1 Experimental results of the recovery test of ibuprofen (n=9)

加入量/mg測(cè)得量/mg回收率/%平均回收率/%17.8017.97101.0101.017.9218.14101.2101.216.1116.36101.6101.625.1625.65101.9101.924.5824.74100.7100.724.2824.49100.9100.932.5832.98101.2101.234.2834.28100.0100.035.2235.47100.7100.7

2.3.5定量限 取布洛芬對(duì)照品適量，加溶出介質(zhì)逐級(jí)稀釋?zhuān)M(jìn)行測(cè)定，確定布洛芬的定量限(S/N≈10)為0.42 μg·mL-1。

2.3.6樣品的測(cè)定 按照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0931溶出度與釋放度測(cè)定法第二法，取樣品，以磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(取0.2 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液250 mL與0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液50 mL，稀釋至1 000 mL，并用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5±0.05)900 mL 為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r·min-1，依法操作，45 min 時(shí)，取溶液適量，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取布洛芬對(duì)照品16.7 mg，精密稱(chēng)定，置于100 mL 量瓶中，加乙腈10 mL 使溶解，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。測(cè)定6家生產(chǎn)企業(yè)的溶出度，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2溶出度測(cè)定結(jié)果

Tab.2 Results of dissolution determination (n=6)

生產(chǎn)企業(yè)批號(hào)6個(gè)通道45 min溶出度/%123456平均溶出度/%A公司09-16030793.4094.0091.8095.1094.4091.7093.409-17031287.4088.2086.4087.9089.0089.9088.109-17060291.3092.0093.1090.8090.3090.6091.4B公司1602198198.8099.5095.9097.1098.5099.5098.2C公司2012110559.5364.6158.3862.8264.4968.6763.1D公司17100285.3092.0093.4086.1088.6085.5088.517100394.0086.8089.7085.8086.1087.5088.317100488.6084.9094.2086.7089.9085.9088.3E公司2017100183.9097.3096.7089.90102.2084.6092.42017100294.3094.1091.1094.3093.3095.6093.82017100391.1094.3093.9096.8093.5089.1093.1F公司170613194.8094.3093.9085.1096.5096.2093.5170613293.9094.7091.1089.0093.4094.1092.7170613391.4099.7091.1094.9096.4098.9095.4

3 討論

3.1溶出介質(zhì)的pH值對(duì)溶出度的影響 布洛芬的溶出度受pH 值的影響較大，文獻(xiàn)報(bào)道的以磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液(pH=5.5±0.02)作為溶出介質(zhì)的溶出實(shí)驗(yàn)[13]，溶出介質(zhì)pH值在±0.02 的范圍內(nèi)無(wú)影響，而±0.05 的變化對(duì)布洛芬的溶出影響顯著，而實(shí)驗(yàn)中由于溫度和儀器的誤差，并不易將溶出介質(zhì)pH值控制在±0.02范圍內(nèi)。而本文采用的以磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(pH=6.5±0.05)為溶出介質(zhì)，在pH值為6.45，6.50和6.55時(shí)，在45 min時(shí)的溶出量分別為93.1%，94.0%和90.4%，表明溶出介質(zhì)pH值±0.05的變化對(duì)布洛芬的溶出基本無(wú)影響，故選擇磷酸二氫鉀-氫氧化鈉緩沖液(pH=6.5±0.05)作為溶出介質(zhì)。

3.2溶出度限度的確定 根據(jù)累積溶出實(shí)驗(yàn)及6 家生產(chǎn)企業(yè)各3 批樣品溶出度測(cè)定結(jié)果，參照《中國(guó)藥典》2015 年版四部口服固體制劑的有關(guān)溶出限度的規(guī)定，制定本品溶出限度為45 min時(shí)溶出度限度應(yīng)為標(biāo)示量的75%。

4 結(jié)論

目前，國(guó)內(nèi)有多家企業(yè)生產(chǎn)該品種，溶出度檢查結(jié)果顯示，不同生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品溶出結(jié)果差異較大。本文建立的溶出度檢查方法，樣品溶出均一性良好，且對(duì)不同產(chǎn)品具有區(qū)分力，能體現(xiàn)不同生產(chǎn)工藝產(chǎn)品的溶出行為差異，在一定程度上反映了該產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量[14]，可用于控制復(fù)方鋅布顆粒的質(zhì)量。